笼养黑叶猴寄生虫的检查和防治研究
  四川动物  2017, Vol. 36 Issue (1): 61-64

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胡巍堃, 汪国海, 李毅峰
HU Weikun, WANG Guohai, LI Yifeng
笼养黑叶猴寄生虫的检查和防治研究
Investigation on Parasitic Infection and Prevention of Trachypithecus francoisi
四川动物, 2017, 36(1): 61-64
Sichuan Journal of Zoology, 2017, 36(1): 61-64
10.11984/j.issn.1000-7083.20160242

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收稿日期: 2016-09-08
接受日期: 2016-10-09
笼养黑叶猴寄生虫的检查和防治研究
胡巍堃, 汪国海, 李毅峰*     
梧州市园林动植物研究所, 广西梧州 543000
摘要: 开展珍稀濒危物种的寄生虫感染状况调查对该物种的保护与研究十分重要。2015年5-6月对广西壮族自治区梧州黑叶猴繁殖中心内4个饲养片区的72只黑叶猴Trachypithecus francoisi进行寄生虫调查,共采集样本199份(其中皮屑样本2份,血液样本70份,粪便样本127份)。结果发现,仅22份粪便样本中含有毛首线虫Trichuris spp.卵,虫卵数100~1 850个/g;成体猴、亚成体猴、雄性个体、雌性个体毛首线虫的感染率分别为31.25%、29.17%、31.58%和29.41%。独立样本t检验表明,感染率在成体与亚成体之间(t=1.834,df=2,P>0.05)、雄性与雌性之间的差异均无统计学意义(t=1.089,df=2,P>0.05)。采用阿苯达唑伊维菌素预混剂0.1 g·kg-1驱虫5 d后,驱虫效果达到94%,说明其驱虫效果较好。
关键词黑叶猴     寄生虫     调查     防治    
Investigation on Parasitic Infection and Prevention of Trachypithecus francoisi
HU Weikun , WANG Guohai , LI Yifeng *     
Research Institute of Garden Plants and Animals in Wuzhou City, Wuzhou, Guangxi Zhuang Autonomous Region 543000, China
Abstract: Study the prevalence of parasites is very significant for protection and conservation of endemic species. In this study, the prevalence of parasites from Francois' langurs (Trachypithecus francoisi), were investigated in 4 districts of Guangxi Wuzhou Trachypithecus francoisi Breeding Center during May to June 2015. A total of 199 samples (including 2 dander samples, 70 blood samples, and 127 feces samples) were collected from 72 langurs. The results showed that 22 feces samples were infected with 100-1 850 Trichuris (Trichuris spp.) eggs per gram. The infection rates of adult, sub-adult, male and female were 31.25%, 29.17%, 31.58% and 29.41%, respectively. The t test of independent sample showed that the infection rate of adult and sub-adult had no significant difference (t=1.834, df=2, P>0.05), as well as that between male and female (t=1.089, df=2, P>0.05). The egg reduction rate was 94% when the monkeys were treated with albendazole and ivermectin tablets at a concentration of 0.1 g·kg-1 for 5 d. Our findings suggested that the compound albendazole and ivermectin tablets were effective drugs for Trichuris infection in primates.
Keywords: Trachypithecus francoisi     parasite     investigation     prevention    

寄生虫是一种大部分时间生活在宿主体表或体内,并对宿主的生长、发育和繁殖等造成严重伤害,甚至威胁到宿主生命的一类生物(汪明,2007)。相关研究表明每年有5%~18%的动物因感染寄生虫而死亡(菅复春等,2008),因此开展动物的寄生虫感染状况调查对动物的生存至关重要。目前许多学者对圈养动物的寄生虫感染病进行了大量研究,如刘建丽等(2007)研究发现黑龙江东北虎林园内的东北虎Panthera tigris altaica粪便中含有猫弓首蛔虫Tocoxara cati和狮弓蛔虫Toxascaris leonina邹希明等(2010)研究发现北方森林动物园内的川金丝猴Rhinopithecus roxellana、猕猴Macaca mulatta、狐猴Lemur catta粪便中均含有毛首线虫Trichuris spp.卵;于三科等(2011)研究发现秦岭羚牛Budorcas taxicolor bedfordi粪便中含有矛形歧腔吸虫Dicrocoelium lanceatum和贝氏莫尼茨绦虫Moniezia benedeni等11种寄生虫;曾菊英等(2016)研究发现福州动物园内的东方白鹳Ciconia boyciana消化道中含有球虫Sphaerozoum fuscum、吸虫和绦虫。这些研究结果表明不同地理种群寄生虫感染率因品种、生活习性、饲养方法等不同而存在显著差异。

黑叶猴Trachypithecus francoisi是国家Ⅰ级重点保护野生动物,已被国际自然保护联盟(IUCN)列为濒危物种,主要分布于越南北部、贵州省和重庆市南部的喀斯特石山地区,常以植物的成熟叶、嫩叶、花、果实和种子等为食(Nadler et al., 2003Li et al., 2007)。近年人类活动的加剧导致野生黑叶猴种群数量急剧下降。为了保护该物种,我国加大了人工圈养力度,但因笼养条件下黑叶猴的活动范围相对减小,同时因其数量多、密度大,间接增加了寄生虫的感染几率和种类,这在相关研究中得到了印证。如刘洪波等(1988)发现黔灵动物园内的黑叶猴粪便中含有十二指肠钩口线虫Ancylostoma duodenale和蛔虫Ascaris lumbricoides魏兰英等(1990)发现武汉动物园内的黑叶猴肠道含有哈氏内阿米巴Entamoeba hartmanni和粪类圆线虫Strongyloides stercoralis等8种寄生虫;王成东等(2001)发现成都动物园内的黑叶猴粪便中含有毛首线虫卵;赵文娟(2010)发现太原动物园内的黑叶猴粪便中含有蛔虫;罗琴等(2015)发现广州市某野生动物园内黑叶猴消化道内含有毛首线虫、蛔虫、粪类圆线虫和绦虫。这些研究结果表明不同地区圈养条件下的黑叶猴均受到寄生虫的危害,因此开展黑叶猴的寄生虫感染状况调查对于该物种的保护与研究十分重要。本文通过对广西壮族自治区梧州黑叶猴繁殖中心的黑叶猴进行寄生虫调查,旨在进一步了解黑叶猴寄生虫的感染情况,以便提出科学有效的防治方法,从而为该物种的保护提供参考资料。

1 采样与方法 1.1 采样

2015年5-6月采集梧州黑叶猴繁殖中心4个饲养片区内48只成体(4岁以上)和24只亚成体(1~4岁)的新鲜粪便(为避免污染,接触地面的部分不采集),每个样本不少于15 g,放入已灭菌的瓶子或小塑料袋中,记录采集时间并编号。抽取后肢静脉血进行附红细胞体检查。因1岁以下的仔猴样本采集难度较高,故本次不做调查统计。

1.2 检查方法 1.2.1 直接观察法

检查黑叶猴体表易感部位有无明显脱毛、丘疹、结痂等异常情况,如有,即用刀片刮取感染部位深层屑片,切碎研磨后,将粉末放置于载玻片上,加入1~2滴10%的NaOH溶液制成涂片,镜检。

1.2.2 粪便检查

(1) 饱和盐水漂浮法称取粪便样本5 g放入烧杯,加入少量饱和盐水将粪便捣成糊状,然后添加饱和盐水至50 mL,充分搅匀,用60目铜筛过滤,将滤液装入平稳放置的试管内静置0.5 h后,取1~2滴上清液镜检。

(2) 水洗离心沉淀法称取粪便样本5 g置于烧杯中,加水制成混悬液,用纱布过滤后,将滤液放入离心机内以1 500 r·min-1的速度离心1~2 min后倾去上层液,再加水混匀、离心,如此反复直至上层液体透明后倾去,吸取沉渣镜检。

(3) 金胺酚改良抗酸染色法取米粒大小的粪便放置于载玻片上,滴加1滴蒸馏水均匀涂抹,用酒精灯加热固定制成涂片,滴入石炭酸复红染色液,5~10 min后用水冲洗,滴加10%硫酸溶液,1~10 min后用水冲洗,滴加20 g·L-1孔雀绿液,1 min后用水冲洗,待自然风干后镜检。

(4) 根据流行病学和生活史特点,同时采用水洗法、漂浮法对饲养员、果蔬饲料、青饲料进行检测,以确定寄生虫的来源。

1.2.3 附红细胞体检查

在载玻片上滴入1滴后肢静脉血制成涂片后用瑞氏染色液常规染色,待自然风干后镜检。

1.2.4 虫卵的鉴定和读数

对有寄生虫的样本进行形态特征的观察,参照相关资料和《动物寄生虫病彩色图谱》(李祥瑞,2011)对虫卵的种类进行鉴定,并采用麦克马斯特氏法(孔繁瑶,1997)读取虫卵个数。

1.2.5 驱虫方法

采用阿苯达唑伊维菌素预混剂[广东佛山正典公司生产,250 g,批号:兽药字(2012)190466205]对黑叶猴进行驱虫实验。按照每千克体质量0.1 g的比例称量阿苯达唑伊维菌素预混剂,拌水果后连续投喂感染病例猴5 d,并收集感染个体的粪便检查虫卵读数,以观察治疗效果。

1.3 数据处理

采用独立样本t检验分析不同年龄、性别组间寄生虫感染率的差异,差异显著水平设定为α=0.05,所有数据的分析和检验在SPSS 16.0和Excel 2007上进行。

2 结果 2.1 寄生虫检查结果

本次调查共采集样本199份(其中皮屑样本2份,血液样本70份,粪便样本127份)。在皮屑和血液样本中未发现寄生虫,但在22个粪便样本中发现毛首线虫卵,感染率为11%(表 1)。随机抽取18份带有毛首线虫卵的粪便样本,并采用麦克马斯特氏法检查虫卵数,结果发现每克粪便中含虫卵100~1 850个。通过对不同性别和年龄组毛首线虫卵感染率分析,发现成体猴、亚成体猴、雄猴和雌猴感染率分别为31.25%、29.17%、31.58%和29.41%,雄性的感染率高于雌性,成体的感染率高于亚成体(表 2)。独立样本t检验结果表明,成体与亚成体之间差异无统计学意义(t=1.834,df=2,P>0.05)、雄性与雌性之间差异无统计学意义(t=1.089,df=2,P>0.05)。此外在饲养员的粪便、饲料南瓜、红薯、冬青叶中未发现毛首线虫卵。

表 1 黑叶猴寄生虫感染情况 Table 1 The status of parasite infection in Trachypithecus francoisi
检查方法 检查数量 检查结果 寄生虫类型
直接观察法 72 未发现寄生虫 -
皮屑刮取法 2 未发现寄生虫 -
饱和盐水漂浮法 72 22例有虫卵 毛首线虫
离心沉淀法 63 7例有虫卵 毛首线虫
金胺酚改良抗酸染色法 72 未发现寄生虫 -
附红细胞体检查 70 未发现寄生虫 -

表 2 不同性别、年龄组黑叶猴毛首线虫卵感染率 Table 2 The infection rate of Trichurisin different gender and age groups of Trachypithecus francoisi
组别 检查数量 感染数量 感染率/%
雄性成体 24 9 37.50
雌性成体 24 6 25.00
雄性亚成体 14 3 21.43
雌性亚成体 10 4 40.00
总数 72 22 30.56
2.2 不同年龄、性别组黑叶猴驱虫结果

随着用药时间的增加,驱虫效率逐步提高,第5天时达到了94%,说明阿苯达唑伊维菌素预混剂对毛首线虫卵的灭杀效果较好(表 3)。

表 3 不同年龄、性别组黑叶猴驱虫结果 Table 3 The anthelmintic results in different age and gender groups of Trachypithecus francoisi
编号 年龄 性别 毛首线虫卵数/(个/g)
第1天 第2天 第3天 第4天 第5天
306 亚成体 100 0 0 0 0
314 亚成体 100 0 0 0 0
272 成体 - 200 200 50 0
185 成体 1 850 1 200 900 450 200
292 亚成体 400 400 100 0 0
295 亚成体 150 100 0 0 0
299 亚成体 300 300 0 0 0
255 成体 200 200 100 0 0
201 成体 100 0 0 0 0
223 成体 150 100 50 0 0
232 成体 100 100 0 0 0
99 成体 200 100 50 0 0
A193 成体 400 0 0 0 0
211 成体 300 0 0 0 0
318 亚成体 500 0 0 0 0
241 成体 300 0 0 0 0
239 成体 600 0 0 0 0
261 成体 250 0 0 0 0
3 讨论

毛首线虫是主要寄生在灵长类动物胃部,影响动物生长发育,甚至可致动物死亡的一种寄生虫(Gillespie et al., 2005Melfi & Poyser,2007)。Karere和Munene (2002)、Alex等(2003)研究发现不同地区和种类的灵长类动物均感染多种线虫,表明线虫病是一种全球性寄生虫病。本次调查中仅检查出毛首线虫卵,这与刘洪波等(1988)、魏兰英等(1990)王成东等(2001)赵文娟(2010)罗琴等(2015)的研究结果存在明显差异,这可能与繁殖中心的地理位置和饲养方法有关。梧州黑叶猴繁殖中心坐落于远离市区的云龙公园内,游客较少,且园内仅饲养黑叶猴,减少了黑叶猴与外界病原接触的机会,同时中心每天固定对笼舍进行清洗,降低了寄生虫在笼舍内传播的几率。此外,本次使用镜检法进行调查,由于镜检法在血涂片制作中对操作人员的技术水平要求较高,血涂片制作的质量会对寄生虫检出率产生直接影响(Valkiunas et al., 2008);该方法灵敏性弱,当样本中寄生虫密度较低时,镜检不易检视到寄生虫从而低估寄生虫的感染率(Valkiunas,2004),因此后期应采用镜检法与其他方法(如:分子检测)相结合,以减少因人员操作、不同仪器操作等带来的实验误差,提高研究结果的准确性。

本研究中采用阿苯达唑伊维菌素预混剂对黑叶猴进行驱虫的疗效较好,这与部分研究者的研究结果相似(菅复春等,2008哈斯苏荣等,2012李健等,2013王颂萍,尹洪欣,2014)。但有1例病例猴在投喂5 d后,其粪便中仍能检出毛首线虫卵,这一方面可能与本次实验的次数及驱虫药剂的单一性有关,后期应加大对驱虫实验的次数及平行采用多种驱虫剂(如:复方甲苯咪唑和芬苯咪唑等)对患病猴进行治疗,以便找出最佳治疗药剂;另一方面也可能与药物使用的方式有关,王颂萍和尹洪欣(2014)研究发现,皮下注射阿苯达唑伊维菌素比口服的疗效更显著,因此后期应同时采用口服和皮下注射的方式对黑叶猴进行治疗。此外,应加大对笼舍场地和劳动工具的消毒力度,并及时对患病猴进行驱虫治疗,防止病情扩散感染。

致谢: 感谢广州动物园的李少基老师、陈徇姣老师在虫体识别工作上给与的帮助,谨此致谢。
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