本研究采用多位点序列分型（MLST）技术分析上海地区 2005－2009 年脑膜炎奈瑟菌的优势基因型，以该优势型别的 菌株作为靶菌，检测健康人群对于该菌株的血清杀菌力水 平，评价本地区的疫苗免疫效果。

1. 材料与方法：

（1）试剂及仪器：质控血清由中国疾病预防控制中心传 染病预防控制所提供。幼兔补体购自美国Pel-Freez 公司。 引物合成和测序由生工生物工程（上海）股份有限公司完 成。菌液比浊仪购自德国Siemens公司。

（2）实验方法：采用Neisseria PubMLST 网站（http：// pubmlst.org/neisseria/）公布的引物和扩增、测序条件对上海 地区2005－2009 年脑膜炎奈瑟菌进行MLST，获得菌株或标 本的序列型（ST 型）及相应的克隆群信息。按照文献^[1]进 行血清杀菌力试验。其中第1 孔为1 ∶ 4，第2 孔为1 ∶ 8，以此 类推，第12 孔为1 ∶ 8 192。在各组对照成立的前提下，将能 够杀死≥50%菌体的最大血清稀释度认定为该待检血清的 杀菌滴度。滴度≤1 ∶ 4 时，按照1 ∶ 2 计算；滴度≥1 ∶ 8 192 时，按照1 ∶ 8 192计算。抗体滴度≥1 ∶ 8 为具有保护力^[1]。

（3）统计学分析：采用SPSS 20.0 软件进行分析。

2. 结果：

（1）靶菌选择：根据2005－2009 年上海市流行性脑脊髓 膜炎（流脑）确诊病例的血清群分布，C 群占62.2%（23/37）， 为优势血清群。对C群菌株及阳性标本进行MLST分型显 示，ST-4821 占85%（17/20），为C 群中的优势序列型。选择 序列型为ST-4821 的菌株08003 作为血清杀菌力试验的靶菌 （分离自1 名6 岁流脑患者的血液标本）。

（2）地区选择：根据2005－2009 年上海市报告的流脑病 例数在17 个区（县）的分布，结合不同区（县）的地理位置，在 崇明县（流脑报告病例数n＝1）、闸北区（n＝2）、金山区（n＝ 3）和浦东新区（n＝20）随机抽取7 个年龄组（＜1、1～、3～、 5～、7～、15～19 和＞20 岁）的健康人群，每个人群抽取30 份 血清，于2009 年10 月（流脑流行前期）采集血清。

（3）血清抗体水平：对2009 年所采集的840 份血清进行 检测，其C群菌株杀菌力抗体效价为＜1 ∶ 4～≥1 ∶ 8 192，几 何平均滴度（GMT）为1 ∶ 4.63，平均保护率为28.33%。对不 同年龄组的血清抗体效价进行分析，＜1 岁组最高，GMT为 1 ∶ 8.09；＞20 岁与其他年龄组相比，GMT差异有统计学意义 （P＜0.005）。7～14 岁组的抗体保护率最高，为38.33%；＞20 岁组最低，为11.67%，两组差异有统计学意义（P＜0.005），见 表 1。浦东新区的血清抗体效价GMT为1 ∶ 10.76，明显高于 其他3 个区（县）；而崇明县的血清保护率为58.10%，明显高 于其他3 个区。对不同年龄组进行分析显示，崇明县≤20 岁 各组血清保护率均高于40%，＞20 岁组为20%；浦东新区仅 在＜1 岁组的血清保护率＞50%，该年龄组的GMT 为1 ∶ 92.63，远高于其他年龄组；闸北区和金山区的血清保护率较 低，各年龄组的保护率不高于20%（表 2）。

表 1 2009年上海市不同年龄组健康人群的C群脑膜炎奈瑟菌抗体水平

表选项

表 2 2009 年上海市部分区县健康人群C群脑膜炎奈瑟菌血清杀菌力抗体GMT和保护率

表选项

3. 讨论：本研究采用上海地区流行株作为靶菌检测脑膜 炎奈瑟菌杀菌力抗体水平，就全市C群菌株抗体平均水平而 言，其针对ST-4821 型菌株的GMT和保护率非常低，说明在 免疫接种策略调整后2 年，人群对C 群流脑的免疫力较差。 对不同年龄的人群进行分析，发现＜1 岁和7～14 岁组的GMT 和保护率相对其他年龄组高，＞20 岁组的保护率最 低。2005－2009 年上海地区＜1 岁的C群流脑确诊病例仅有 1 例（4.34%），7～14 岁的有3 例（13.0%），而＞20 岁的有9 例 （39.14%）。本研究选取了4 个具有不同数量流脑病例的县 （区）进行研究，其抗体水平也呈现出较大的差异。尽管抗体 效价不高，但是崇明县的流脑血清抗体保护率最高 （58.10%），而金山区的抗体效价和保护率最低（8.10%）。此 次检测的健康人群C群菌株抗体水平反映了上海市调整流 脑免疫规划之后，人群对C群流脑的保护力整体较为低下， 今后仍需提高疫苗免疫接种覆盖率，密切关注人群的血清杀 菌力抗体水平，并动态掌握流脑菌群的变迁，为预防和治疗 提供科学依据。