文章信息
- 王文辉, 齐元玲, 徐谦, 任海朋.
- Wang Wenhui, Qi Yuanling, Xu Qian, Ren Haipeng.
- 肿瘤转移抑制基因KISS-1蛋白、基质金属蛋白酶-2和血管内皮生长因子在结肠癌组织中的表达及临床意义
- Expression and clinical significance of kisspeptin-1, matrix metalloproteinase-2 and vascular endothelial growth factor in tissue of colon cancer
- 中华流行病学杂志, 2016, 37(3): 415-417
- Chinese Journal of Epidemiology, 2016, 37(3): 415-417
- http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2016.03.026
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文章历史
- 收稿日期: 2015-10-20
结肠癌发病率及死亡率在我国有上升趋势,绝大多数患者被临床诊断时已为中晚期[1]。临床上对中早期结肠癌患者多采用根治术结合放化疗,然而对晚期结肠癌的治疗效果不明确。因此早期诊断对结肠癌患者的预后具有重要意义[2]。研究表明[3, 4],肿瘤转移抑制基因KISS-1蛋白(KISS-1)对肿瘤细胞的迁移和蠕动有抑制作用,基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)在肿瘤细胞侵袭转移过程中有促进作用,血管内皮生长因子(VEGF)低水平表达可维持血管密度和渗透功能,与肿瘤的发展、转移和分期明显相关。为此本研究采用免疫组织化学法(SP法)检测结肠癌肿瘤组织中KISS-1、MMP-2和VEGF的表达,并分析其与病理特征的相关性,为临床早期诊断和预后提供实验基础。
资料与方法1. 临床资料: 选择2009年1月至2010年6月在潍坊市人民医院行结肠癌切除术,病理学证实为结肠癌且术前未接受放化疗的患者60例作为观察组。其中男性39例,女性21例;年龄38~67岁,平均(55.8±8.7)岁;高分化腺癌10例,中分化腺癌36例,低分化腺癌14例;Ⅰ期5例,Ⅱ期22例,Ⅲ期27例,Ⅳ期6例;淋巴结转移27例。另选择60例良性结肠疾病手术患者切除组织作为对照组,其中男性35例,女性25例,平均年龄(56.4±9.4)岁。两组患者性别和年龄构成等差异无统计学意义(P<0.05)。
2. 免疫组织化学法(SP法):SP法严格按照试剂盒配套操作说明进行,经脱蜡-修复(兔抗人KISS-1多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司,鼠抗人MMP-2单克隆抗体和鼠抗人VEGF单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司),阴性对照采用PBS缓冲液。结果判定:采用双评分半定量法评价,分为着色强度评分(0分:未着色,1分:淡黄色,2分:棕黄色,3分:棕褐色)和染色评分(取×400倍显微镜下随机选取5个视野,阳性细胞比例;1分:阳性率≤25%,2分:阳性率为26%~50%,3分:阳性率为51%~75%,4分:阳性率为76%~100%),最终评分取着色强度评分×染色评分,≥6分为阳性,<6分为阴性。
3. 质控控制:入组患者外科手术均由同一外科手术团队完成,KISS-1、MMP-2、VEGF的检测采用同一仪器,由同一检验团队完成,结果判读由2名以上经验丰富的医师同时进行,并取平均分作为检测结果。数据录入由专人负责,且安排1人核对。
4. 统计学分析:研究数据采用SPSS 13.0软件进行统计学分析,KISS-1、MMP-2和VEGF与临床病理特征的关系采用χ2检验;KISS-1、MMP-2和VEGF三者间的表达相关性采用Spearman等级相关检验;P<0.05为差异有统计学意义。
结 果1. KISS-1、MMP-2和VEGF表达: 观察组KISS-1阳性表达率(31.7%)明显低于对照组(73.3%),差异有统计学意义(χ2=23.416,P<0.001);观察组MMP-2和VEGF的阳性表达率(58.3%和78.3%)明显高于对照组(16.7%和33.3%),差异有统计学意义(χ2=27.469,P<0.001;χ2=25.817,P<0.001)。见表 1。
2. KISS-1、MMP-2和VEGF的表达与结肠癌患者临床病理特征的关系:结肠癌组织中KISS-1的表达与患者性别、年龄无明显关系,差异无统计学意义(P>0.05);其与癌组织学分型和TNM分期有明显关系,差异有统计学意义(χ2=8.997,P=0.011;χ2=6.163,P=0.013),见表 2。癌组织学分型和TNM分期引入多因素回归方程,结果显示,KISS-1表达与组织学分型和TNM分期呈正相关。
结肠癌组织中MMP-2的表达与患者性别、年龄无明显关系,差异无统计学意义(P>0.05);其与癌组织学分型和TNM分期有明显关系,差异有统计学意义(χ2=8.519,P=0.014;χ2=9.160,P=0.002),见表 2。癌组织学分型和TNM分期引入多因素回归方程,结果显示,MMP-2表达与组织学分型和TNM分期呈负相关。
结肠癌组织中VEGF的表达与患者性别、年龄无明显关系,差异无统计学意义(P>0.05);其与癌组织学分型和TNM分期有明显关系,差异有统计学意义(χ2=16.577,P<0.001;χ2=10.523,P=0.001),见表 2。癌组织学分型和TNM分期引入多因素回归方程,结果显示,VEGF表达与组织学分型和TNM分期呈负相关。
3. 结肠癌组织中KISS-1、MMP-2和VEGF的关系:KISS-1与MMP-2和VEGF在结肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.345,P=0.009;r=-0.428,P<0.001),MMP-2与VEGF在结肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.311,P=0.013)。
讨 论近年来,国内外已有相关文献报道了KISS-1、MMP-2、VEGF与多种恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关,KISS-1对非小细胞肺癌进展起抑制作用,MMP-2和VEGF参与非小细胞肺癌进展,与其呈正相关;少见其与结肠癌浸润转移关系的研究报道[5]。
KISS-1为转移抑制基因,其表达的产物为人孤儿G-蛋白耦联受体的内源性配体,其与受体结合可使细胞内磷脂酶-C介导的ERK等信号传导途径激活,从而影响细胞增殖和转移,对肿瘤细胞迁移和蠕动功能[6]。临床研究报道[6],KISS-1在正常组织的表达明显高于肿瘤组织,提示其可作为肿瘤筛查及其预后判断的指标。MMP-2为基质金属蛋白酶中的明胶酶类,其可降解细胞外基质和基底膜结构蛋白胶原,使细胞外基质松散和破坏基底膜,从而有利于肿瘤细胞通过松散的细胞外基质和破坏的基底膜,引起肿瘤细胞扩散和浸润,导致肿瘤侵袭和转移[7]。VEGF是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子,可在体内诱导血管新生,是被证实了的有促进血管内皮细胞增生的作用。本组研究显示,正常组织中KISS-1表达明显高于肿瘤组织,肿瘤组织中MMP-2和VEGF表达明显高于正常组织[8]。KISS-1与结肠癌组织学分型和临床分期明显相关,组织学分型越低,其表达越低;随临床分期的增加,其表达降低。MMP-2、VEGF与结肠癌组织学分型和临床分期明显相关,组织学分型越低,其表达越高;随临床分期的增加,其表达上升。说明KISS-1可抑制肿瘤的进展,MMP-2和VEGF的高表达,可促进结肠癌组织的进展和转移。KISS-1与MMP-2和VEGF呈负相关,MMP-2与VEGF呈正相关。
综上所述,KISS-1、MMP-2和VEGF在结肠癌组织的表达与结肠癌的分化程度和临床分期具有明显相关性,随肿瘤分化程度升高,KISS-1表达增加,MMP-2和VEGF表达减少;随肿瘤分期的增加,KISS-1表达减少,MMP-2和VEGF表达增加。由此可见,KISS-1、MMP-2和VEGF可作为结肠癌临床诊断、病理分期和预后判断的参考指标。
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