四川动物  2019, Vol. 38 Issue (1): 87-91

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王璐萱, 巩荣艳, 曾陈娟, 丁显平
WANG Luxuan, GONG Rongyan, ZENG Chenjuan, DING Xianping
药用美洲大蠊氨基酸和维生素含量分析
Analysis of Amino Acids and Vitamins in Medicinal Periplaneta americana
四川动物, 2019, 38(1): 87-91
Sichuan Journal of Zoology, 2019, 38(1): 87-91
10.11984/j.issn.1000-7083.20180227

文章历史

收稿日期: 2018-08-01
接受日期: 2018-10-08
药用美洲大蠊氨基酸和维生素含量分析
王璐萱1 , 巩荣艳1 , 曾陈娟2 , 丁显平1*     
1. 生物资源与生态环境教育部重点实验室, 四川大学生命科学学院, 成都 610065
2. 药用美洲大蠊四川省重点实验室, 四川西昌 615000
摘要:以人工饲养条件下不同发育阶段的美洲大蠊Periplaneta americana为材料,测定了其氨基酸和维生素的含量。结果表明,美洲大蠊各虫态均含有18种氨基酸,氨基酸总量为23.27%~29.44%,人体必需氨基酸含量占44.04%~49.55%,优于联合国粮农组织/世界卫生组织推荐的40%的标准,属于优质蛋白质资源。与成虫期相比,若虫期氨基酸含量较高,色氨酸、谷氨酸、丙氨酸、天门冬氨酸和甘氨酸较为丰富。所检测的5种维生素中,维生素E含量最高,刚蜕皮成虫及雌成虫含量均超过12 mg·kg-1。美洲大蠊相关产品促睡眠、抗氧化功能可能与其富含色氨酸、谷氨酸和维生素E有关。
关键词美洲大蠊     药用昆虫     氨基酸     维生素    
Analysis of Amino Acids and Vitamins in Medicinal Periplaneta americana
WANG Luxuan1 , GONG Rongyan1 , ZENG Chenjuan2 , DING Xianping1*     
1. Key Laboratory of Bio-Resource and Eco-Environment of Ministry of Education, College of Life Sciences, Sichuan University, Chengdu 610065, China;
2. Sichuan Key Laboratory of Medicinal American Cockroach, Xichang, Sichuan Province 615000, China
Abstract: In this paper, the content of amino acids and vitamins was determined by using the American cockroach (Periplaneta americana) at different developmental stages under artificial breeding conditions. The results show that all the tested stages of P. americana contain 18 kinds of amino acids, and the total amount of amino acids ranges from 23.27% to 29.44%. The essential amino acid content is 44.04%-49.55% of the total, and this is higher than the 40% standard recommended by WHO/FAO. Therefore, P. americana belongs to the quality complete protein resource. Compared with the adult stage, P. americana at the nymph stage has higher amino acid content and more abundant tryptophan, glutamic acid, alanine, aspartic acid and glycine. Among the 5 tested vitamins, the content of vitamin E is the highest (about 12 mg·kg-1) in newly molted adult and female adults. The rich content of tryptophan, glutamic acid and vitamin E in P. americana may contribute to the sleep promotion and antioxidant efficacies of P. americana-related products.
Keywords: Periplaneta americana     medicinal insect     amino acid     vitamin    

美洲大蠊Periplaneta americana隶属于蜚蠊科Blattidae大蠊属Periplaneta,生命力强、起源古老,是繁衍最成功的昆虫之一。其入药最早记载于《神农本草经》,并被列为中品(孙星衍,1955),其味咸、性寒,有散淤、消积、解毒、利水、消肿等功能。现代药理学研究表明,美洲大蠊提取物具有抗菌(Basseri et al., 2016Ali et al., 2017)、抗炎(谭巧云等,2016张汉超等,2017周威,袁星星,2017)、抗氧化(何钊等,2015唐霞光等,2016邹俊波等,2016)、抗癌(李娇等,2017张蕊等,2017)和促进组织修复(Yang et al., 2015曾娟妮等,2016陈佳松等,2017)等药理作用,并已制成多种药物,如康复新液、心脉隆、肝龙胶囊等,临床应用效果良好。近年来,不仅从基因组、转录组、microRNA水平研究了美洲大蠊基因的结构功能和表达调控(陈佳松等,2017晋家正等,2017Li et al., 2018张文博等,2018),还在化学成分分析、活性物质追踪、药效机理等方面做了系统深入的研究工作(陈佳松等,2017高允等,2018郭昕等,2018Liu et al., 2018Zhu et al., 2018)。美洲大蠊标准化和规模化人工养殖成功为其进一步研究和开发创造了条件。

刘振江(2006)发现昆虫体内所含的氨基酸中10%~30%是人体所必需的氨基酸,占昆虫氨基酸总量的35%~50%。一些氨基酸在人体内有重要的生理和病理作用,如赖氨酸和蛋白质一起能抑制重症高血压病(龙正权,杨政水,2011);谷氨酸是哺乳动物脑内含量最高的兴奋性氨基酸,与突触的适应性和记忆以及神经和胶质细胞的死亡关系密切(杨娜等,2011王兴会等,2012)。维生素是生物体必需的微量营养成分,生物体不能合成或合成数量很少,必须不断从食物中获取,如维生素A为人体上皮组织所必需,能维持视觉正常发育;维生素E能增强免疫力和抗衰老(侯文彬,许艳萍,2015);维生素D是调控骨代谢的主要因子(周建烈,刘忠厚,2017),与多种疾病密切相关(江巍,高凤荣,2014)。大多数水溶性维生素是辅酶的重要组成部分,而辅酶能维持机体正常代谢,如维生素C具有美白养颜、预防感冒、增强免疫系统功能等作用,缺乏时可引起坏血病(李占清,魏海英,2014);B族维生素缺乏会引起营养不良、厌食、脚气病、糖尿病等(韩秀梅,祖述春,2012)。目前关于美洲大蠊不同虫态氨基酸和维生素的含量还未见报道,本研究初步测定了美洲大蠊5种虫态的氨基酸和维生素的种类及含量,以期为进一步开发利用美洲大蠊提供基础数据。

1 材料和方法 1.1 材料

美洲大蠊低龄若虫(3~4龄)、高龄若虫(7~8龄)、刚蜕皮成虫、雌成虫、雄成虫的干燥粉末均由四川好医生药业集团有限公司提供。

1.2 方法 1.2.1 水解氨基酸的测定

称取各虫态样品60 mg于水解管,加入110 mL 6 mol·L-1 HCl和3滴苯酚,常温冷却3 min后抽真空充氮气,重复3次。氮气保护下封管后于110 ℃恒温干燥箱内水解22 h,取出冷却,用去离子水冲洗水解管,合并洗液定容至50 mL,过滤,收集滤液。

取滤液1 mL,40~50 ℃真空泵抽干,残留物用1~2 mL蒸馏水溶解,再抽干,重复2次,最后抽干,用1 mL pH2.2的柠檬酸钠缓冲液溶解。吸取溶解液0.2 mL,用pH2.2的柠檬酸钠缓冲液稀释至5 mL,氨基酸自动分析仪分析。

1.2.2 色氨酸的测定

称取各虫态样品60 mg分别置于聚四氟乙烯(PTFE)水解杯中,加入0.5 mL 10%NaOH涡旋混合器上充分混匀后放入装有10 mL 10% NaOH的PTFE水解罐中,充入氮气置换空气,放入程序设置为升温时间10 min、温度90 ℃、保温时间90 min的微波水解仪中运行。待水解罐内温度降至50 ℃以下后,将水解液转移至25 mL容量瓶中冷水浴,用6 mol·L-1 HCl中和,冷至25 ℃定容,摇匀过滤后用氨基酸自动分析仪分析。

1.2.3 维生素B1的测定

取各虫态样品8 g分别置于150 mL三角瓶中,加入65 mL 0.1 mol·L-1 HCl溶解,瓶口加盖小烧杯后高压锅中120 ℃水解30 min,取出冷却。用2 mol·L-1乙酸钠调至pH4.5,加入160 g淀粉酶在50 ℃温箱内过夜。第二天取出冷却至25 ℃并定容至100 mL,混匀过滤即为提取液。

测定仪器为荧光分光光度计。设置激发波长365 nm,发射波长435 nm,激发波狭缝5 nm,发射波狭缝5 nm。

1.2.4 维生素B2的测定

各虫态样品分别取3 g于100 mL容量瓶中,加入75 mL HCl煮沸30 min,期间摇动容量瓶防止结块,冷却至室温,加入乙酸钠摇匀后用水定容至100 mL,中速干滤纸过滤,弃去最初5~10 mL滤液,收集其余滤液即为供试品。

测定仪器为荧光分光光度计。设置激发波长445 nm,发射波长530 nm。

1.2.5 维生素A和维生素E的测定

按照《食品中维生素A和维生素E的测定(GB/T5009.82-2003)》的方法,分别对美洲大蠊不同虫态粉末进行皂化、提取、洗涤和浓缩,最后检测。将乙醚液移入离心管中500 r·min-1离心5 min。上清液供高效液相色谱仪分析。

1.2.6 维生素D的测定

分别称取各虫态样品2 g于皂化瓶,加内标苯并芘溶液2.0 mL和10%抗坏血酸5 mL混成均匀糊状,再加无水乙醇30 mL和KOH溶液10 mL,沸水上皂化10 min使皂化完全,立即放入冰中冷却。提取、洗涤、浓缩等步骤同1.2.5,最后用无水乙醇定容至2 mL,供高效液相色谱仪分析。

2 结果与分析 2.1 美洲大蠊氨基酸种类与含量

美洲大蠊成虫和若虫均含有18种氨基酸,其中8种人体必需氨基酸的含量为11.05%~14.30%,低龄若虫最高(14.30%),随龄期增长,含量降低。各虫态所含人体必需氨基酸的含量占氨基酸总量的44.04%~49.55%,超过联合国粮农组织/世界卫生组织(WHO/FAO)推荐的40%的标准,说明美洲大蠊是一种比较优质的蛋白质资源。美洲大蠊色氨酸、谷氨酸、丙氨酸、天门冬氨酸和甘氨酸含量较高,特别是若虫期色氨酸含量较高,低龄若虫含量最高,为6.84%。成虫和若虫谷氨酸含量均超过2.00%(表 1)。

表 1 美洲大蠊各虫态氨基酸测定结果 Table 1 Amino acids content of Periplaneta americana at different growth stages
氨基酸 氨基酸含量/%
低龄若虫 高龄若虫 刚蜕皮成虫 雌成虫 雄成虫
天门冬氨酸# 1.99 1.92 2.01 1.54 1.84
苏氨酸* 0.89 0.85 0.86 0.70 0.84
丝氨酸 0.88 0.85 0.84 0.73 0.88
谷氨酸# 2.98 2.82 2.80 2.24 2.74
甘氨酸# 1.77 1.63 1.66 1.75 2.12
丙氨酸 2.03 1.96 1.70 1.47 2.00
胱氨酸 0.16 0.16 0.16 0.16 0.16
缬氨酸* 1.45 1.39 1.34 1.12 1.37
蛋氨酸*# 0.33 0.31 0.32 1.12 0.31
异亮氨酸* 0.86 0.81 0.80 0.27 0.80
亮氨酸*# 1.60 1.52 1.51 0.66 1.54
酪氨酸# 1.57 1.55 1.80 1.30 1.26
苯丙氨酸*# 0.87 0.83 0.92 0.69 0.81
赖氨酸*# 1.46 1.45 1.37 1.12 1.29
组氨酸 1.13 1.11 0.96 1.01 1.34
精氨酸# 1.50 1.42 1.56 1.12 1.25
脯氨酸 1.14 1.10 1.09 0.94 1.19
色氨酸* 6.84 6.15 4.92 5.37 4.64
必需氨基酸(EAA) 14.30 13.31 13.19 11.05 11.60
药效氨基酸(M) 14.07 13.45 13.95 11.54 13.16
氨基酸总量(TAA) 29.44 27.85 26.62 23.27 26.34
EAA/TAA 48.57 47.79 49.55 47.49 44.04
M/TAA 47.79 48.29 52.40 49.59 49.96
注:*人体必需氨基酸,#药效氨基酸
Notes:* essential amino acid for human body,# amino acid with medical purposes
2.2 美洲大蠊维生素分析

维生素总量在美洲大蠊刚蜕皮成虫和雌成虫体内较高,分别为16.60 mg·kg-1和15.41 mg·kg-1,而雄成虫维生素含量低于雌成虫和若虫。5种维生素中,维生素E含量最高,刚蜕皮成虫及雌成虫含量均超过12 mg·kg-1,雄成虫为8.26 mg·kg-1。维生素B2含量为2.95~4.09 mg·kg-1,而维生素B1和维生素A含量较低(表 2)。

表 2 美洲大蠊各虫态维生素测定 Table 2 Vitamin content of Periplaneta americana at different growth stages
维生素 维生素含量/(mg·kg-1)
低龄若虫 高龄若虫 刚蜕皮成虫 雌成虫 雄成虫
维生素E 9.51 9.89 12.40 12.10 8.26
维生素B2 4.09 3.69 3.87 2.95 3.38
维生素D 0.49 0.42 0.22 0.34 0.15
维生素A 未检出 未检出 0.110 0.021 0.018
维生素B1 0.024 0.023 2.0×10-4 6.8×10-4 0.027
总量 14.11 14.02 16.60 15.41 11.84
3 讨论

美洲大蠊18种氨基酸含量分析表明,总氨基酸含量为23.27%~29.44%,低龄若虫期氨基酸总含量最高,可能是因为该时期虫体需要合成多种蛋白质以促进生长发育;8种人体必需氨基酸含量占氨基酸总量的40%以上,是比较优质的蛋白质资源。在人体必需氨基酸中,色氨酸含量最高。研究表明,色氨酸不仅参与蛋白质合成和代谢调节,而且能促进大脑神经细胞分泌神经递质——五羟色胺,对血清素和褪黑激素的产生非常重要,有助于提高免疫力、促进睡眠(王继强等,2012)。药效氨基酸在人和动物体内具有一些医疗保健的特殊功效。美洲大蠊各虫态中药效氨基酸含量占氨基酸总量的47%以上,含量较高的药效氨基酸有谷氨酸、甘氨酸和天门冬氨酸。其中,谷氨酸与睡眠有关(石玉锋,虞燕琴,2013);天门冬氨酸具有解除疲劳、增进代谢、保护肝脏、加强免疫球蛋白与抗体的产生等功效(李银平等,2006)。美洲大蠊刚蜕皮成虫、低龄若虫和高龄若虫天门冬氨酸含量高于雄成虫和雌成虫,这可能与天门冬氨酸促进代谢的功能有关。

维生素E是一种脂溶性维生素,其水解产物为生育酚,是主要的抗氧化剂之一。研究显示,维生素E不但可以抗衰老、护肤美容和增强免疫力(蔡爱平,杨秀清,2004陈仲,2013),还具有抗不育、抗癌及降血压的作用(魏旭兰等,2010于保锋等,2013Mohd Mutalip et al., 2018)。美洲大蠊的抗氧化功能可能与其较高含量的维生素E有关。

参考文献
蔡爱平, 杨秀清. 2004. VE护肤霜的制备与疗效观察[J]. 中国美容医学(6): 673–674. DOI:10.3969/j.issn.1008-6455.2004.06.016
陈佳松, 陈峰, 彭锐, 等. 2017. 基于转录组测序分析美洲大蠊提取物促进小鼠创面愈合的分子机制[J]. 四川动物, 36(4): 398–403.
陈仲. 2013. 维生素C联合维生素E抗女性皮肤衰老的作用分析[J]. 牡丹江医学院学报, 34(4): 59–60. DOI:10.3969/j.issn.1001-7550.2013.04.030
高允, 梁柳春, 王瑞, 等. 2018. 美洲大蠊化学成分的研究[J]. 中成药, 40(2): 375–378. DOI:10.3969/j.issn.1001-1528.2018.02.025
郭昕, 巩荣艳, 朱娟娟, 等. 2018. 美洲大蠊乙醇提取物中原儿茶酸超高效液相色谱定量分析方法的建立[J]. 四川动物, 37(2): 185–190.
韩秀梅, 祖述春. 2012. HPLC法测定复合维生素B片中维生素B1、B2、B6的含量[J]. 中国药事, 26(8): 891–894. DOI:10.3969/j.issn.1002-7777.2012.08.028
何钊, 李娴, 孙龙, 等. 2015. 五种昆虫多糖的体外抗氧化活性[J]. 环境昆虫学报, 37(1): 61–67.
侯文彬, 许艳萍. 2015. 维生素E功能研究进展[J]. 中国医学工程, 23(2): 199.
江巍, 高凤荣. 2014. 维生素D缺乏相关性疾病研究进展[J]. 中国骨质疏松杂志, 20(3): 331–337. DOI:10.3969/j.issn.1006-7108.2014.03.026
晋家正, 李午佼, 牟必琴, 等. 2018. 药用美洲大蠊全基因组测序分析[J]. 四川动物, 37(2): 121–126.
李娇, 郭美仙, 张冰清, 等. 2017. 美洲大蠊提取物CⅡ-3对肝癌H22荷瘤小鼠作用研究[J]. 中华肿瘤防治杂志, 24(11): 739–744.
李银平, 薛雪萍, 袁春龙, 等. 2006. 葡萄籽成分与营养评价[J]. 食品与发酵工业(12): 108–113. DOI:10.3321/j.issn:0253-990X.2006.12.026
李占清, 魏海英. 2014. 分光光度法测定新鲜蔬菜中维生素C的含量[J]. 中国无机分析化学, 4(3): 79–81. DOI:10.3969/j.issn.2095-1035.2014.03.018
刘振江. 2006. 昆虫食品的开发利用[J]. 世界农业(11): 45–48.
龙正权, 杨政水. 2011. 食用昆虫的营养特性及其开发利用[J]. 科技创新导报(1): 230. DOI:10.3969/j.issn.1674-098X.2011.01.188
石玉锋, 虞燕琴. 2013. 谷氨酸在睡眠和觉醒中的作用研究进展[J]. 浙江大学学报(医学版), 42(5): 583–590. DOI:10.3785/j.issn.1008-9292.2013.05.018
孙星衍. 1955.神农本草经[M].北京: 商务印书馆: 90.
谭巧云, 满红霞, 那凯歌, 等. 2016. 美洲大蠊提取物对口腔溃疡大鼠模型的作用[J]. 中国临床药理学杂志, 32(11): 1014–1016.
唐霞光, 张春妹, 刘嘉, 等. 2016. 美洲大蠊不同提取物清除自由基及抗脂质过氧化活性研究[J]. 食品工业科技, 37(13): 83–85.
王继强, 张宝彤, 龙强, 等. 2012. 色氨酸的生理功能及在仔猪日粮上的应用研究[J]. 湖南饲料(4): 25–27.
王兴会, 杜克莘, 冯家豪, 等. 2012. 谷氨酸钠对小鼠学习记忆功能的影响[J]. 西北药学杂志, 27(5): 442–443. DOI:10.3969/j.issn.1004-2407.2012.05.019
魏旭兰, 王亦民, 袁飞锋. 2010. 维生素E抗肿瘤作用机制研究[J]. 现代诊断与治疗, 21(3): 189–191. DOI:10.3969/j.issn.1001-8174.2010.03.030
杨娜, 隋峰, 姜廷良. 2011. 神经性疾病相关的谷氨酸转运体研究进展[J]. 中国实验方剂学杂志, 17(7): 255–258. DOI:10.3969/j.issn.1005-9903.2011.07.079
于保锋, 高静雯, 赵维维, 等. 2013. 维生素E对L-NAME致大鼠高血压的影响[J]. 临床医药实践, 22(7): 519–521. DOI:10.3969/j.issn.1671-8631.2013.07.019
曾娟妮, 刘筱, 伍伟明, 等. 2016. 美洲大蠊提取液对大鼠难愈合创面VEGF表达影响的研究[J]. 中国民族民间医药, 25(19): 64.
张汉超, 张成桂, 耿福能, 等. 2017. 美洲大蠊提取物Ento-A对噁唑酮致大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用研究[J]. 中药材, 40(6): 1420–1424.
张蕊, 袁发璐, 李婷, 等. 2017. 美洲大蠊提取物对人肝癌HepG2细胞的作用机制研究[J]. 中国现代医学杂志, 27(12): 1–8. DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2017.12.001
张文博, 高洁, 麻锦楠, 等. 2018. 美洲大蠊抗菌肽AMPPA13的表达及纯化[J]. 生物技术, 28(1): 24–29. DOI:10.3969/j.issn.1673-713X.2018.01.006
周建烈, 刘忠厚. 2017. 补充钙和维生素D防治骨质疏松症的全球临床指南进展[J]. 中国骨质疏松杂志, 23(3): 371–380. DOI:10.3969/j.issn.1006-7108.2017.03.020
周威, 袁星星. 2017. 美洲大蠊提取物对慢性萎缩性胃炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响[J]. 世界华人消化杂志, 25(21): 1945–1951.
邹俊波, 桑文涛, 王芳, 等. 2016. 美洲大蠊提取物对乙醇致小鼠急性胃溃疡的预防作用[J]. 中成药, 38(11): 2325–2331.
Ali SM, Siddiqui R, Ong SK, et al. 2017. Identification and characterization of antibacterial compound(s) of cockroaches (Periplaneta americana)[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 101: 253. DOI:10.1007/s00253-016-7872-2
Basseri HR, Dadi-Khoeni A, Bakhtiari R, et al. 2016. Isolation and purification of an antibacterial protein from immune induced haemolymph of American cockroach, Periplaneta americana[J]. Journal of Arthropod-Borne Diseases, 10(4): 519–527.
Li S, Zhu S, Jia Q, et al. 2018. The genomic and functional landscapes of developmental plasticity in the American cockroach[J]. Nature Communications, 9(1): 1008. DOI:10.1038/s41467-018-03281-1
Liu J, Zhou L, He L, et al. 2018. Periplaneta americana extract may attenuate renal fibrosis through inhibiting janus tyrosine kinase 2/signal transducer and activator of transcription 3 pathway[J]. Pharmacology, 102(1-2): 1–8. DOI:10.1159/000488535
Mohd Mutalip SS, Ab-Rahim S, Rajikin MH. 2018. Vitamin E as an antioxidant in female reproductive health[J]. Antioxidants, 7(2): 22. DOI:10.3390/antiox7020022
Yang YX, Luo Q, Hou B, et al. 2015. Periplanosides A-C: new insect-derived dihydroisocoumarin glucosides from Periplaneta americana stimulating collagen production in human dermal fibroblasts[J]. Journal of Asian Natural Products Research, 17(10): 988–995. DOI:10.1080/10286020.2015.1047771
Zhu JJ, Yao S, Guo X, et al. 2018. Bioactivity-guided screening of wound-healing active constituents from American cockroach (Periplaneta americana)[J]. Molecules, 23(1): 101. DOI:10.3390/molecules23010101