降香为豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T. Chen树干和根的干燥心材^[1]，为化瘀止血、理气止痛之良药。降香药材资源主要分布在海南、广东、广西、福建、云南和中国台湾等地^[2]。现代药理作用研究表明，降香具有抗氧化^[3]、抗炎^[4]、抗菌^[5]、抗肿瘤^[6]、抗血小板聚集^[7]、抗心肌缺血^[8]等药理作用。近年来，降香价格不断攀升，导致资源极度短缺^[9]，市场上的降香药材主要是红木加工品下脚料，并且具有人工香料气味，造成市售降香质量问题凸显^[10]。降香主要含有黄酮类、挥发油等成分^[11]，目前，关于降香药材含量测定大多侧重单一或某一类成分，难以全面评价其质量。如牛玉秋^[12]运用HPLC法测定降香中木犀草素和异甘草素的含量，王书玉等^[13]运用HPLC法同时测定降香中鹰嘴豆芽素A等5个成分的含量，但测定成分较少，测定时间较长，难以综合评价所测样品的质量。

主成分分析(principal component analysis，PCA)运用降维方法，在不损失或较少原有指标信息特征的情况下，将多个具有相关性的指标转换成少数几个相互独立的综合指标，从而使繁多的求解目标简化^[14]。近年来，主成分分析法已广泛应用于中药质量评价^[15]，因此，作者利用UPLC高效快速的特点，建立了同时测定降香中甘草素等7个黄酮类成分含量的双波长-UPLC法，同时运用主成分分析进行评价，为降香的质量评价提供参考。

1 仪器与试药

Waters ACQUITY UPLC H-Class系统(PDA检测器，Waters公司)；KQ-5200E型超声波清洗器(40 kHz，200 W，昆山市超声仪器公司)；DFT-100手提式高速中药粉碎机(温岭市林大机械有限公司)；Milli-Q Reference超纯水系统(Merck公司)；XS225A万分之一天平(d=0.1 mg，Precisa公司)；BP211D十万分之一天平(d=0.01 mg，Precisa公司)。

甘草素(批号131026)、异甘草素(批号130729)、紫铆花素(批号FGMKA-FB)、柚皮素(批号141011)、漆黄素(批号wkq16052304)、芒柄花素(批号wkq16082102)和鹰嘴豆芽素A (批号150712)的对照品均购自四川省维克奇生物科技有限公司，纯度均≥98.0%；降香对照药材(批号952-9201)购自中国食品药品检定研究院；降香药材购自不同地方，经广州中医药大学中药学院林励研究员鉴定为豆科植物降香檀Dalbergia odorifera T. Chen干燥心材，样品信息详见表 1。甲醇、乙腈(Merck公司)为色谱纯，磷酸(天津科密欧化学试剂有限公司)为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 混合对照品溶液的制备

分别取甘草素、异甘草素、紫铆花素、柚皮素、漆黄素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的对照品适量，精密称定，加入甲醇制成上述7个成分质量浓度分别为1.750、1.038、1.013、0.725、1.025、3.188、1.900 mg·mL^-1的混合对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取降香样品0.5 g，精密称定，置50 mL锥形瓶中，加入石油醚25 mL，超声(40 kHz，200 W)处理30 min，滤过，滤渣挥干溶剂后，精密加入甲醇25 mL，称量，超声(40 kHz，200 W)提取30 min，取出，放冷，再称量，用甲醇补足减失的量，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.3 色谱条件

采用Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱(1.7 μm，3.0 mm×100 mm)；流动相：乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱(0~14 min，24%A→25%A；14~15 min，25%A→31%A；15~19 min，31%A→33%A；19~19.5 min，33%A→42%A；19.5~26 min，42%A→46%A)，流速：0.3 mL·min^-1；柱温：35 ℃；检测波长：270 nm和370 nm；进样量：2 μL。

2.4 系统适用性试验

取空白溶剂、混合对照品溶液、供试品溶液各2 μL，按“2.3”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图 1。结果表明，在该色谱条件下，理论塔板数按甘草素计算不低于20 000，各峰与相邻峰的分离度均大于1.0，各成分测定不受其他组分的干扰。

2.5 线性关系考察

依次精密量取混合对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分别置25 mL量瓶中，用甲醇定容，摇匀，配制成系列浓度的混合对照品溶液，依照“2.3”项下的色谱条件分别进样2 μL，测定峰面积。以对照品进样量(X, μg)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线。计算甘草素、异甘草素、紫铆花素、柚皮素、漆黄素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的线性回归方程、线性范围、相关系数；以信噪比(S/N)为3:1和10:1为基准，推测各化合物的检测下限(LOD)和定量下限(LOQ)。结果见表 2。

2.6 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液2 μL，连续进样6次，测定7个成分的峰面积。结果甘草素、异甘草素、紫铆花素、柚皮素、漆黄素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A峰面积的RSD(n=6)分别为0.90%、0.73%、1.1%、0.78%、0.84%、0.71%、1.3%，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

分别称取同一批样品(Y21)6份，每份0.5 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，按照“2.1”项下方法制备6份供试品溶液，进样2 μL，记录7个待测成分的峰面积，计算平均含量及RSD。结果样品中甘草素、异甘草素、紫铆花素、柚皮素、漆黄素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的平均含量分别为1.57、0.45、0.29、2.41、0.67、1.23、1.71 mg·g^-1，RSD分别为2.7%、1.7%、2.2%、2.7%、2.9%、2.4%、2.2%。表明本方法重复性良好。

2.8 稳定性试验

取同一份供试品溶液(Y21)，分别在0、2、4、8、16、24 h进样2 μL，记录7个待测成分的峰面积，计算甘草素、异甘草素、紫铆花素、柚皮素、漆黄素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A峰面积的RSD分别为1.2%、0.79%、2.4%、0.85%、0.81%、0.86%、2.7%。表明供试品溶液室温下放置24 h内稳定。

2.9 加样回收率试验

称取已知含量的样品(Y21)9份，每份0.25 g，精密称定，分别置50 mL锥形瓶中，精密加入混合对照品溶液4 mL，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算加样回收率和RSD，结果见表 3，表明本方法准确度良好。

2.10 样品含量测定

取各批次样品适量，按照“2.1”项下方法制备供试品溶液，进样分析，每个样品平均测定3次，计算7个成分的平均含量，结果见表 4。

3 主成分分析 3.1 相关性分析

利用SPSS 22.0统计分析软件对各样品中7个黄酮类成分进行主成分分析，得到主成分的特征值和方差贡献率，见表 5，根据特征值为提取标准，前3个主成分的累积方差贡献率达到83.527%，它们代表降香药材中7个黄酮类成分的大部分信息内容。

各变量对前3个主成分的贡献可通过初始因子载荷矩阵和公共因子载荷散点图来表示，见表 6、图 2，异甘草素、紫铆花素、柚皮素、鹰嘴豆芽素A在第一主成分上有较高的载荷，说明第一主成分主要反映异甘草素、紫铆花素、柚皮素、鹰嘴豆芽素A的信息；漆黄素在第二主成分上有较高的载荷，说明第二主成分主要反映漆黄素的信息；甘草素和芒柄花素在第三主成分上有较高的载荷，说明第三主成分主要反映甘草素和芒柄花素的信息。

3.2 降香药材综合评价

用3个主成分对各样品进行综合评价，其综合评价函数为F=43.840F₁+ 26.436F₂+13.250F₃，计算主成分值、主成分综合得分和排序，结果见表 7。排名第一者为S，排名第二者为Y15，排名第三者为Y25，排名第四到第十分别为Y11、Y17、Y27、Y16、Y9、Y18、Y26，可见排名前十中50%的供试品为海南产降香。

4 讨论 4.1 检测波长的选择

参考文献报道^[16]，将甘草素、异甘草素、紫铆花素、柚皮素、漆黄素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的对照品溶液分别注入液相色谱仪，在200~800 nm进行全波长扫描，最大吸收波长分别为270、370、375、290、372、260、370 nm；为了测定方便并能有效反映各成分含量，选择270、370 nm作为检测波长。比较在最大吸收波长和检测波长下各成分的含量差异；结果显示，在最大吸收波长和检测波长下，各组分含量无显著性差异。因此，本文选择甘草素、柚皮素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的检测波长为270 nm，异甘草素、紫铆花素和漆黄素的检测波长为370 nm。

4.2 UPLC法与HPLC法比较

目前，关于降香黄酮类成分的含量测定方法仅见HPLC法^[13]，该方法分析时间为45 min，时间较长，测定的黄酮类成分较少，且未对异甘草素、紫铆花素等5个相对含量较高的黄酮类成分进行含量测定。与HPLC法相比，本试验所建立的UPLC法将分析时间缩短至25 min，灵敏度高，可同时检测7个黄酮类成分，能更全面地反映市售降香的质量。

4.3 样品测定结果及主成分分析

本实验运用UPLC法测定了28批样品和1批对照药材中甘草素、异甘草素、紫铆花素、柚皮素、漆黄素、芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的含量，并使用主成分分析方法分析了7个黄酮类成分的含量测定结果，得到各批样品的综合得分排名，得分越高，表明药材质量越好。由各样品和对照药材的综合排名可知，各供试药材的质量均次于对照药材，在排名前十的样品中，海南产的降香样品占50%，即相对于来自其他产地的市售降香药材，来自海南的降香样品质量总体较好。

4.4 小结

本试验建立的UPLC法具有快速，灵敏，重复性好等优点，能够准确测定降香中7个黄酮类成分，结合主成分分析，可初步判别降香药材质量优劣，从而为降香药材质量控制的进一步完善提供依据。