研究显示，白细胞介素-28B（IL-28B）基因的一研究显示，白细胞介素-28B（IL-28B）基因的一些单核苷酸多态性（SNP）位点与HCV 感染者的 HCV自发清除、慢性感染和治疗效果密切关联^{[1, 2, 3]}。 细胞膜上的一种载体蛋白-平衡性核苷转运载体1 （equilibrative nucleoside transporters 1，ENT1）对利 巴韦林在肝细胞中的转运和摄入起重要作用，ENT1基因多态性可能影响抗HCV治疗效果^[4]。

HIV/HCV 合并感染已成为艾滋病患者死亡的 主要原因之一^[5]。本研究对湖南省HIV/HCV 合并 感染者IL-28B和ENT1 基因多态性进行研究。

1. 研究对象：湖南省HIV-1/HCV 合并感染者， 共107 例。将研究对象分为两组：①慢性丙肝组：诊 断标准符合卫生部颁布的《丙型病毒性肝炎诊断标 准》（WS 213-2008），HCV 抗体阳性超过6 个月， HCV-RNA 仍为阳性。②自发清除组：HCV抗体阳 性，而HCV-RNA阴性，没有慢性丙肝病史。两组均 未接受干扰素联合利巴韦林抗病毒及抗反转录病毒 治疗。同时收集两组人群人口学、感染途径、肝功 能、CD₄^＋T淋巴细胞资料。

2. 实验室检测：收集两组研究对象EDTA抗凝 血，检测CD₄^＋T 淋巴细胞后分离血浆和淋巴细胞富 集液，-70 ℃保存待检。

（1）HCV抗体检测：用酶联免疫吸附试验检测， 试剂为珠海丽珠试剂股份有限公司的HCV抗体诊 断试剂盒。

（2）HCV核酸定量和基因分型：采用实时荧光 定量PCR 方法检测，检测下限为15 IU/ml。试剂由 上海复星长征医学科学有限公司提供，仪器为美国 ABI公司的7500Fast荧光定量PCR仪。

（3）IL-28B和ENT1 基因多态性分析：采用德国 Qiagen 公司的全血DNA 提取试剂盒提取基因组 DNA，利用多重PCR 扩增目的基因、多重连接酶检 测反应连接基因片段，测序，然后对IL-28B基因的3 个SNPs 位点（rs12980275、rs12979860 和rs8099917） 和ENT1 基因的1 个SNP 位点（rs760370）进行分 型。引物rs12980275（FP：5′-CTA TTA ACC CCT CCC GCT AC-3′和RP：5′-ATG AGG TGC TGA GAG AAG TC-3′）；rs12979860（FP：5′- TCG TGC CTG TCG TGT ACT GA-3′和RP：5′-AGC GCG GAG TGC AAT TCAAC-3′）；rs8099917（FP：5′-CAA TTT GTC ACT GTT CCT CC-3′和RP：5′-ACT GTA TAC AGC ATG GTT CC-3′）；rs760370（FP： 5′- TTG AGG GAA CGT GTA TGG TG -3′和RP： 5′- CCA AGC TTA CTT GGG TGG AG -3′）。PCR 反应条件：95 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s，53 ℃ 1 min， 65 ℃ 30 s，35 个循环；65 ℃ 10 min。

（4）CD₄^＋T 淋巴细胞计数：采用美国BD公司生 产的FACSCalibur流式细胞仪和相关试剂。

3. 统计学分析：用SPSS 19.0 软件处理数据，计 量资料用x±s 表示，采用t 检验；计数资料用χ²检验， 以P＜0.05 为差异具有统计学意义，理论频数＜5 时 使用Fisher 精确检验。对样本人群中IL-28B 和 ENT1 基因的SNPs进行H-W遗传平衡分析使用χ²检 验。SNPs 间的连锁不平衡（linkage disequilibrium， LD）用Haploview 4.2软件分析^[6]。

1. 一般特征：107 例HIV/HCV合并感染者中，男 性83 例，女性24 例，年龄为（36.84±7.2）岁，平均 CD₄^＋T淋巴细胞数为（282.0±196.7）cells/μl，主要为 静脉吸毒途径感染（83 例，占77.5%）。其中慢性肝 炎组80 例，自发清除组27 例，两组年龄、性别、 CD₄^＋T淋巴细胞数和感染途径差异无统计学意义， 肝功能指标ALT和AST差异有统计学意义，总胆红 素（Total Bilirubin，TB）和血小板（Platelet，PLT）差异 无统计学意义。慢性肝炎组的平均HCV-RNA （log10）含量为5.90 IU/ml，其中18 例为HCV 基因1 型感染，见表 1。

表 1 107 例HIV/HCV合并感染者的一般特征

注：a 由于例数太少，将静脉吸毒与其他3 种途径合并进行2×2 的χ2检验；括号外数据为人数，括号内数据为构成比（%）

表选项

2. IL-28B和ENT1 基因SNPs 位点H-W遗传平 衡分析：107 例HIV/HCV 合并感染者中，rs12980275 位点AA型90 例（84.1%），AG型15 例（14.0%），GG 型2 例（1.9% ）；rs12979860 位点CC 型90 例 （84.1%），CT 型16 例（15.0%），TT 型1 例（0.9%）；rs8099917 位点TT 型90 例（84.1%），TG 型16 例 （15.0%），GG型1 例（0.9%）；rs760370 位点AA型60 例（56.1%），AG 型39 例（36.4%），GG 型8 例 （7.5%）。H-W遗传平衡检验显示，慢性肝炎组和自 发清除组均P＞0.05，4 个基因型频率符合遗传平衡 法则，分布均匀，具有群体代表性。

3. IL-28B和ENT1 基因的SNPs 与HCV自发清 除的相关性分析：对慢性肝炎组和自发清除组 IL-28B 基因的3 个SNPs 位点rs12980275、 rs12979860 及rs8099917 的基因型和3 者的单体型 （AA，CC，TT）进行比较，均P＜0.05，差异有统计学 意义，在自发清除组中rs12980275 位点的AA 基因 型、rs12979860 位点的CC基因型、rs8099917 位点的 TT 基因型以及3 者的单体型（AA，CC，TT）频率均 为100%，高于慢性肝炎组，差异有统计学意义。而 rs760370 的基因型在两组间差异无统计学意义，P＞ 0.05，见表 2。

表 2 IL-28B和ENT1 基因的4 个SNPs位点与HCV自发清除的关系

注：a 由于例数太少，将AA，CC，TT组与其他3 组合并进行2×2 的r2检验；其余同表1

表选项

4. IL-28B 和ENT1 基因4 个SNPs 的LD 分析： 在IL-28B 基因3 个位点rs12980275、rs12979860 和 rs8099917 的基因型分别以AA、CC 和TT 为主， rs12980275 和rs12979860、rs12980275 和rs8099917 的r²＝0.94，rs12979860 和rs8099917 的r²＝1.00，3 个 位点间存在高度LD。ENT1 基因的rs760370 位点与 这3个位点的r²远小于0.50，LD程度低，见图 1。

注：方格中数字代表r2值，其中空方格r2＝1.00 图 1 IL-28B和ENT1 基因4 个SNPs位点的LD分析

图选项

本研究显示，湖南省HIV/HCV合并感染人群的 IL-28B的rs12980275、rs12979860 和rs8099917 主要基因型分别为AA、CC和TT型，均占84.1%，次要基 因型分别为AG/GG、CT/TT 和TG/GG。在HCV 自 发清除组，3 个SNPs 位点均为主要基因型，未发现 其他基因型。而在慢性肝炎组，主要基因型频率 均＜80%，提示IL-28B的rs12980275、rs12979860 和 rs8099917 主要基因型（AA、CC 和TT 型）可能与 HCV自发清除相关。本研究还显示，IL-28B基因的 3 个SNPs 存在着高度LD（r²＞0.94），提示可选择某 个位点作为标签SNP预测HCV感染后的转归。

国内外关于中国人群的IL-28B基因型分布与 本研究稍有所不同^{[1, 7, 8, 9]}。Thomas 等^[1]发现在华裔人 群中rs12979860 的CC 基因型约占93.6%～97.5%， 而非洲裔人群只占23.1%～54.8%。而Rao 等^[8]发现 在中国河北省有偿献血人群中rs12980275 的AA基 因型和rs8099917 的TT 基因型分别占86.0% 和 86.7%，与本研究基本一致，但是rs12979860 的CC 基因型只占48.5%，远低于本研究数据，可能与研究 人群来源、地区和种族等因素有关。Rao等^[8]的研究 显示，rs12980275、rs12979860 和rs8099917 呈现高度 LD，与本研究一致。国外对HCV感染人群进行全 基因组关联分析，研究发现宿主基因IL-28B变异在 HCV 感染后的自发清除方面起到关键作用^{[1, 10, 11, 12]}。 Rauch 等^[11]对347 例HCV 自发清除者和1 015 例慢 性HCV 感染患者研究显示，在IL-28B 附近有7 个 SNPs 位点与HCV自发清除相关，最有意义的能强 烈预测HCV自发清除的位点是rs8099917。IL-28B 编码的干扰素-λ3 主要功能包括抗病毒、抗细胞增 值和调节适应性免疫应答，而IL-28B基因编码区上 游的位点rs12980275、rs12979860 和rs8099917 的主 要基因型携带者有较高的HCV自发清除率，一般认 为在DNA的启动子或增强子附近位点对基因转录 有很大影响，推测这3 个SNPs 可能影响了IL-28B基因的表达水平，从而影响宿主干扰素-λ的合成有 关。但是本研究也发现，即使在IL-28B基因的3 个 SNPs 的主要基因型中，也只有30.0%（27/90）的携带 者发生了HCV自发清除，所以不能只依靠基因多态 性进行HCV感染后转归预测，应结合病毒基因型、 病毒载量、种族、临床症状等进行综合评判。

Morello 等^[4]发现ENT1 基因rs760370 位点的 GG基因型更容易获得抗HCV治疗的快速应答。但 在本研究中，rs760370 的基因型分布在慢性肝炎组 和自发清除组中的差异无统计学意义，提示其与 HCV自发清除无关。

对于HIV/HCV 合并感染者来说，首先进行抗 HIV 治疗还是抗HCV治疗一直存在争议。在HCV 单独感染者有20%～30%会发生自发清除^[13]，本研 究中也有25.2%（27/107）的HIV/HCV合并感染者发 生了HCV自发清除，提示即使感染了HIV，HCV感 染仍有一定比例自愈，所以应进一步开展研究，比较 HIV/HCV合并感染者和HCV单独感染者的HCV自 发清除率及影响因素。本研究显示，IL-28B基因多 态性对HCV自发清除具有很强的预测价值，建议针 对携带IL-28B次要基因型的HIV/HCV合并感染者 立即开展抗HCV 治疗，因为该人群不太可能发生 HCV自发清除，而对携带主要基因型的感染者可以 根据临床症状和CD₄^＋T淋巴细胞数首先开展抗反转 录病毒治疗，确定HCV 无法自发清除后再进行抗 HCV治疗。