2018, Vol. 38 
2. 山东省泰安市中心医院, 泰安 271000
2. Shandong Taian Central Hospital, Taian 271000, China
参松养心胶囊是在中药方剂生脉散和定心汤的基础上加减组方而成:生脉散出自《医学启源》, 是益气养阴代表方, 其基本方为人参10 g、麦冬15 g和五味子15 g; 定心汤出自《衷中参西》上册, 为治疗心虚怔仲之名方, 其基本方为龙眼肉30 g、酸枣仁(炒捣)15 g、净萸肉15 g、柏子仁(炒捣)12 g、生龙骨(捣细)12 g、生牡蛎(捣细)12 g、生明乳香3 g和生明没药3 g。生脉散和定心汤通过加减方组成参松养心胶囊, 由人参、麦冬、丹参、酸枣仁(炒)、山茱萸、桑寄生、赤芍、甘松、黄连、土鳖虫、南五味子和龙骨12味中药制成, 具有益气养阴、活血通络和清心安神之功效。参松养心胶囊中医临床用于冠心病室性早搏、心络瘀阻证、症见心悸不安、气短乏力、胸部闷痛、失眠多梦、盗汗及神倦懒言疾病的治疗[1]。
中医理论认为, 中药复方通过多种成分的共同作用发挥药效。参松养心胶囊药味多, 成分复杂, 其中:人参有大补元气、复脉固脱、补脾益气、生津养血、安神益智之功效; 麦冬可养阴生津、润肺清心; 丹参的功效为活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈; 酸枣仁也同样具有养心补肝、宁心安神、敛汗生津之功效; 山茱萸功效为补益肝肾、收涩固脱; 桑寄生有祛风湿、补肝肾、强筋骨、安胎元之功效; 赤芍能够清热凉血、散瘀止痛; 甘松用于理气止痛、开郁醒脾; 黄连用于清热燥湿、泻火解毒; 土鳖虫可破血逐瘀、续筋接骨; 南五味子有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效; 龙骨常用于补肾健骨、活血止痛[1]。
中药的质量控制是保障其临床安全性与有效性的重要手段。目前, 关于参松养心胶囊尚无系统的质量控制方法研究。现有的报道主要集中于单味药或小复方的典型组分的测定, 采用的方法主要是高效液相色谱法(HPLC法)与紫外分光光度法(UV法) [2]。郭凤霞等[3]采用HPLC法测定了人参药材中的人参皂苷Rg1、Re及Rb1;魏明[4]采用UV方法测定了麦冬中的总黄酮; 山茱萸中马钱苷采用HPLC法测定[5]; 同时HPLC法可测定丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸B[6]; 酸枣仁提取物中酸枣仁皂苷A和B[7]、桑寄生中槲皮素与槲皮苷[8]、赤芍饮片中的芍药苷[9]、土鳖虫超微粉体中核苷类成分[10]等均可采用HPLC法测定; 刘英慧等[11]采用HPLC法测定甘松中能够促进神经细胞生长的甘松新酮[12-14]; 刘敏彦等[15]采用超高效液相色谱法测定参松养心胶囊中马钱苷和芍药苷[16]; HPLC法也可用于测定参松养心胶囊中五味子甲素和五味子酯甲[17]。但这些方法不能适用于参松养心胶囊中多组分的测定。
中药的前处理方法是分析方法建立的关键。目前中药及其制剂常用的样品前处理方法包括索氏提取法[3]、闪式提取器提取法[4]、超声提取法[5-6, 9-11]以及热回流提取法[7-8]等, 其中索氏提取法、闪式提取器提取法及热回流提取法耗时较长且消耗有机试剂较多, 提取效率远低于超声提取。在提取方法的筛选中, 正交试验具有安排科学, 分析详尽, 实验次数少和筛选效率高等优点。
本研究结合参松养心胶囊组方特点, 依据各味中药药效物质基础研究的进展, 选择8种有效成分, 即山茱萸中的莫诺苷和马钱苷, 赤芍中的芍药苷, 丹参中的丹酚酸B、丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA, 南五味子中的五味子酯甲和五味子甲素作为其含量的综合评价指标, 以正交试验优选样品前处理方法, 采用HPLC法进行上述组分的同时测定, 并对方法学进行系统验证。
1 仪器、药品及试剂 1.1 药品和试剂参松养心胶囊(规格: 0.4 g)(批号1601016、1603012、1609013、1605010、1703036、1701028、1704026及1702012)均购自北京以岭药业有限公司; 对照品莫诺苷(批号Z12O8B45504, 纯度99.6%)、马钱苷(批号R3IJ6F2070, 纯度99.4%)、芍药苷(批号X27F8C30162, 纯度98.03%)、丹酚酸B(批号Y22F8H29870, 纯度99.08%)、五味子酯甲(批号SO1030KA12, 纯度98.5%)、五味子甲素(批号P26M6R1, 纯度98.8%)均购自上海源叶生物科技有限公司, 对照品丹参酮Ⅰ(批号MUST-131O, 纯度98.9%)、丹参酮ⅡA(批号JVZP-967E, 纯度98.7%)购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯(天地公司), 实验用水为纯化水, 甲酸等其他试剂均为分析纯(南京化学试剂厂)。
1.2 仪器AB135-S型电子分析天平(Mettler Toledo公司)。KH-250DB型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司); Shimadzu LC-20HT高效液相色谱仪(岛津公司), 配四元梯度泵、紫外检测器、在线真空脱气机、自动控温进样器、柱温箱和LC-Solution化学工作站。
2 方法与结果 2.1 溶液的制备 2.1.1 对照品溶液分别取莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹酚酸B、五味子酯甲、丹参酮Ⅰ、五味子甲素及丹参酮ⅡA的对照品适量, 精密称定, 加甲醇制成每1 mL各含0.99、1.02、2.68、2.36、0.90、0.99、0.62和0.99 mg的溶液作为各对照品储备液。精密吸取各对照品储备液2、1、1、4、0.5、0.5、0.5、0.3 mL, 置同一10 mL量瓶中, 用50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得混合对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液取参松养心胶囊内容物, 研细, 取约0.4 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入50%甲醇10 mL, 密塞, 称量, 25 ℃、100 Hz、500 W超声处理75 min, 放冷, 再称量, 用50%甲醇补足减失的量, 16 000 r·min-1离心5 min, 取上清液, 滤过, 取续滤液作为供试品溶液。
2.2 色谱条件色谱柱: Hanbon Megres ODS-2 C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm); 流动相A:甲醇-乙腈(1:1);流动相B:甲酸溶液(pH 3);梯度洗脱, 洗脱程序见表 1; 流速: 1.1 mL·min-1; 检测波长: 230 nm; 柱温: 30 ℃; 进样体积: 20 μL。
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表 1 HPLC梯度洗脱程序表 Table 1 Gradient program of HPLC |
多因素试验条件优化需进行多次试验, 而正交试验设计可有效减少样本量以及试验次数, 分析主效应和多种因素之间的交互作用, 是一种效率高、数据处理灵活的试验设计方法[18]。
取参松养心胶囊(批号1601016), 以溶剂种类、料液比和超声时间为3个不同考察因素, 每个因素设计3个不同水平, 按L9(34)正交表进行正交试验[19], 以莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹酚酸B、五味子酯甲、丹参酮Ⅰ、五味子甲素和丹参酮ⅡA含量的综合评分为指标, 权重系数各占0.125, 进行试验。正交试验结果见表 2、3。
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表 2 正交试验设计及结果 Table 2 Design and results of orthogonal test |
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表 3 正交试验方差分析 Table 3 Analysis of variance of orthogonal design |
方差分析表明:因素A(溶剂种类)对提取率有显著影响(PA < 0.05);因素B(溶剂量)和因素C(提取时间)对提取率均无显著性影响(PB > 0.05, PC > 0.05)。由直观分析可知, 各因素对综合评分的影响顺序为A > C > B(PA < PC < PB)。由综合评分判断, 最佳提取工艺为A2B2C3; 但根据K值判断, 最佳提取工艺为A2B1C3。由于因素B(溶剂量)对提取效果无显著影响, 因此选择B1或B2均可。本研究选择B2条件。最终确定提取条件为A2B2C3, 即溶剂种类为50%甲醇, 料液比为0.4 g:10 mL, 超声提取75 min为最佳提取工艺。
2.4 方法学考察 2.4.1 专属性试验分别精密吸取50%甲醇、混合对照品溶液和供试品溶液20 μL, 按“2.2”项下色谱条件进样测定, 结果见图 1。
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1.莫诺苷(morroniside) 2.马钱苷(loganin) 3.芍药苷(paeoniflorin) 4.丹酚酸B(salviaacid) 5.五味子酯甲(schisantherin A) 6.丹参酮Ⅰ(tanshinone Ⅰ) 7.五味子甲素(schisandrin A) 8.丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA) a.供试品溶液(sample solution) b.混合对照品溶液(mixed reference solution) c. 50%甲醇(50% methanol) 图 1 专属性色谱图 Figure 1 Chromatograms of specify test |
精密吸取“2.1.1”项下混合对照品溶液0.2、0.5、1、1.5和2.0 mL, 分别置于5个2 mL量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度, 摇匀, 制成系列浓度的混合对照品溶液。按“2.2”项下色谱条件进样测定, 以峰面积积分值Y为纵坐标, 各对照品溶液质量浓度X(μg·mL-1)为横坐标, 进行线性回归, 绘制标准曲线, 计算线性回归方程及相关系数, 结果见表 4。8种化合物的线性关系良好, 符合含量测定的要求。
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表 4 线性关系及检测下限与定量下限考察结果 Table 4 Results of linear relations, LODs and LOQs |
取混合对照品溶液逐步稀释, 按“2.2”项下色谱条件进样测定, 计算各色谱峰的信号与噪声的比值(S/N), 以S/N≥3时质量浓度为检测下限, S/N≥10时质量浓度为定量下限, 结果见表 4。
2.4.4 精密度试验取混合对照品溶液, 按“2.2”项下色谱条件连续进样6次, 记录峰面积, 计算RSD; 结果莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹酚酸B、五味子酯甲、丹参酮Ⅰ、五味子甲素和丹参酮ⅡA峰面积的RSD(n=6)分别为0.60%、0.38%、0.95%、0.25%、0.21%、0.44%、0.26%和0.36%, 表明仪器精密度良好。
2.4.5 重复性试验取参松养心胶囊(批号1601016)6份, 按“2.1.2”项下方法平行制备供试品溶液, 按“2.2”项下色谱条件进样测定, 记录各色谱峰峰面积, 以外标法计算各组分含量以及RSD; 测得莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹酚酸B、五味子酯甲、丹参酮Ⅰ、五味子甲素和丹参酮ⅡA含量平均值分别为2.048 4、1.551 2、3.705 7、13.254 8、0.791 9、0.429 5、0.495 9和0.406 3 mg·g-1, RSD分别为1.0%、3.0%、1.1%、1.5%、0.79%、3.6%、0.95%和1.8%, 表明该方法重复性较好。
2.4.6 方法回收率试验取参松养心胶囊(批号1601016)约0.4 g, 精密称定, 置10 mL量瓶中, 按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液; 精密量取适量供试品溶液, 分别置6个量瓶中, 精密加入适量对照品溶液, 按“2.2”项下色谱条件测定, 计算加样回收率, 结果见表 5。
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表 5 加样回收率试验结果(n=6) Table 5 Recovery of 8 constituents |
取参松养心胶囊(批号1601016), 按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液, 室温放置24 h, 分别于0、4、8、12和24 h, 按“2.2”项下色谱条件进样测定, 记录各色谱峰峰面积并计算RSD; 结果莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹酚酸B、五味子酯甲、丹参酮Ⅰ、五味子甲素和丹参酮ⅡA峰面积的RSD分别为1.0%、0.75%、2.1%、2.4%、0.43%、3.5%、0.6%和5.8%, 表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.5 含量测定精密称取8批样品适量, 分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液, 按“2.2”项下色谱条件进样测定, 以外标法计算含量, 结果见表 6。
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表 6 样品含量测定结果(mg·g-1, n=6) Table 6 Content of 8 constituents in different batches of samples |
参松养心胶囊中含有酚酸类酸性物质, 在色谱系统中易解离而产生拖尾, 影响分离度与峰形。在流动相中加入适量甲酸, 可有效抑制酚酸类化合物的解离, 避免丹酚酸B等拖尾, 既可以改善峰形, 又可以提高分离度。本实验考察不同pH条件下各个色谱峰的峰形和分离度。考察了pH分别为2、3和4条件下, 色谱峰的分离情况, 所得色谱图见图 2。由图可知, 不同pH对色谱峰的分离与峰形有较大影响:在pH 4条件下, 保留时间在20~30 min之间的化合物分离度不符合要求, 且酸性较弱导致丹酚酸B拖尾严重; 在pH 3条件下, 各个色谱峰的分离度与峰型均符合要求; pH 2与pH 3结果无显著差异。本实验选择pH 3的流动相条件。
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a. pH 4 b. pH 3 c. pH 2 图 2 不同pH条件下的HPLC色谱图 Figure 2 HPLC chromatograms under different pHs |
参松养心胶囊各组分结构特征相差较大, 最佳检测波长不同。本研究目标是同时测定多组分, 因此需确定适用于多组分的检测波长。文献报道, 选择230 nm作为检测波长, 可同时测定芍药苷、马钱苷、小檗碱和丹酚酸B[20]; 脂溶性丹参酮成分的常用检测波长为270 nm[21], 丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA在这一波长下响应良好; 小檗碱和巴马汀结构相近, 在长波长处响应良好, 同时丹酚酸B也具有该特点, 因此选择345 nm作为检测波长[15]。本研究待测组分有8种, 需对测定条件中的不同检测波长进行考察, 色谱图见图 3。由图可知, 检测波长在254~300 nm时, 莫诺苷、马钱苷和芍药苷响应值较小; 在230 nm时, 8种化合物响应均较好, 分离度符合要求且峰形对称性良好, 所以选择230 nm为方法的检测波长。
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a. 210 nm b. 220 nm c. 230 nm d. 254 nm e. 280 nm f. 300 nm 图 3 不同波长下的HPLC色谱图 Figure 3 HPLC chromatograms under different wavelengths |
不同柱温对化合物分离的影响不同。本文中考察了柱温25、30和35 ℃对参松养心胶囊色谱峰峰形和分离度的影响, 色谱图见图 4。通过比较柱温对柱压和分离度的影响, 最终选择30 ℃柱温。
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a. 25 ℃ b. 30 ℃ c. 35 ℃ 图 4 不同温度下的HPLC色谱图 Figure 4 HPLC chromatograms under different temperatures |
本研究考察了0.8、1.0和1.1 mL·min-1流速对参松养心胶囊色谱峰峰形和分离度的影响, 色谱图见图 5。流速为0.8 mL·min-1时, 多组分分离度不符合要求, 且耗时较长; 1.0 mL·min-1时, 丹参酮Ⅰ、五味子甲素和丹参酮ⅡA分离度不符合要求; 1.1 mL·min-1时, 分析时间较短且待测组分分离度良好, 故最终选择流速为1.1 mL·min-1。
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a. 0.8 mL·min-1 b. 1.0 mL·min-1 c. 1.1 mL·min-1 图 5 不同流速下的HPLC色谱图 Figure 5 HPLC chromatograms under different flow rates |
参松养心胶囊化学成分复杂, 各组分极性相差较大, 采用等度洗脱很难实现分离。因此本实验选择梯度洗脱, 流动相A为甲醇-乙腈(1:1), 流动相B为甲酸溶液(pH 3)。通过试验调整梯度洗脱程序, 对比多个色谱图, 根据峰形与分离度的差异, 选择最佳梯度, 色谱图见图 6。
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1.莫诺苷(morroniside) 2.马钱苷(loganin) 3.芍药苷(paeoniflorin) 4.丹酚酸B(salviaacid) 5.五味子酯甲(schisantherin A) 6.丹参酮Ⅰ(tanshinone Ⅰ) 7.五味子甲素(schisandrin A) 8.丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA) a~h.梯度洗脱程序(gradient program) 图 6 不同洗脱程序下的HPLC色谱图 Figure 6 HPLC chromatograms under different gradient programs |
梯度a(0~0.01 min, 93%B; 0.01~4.00 min, 93%B→80%B; 4.00~16.50 min, 80%B→76%B; 16.50~21.00 min, 76%B→67%B; 21.00~25.00 min, 67%B→59%B; 25.00~27.00 min, 59%B→25%B; 27.00~42.00 min, 25%B; 42.00~42.01 min, 25%B→93%B); 梯度b(0~0.01 min, 93%B; 0.01~1.00 min, 93%B→80%B; 1.00~13.50 min, 80%B→76%B; 13.50~18.00 min, 76%B→67%B; 18.00~32.00 min, 67%B→59%B; 32.00~34.00 min, 59%B→15%B; 34.00~49.00 min, 15%B; 49.00~49.01 min, 15%B→93%B); 梯度c(0~0.01 min, 93%B; 0.01~1.00 min, 93%B→80%B; 1.00~13.50 min, 80%B→76%B; 13.50~18.00 min, 76%B→67%B; 18.00~32.00 min, 67%B→59%B; 32.00~32.01 min, 59%B→12%B; 32.01~47.00 min, 12%B; 47.00~47.01 min, 12%B→93%B); 梯度d(0~0.01 min, 93%B; 0.01~1.00 min, 93%B→80%B; 1.00~13.50 min, 80%B→76%B; 13.50~18.00 min, 76%B→67%B; 18.00~32.00 min, 67%B→59%B; 32.00~32.01 min, 59%B→10%B; 32.01~47.00 min, 10%B; 47.00~47.01 min, 10%B→93%B); 梯度e(0~0.01 min, 93%B; 0.01~5.00 min, 93%B→80%B; 5.00~17.50 min, 80%B→76%B; 17.50~22.00 min, 76%B→67%B; 22.00~36.00 min, 67%B→59%B; 36.00~48.00 min, 59%B→10%B; 48.00~57.00 min, 10%B; 57.00~57.01 min, 10%B→93%B); 梯度f(0~5.00 min, 80%B; 5.00~17.50 min, 80%B→76%B; 17.50~22.00 min, 76%B→67%B; 22.00~36.00 min, 67%B→59%B; 36.00~48.00 min, 59%B→10%B; 48.00~57.00 min, 10%B; 57.00~57.01 min, 10%B→80%B); 梯度g(0~0.01 min, 93%B; 0.01~10.00 min, 93%B→80%B; 10.00~22.50 min, 80%B→76%B; 22.50~27.00 min, 76%B→67%B; 27.00~41.00 min, 67%B→59%B; 41.00~50.00 min, 59%B→15%B; 50.00~65.00 min, 15%B→13%B; 65.00~65.01 min, 13%B→93%B); 梯度h(0~4.55 min, 80%B; 4.55~15.91 min, 80%B→76%B; 15.91~20.00 min, 76%B→67%B; 20.00~32.73 min, 67%B→59%B; 32.73~40.91 min, 59%B→15%B; 40.91~54.55 min, 15%B→13%B; 54.55~54.56 min, 13%B→80%B)。在梯度a中, 丹酚酸B、五味子酯甲、丹参酮Ⅰ、五味子甲素和丹参酮ⅡA与相邻峰分离度不符合要求; 在梯度b、c、d、e和f中, 前10 min基线波动较大, 影响积分的准确性, 且各组分分离度不符合要求; 在梯度g中, 各组分分离度符合要求, 但分析时间较长。为了使8个组分具有适宜的保留时间、分离度与峰形, 最终选择梯度h作为梯度洗脱程序。
3.6 提取条件的选择参松养心胶囊多组分极性差别较大, 在不同溶剂中溶解程度不同, 导致提取效率不同, 因此考察其在不同溶剂中各组分的综合提取效率。料液比是影响提取效率的因素之一, 通常情况下, 要减少待测组分的用量, 在提取较完全的基础上, 以经济廉价为原则, 且料液比过大会延长浓缩时间, 操作复杂[22], 同时也会消耗大量有机溶剂。因此考察在由小到大的不同料液比中, 各成分的综合提取效率。
超声是较为常用的提取方式。适当延长超声时间有利于待测组分的提取, 当待测组分提取较完全时, 持续延长超声时间, 反而会降低提取效率[22]。因此本研究考察在不同超声时间下, 各成分的综合提取效率。通过正交试验确定溶剂种类为50%甲醇, 料液比为0.4 g:10 mL, 超声提取75 min为最佳提取工艺。
3.7 总结本研究依据中药方剂的组方特点及各单味药药效物质的研究结论, 选择8个典型组分莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹酚酸B、五味子酯甲、丹参酮Ⅰ、五味子甲素和丹参酮ⅡA为指标性成分, 建立了参松养心胶囊多组分含量测定的方法。样品前处理采用正交试验设计, 优化了提取溶剂、料液比和超声时间。色谱方法的选择考察了pH、检测波长、柱温、流速及洗脱方式等条件, 确定了最优色谱条件。通过对专属性、检测下限与定量下限、线性与范围、精密度、重复性、加样回收率和稳定性等指标的考察, 证明该方法可用于参松养心胶囊多组分的同时测定。
| [1] |
谢俊大, 钟萌, 吴真. 参松养心胶囊的药理毒理与临床研究概况[J]. 中国药房, 2008, 19(33): 2628. XIE JD, ZHONG M, WU Z. Research on pharmacology, toxicology and clinical effect of Shensong Yangxin capsules[J]. China Pharm, 2008, 19(33): 2628. |
| [2] |
李志红, 董艳丽, 陈小娟, 等. 参松养心胶囊中人参皂苷Rb1的HPLC含量测定[J]. 今日药学, 2013, 23(12): 788. LI ZH, DONG YL, CHEN XJ, et al. Determination of ginsenoside Rb1 in Shensong Yangxin capsule by HPLC[J]. Pharm Today, 2013, 23(12): 788. |
| [3] |
郭凤霞, 陈路晓, 刘斌, 等. 人参中人参皂苷类成分含量测定方法优化[J]. 环球中医药, 2015, 8(10): 1175. GUO FX, CHEN LX, LIU B, et al. Improvement in determination method for ginsenosides in Ginseng[J]. Glob Tradit Chin Med, 2015, 8(10): 1175. DOI:10.3969/j.issn.1674-1749.2015.10.006 |
| [4] |
魏明. 麦冬提取物中总黄酮的含量测定[J]. 中国医药科学, 2015, 5(9): 58. WEI M. Content determination of total flavonoids in Radix Ophiopogonis extracts[J]. China Med Pharm, 2015, 5(9): 58. |
| [5] |
晏桂敏, 林燕飞, 孙静芸, 等. 山茱萸中马钱苷含量测定的样品处理方法改进[J]. 中国药业, 2005, 14(10): 48. YAN GM, LIN YF, SUN JY, et al. Optimization of processing method for loganin determination in Fructus Corni[J]. China Pharm, 2005, 14(10): 48. |
| [6] |
毕跃峰, 贾陆, 张小娟, 等. 不同提取方法对丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量测定的影响[J]. 药物分析杂志, 2009, 29(7): 1209. BI YF, JIA L, ZHANG XJ, et al. Effects of different extractive methods on the content determination of tanshinone ⅡA and salviandic acid B from Radix Salviae Miltiorrhizae[J]. Chin J Pharm Anal, 2009, 29(7): 1209. |
| [7] |
路丹, 王菲, 李清, 等. 酸枣仁皂苷提取物的制备与酸枣仁皂苷A和B的含量测定[J]. 沈阳药科大学学报, 2011, 28(7): 535. LU D, WANG F, LI Q, et al. Preparation of Ziziphi Spinosae Seme extraction and RP-HPLC determination of jujuboside A and jujuboside B[J]. J Shenyang Pharm Univ, 2011, 28(7): 535. |
| [8] |
吕琳, 朱宇明, 徐东铭. 桑寄生中槲皮素、槲皮苷的鉴定与含量测定[J]. 中成药, 2004, 26(12): 68. LÜ L, ZHU YM, XU DM. Study on flavones from Taxillus chinensis(DC. )Danser and assay of its quercetin[J]. Chin Tradit Pat Med, 2004, 26(12): 68. |
| [9] |
谢晓梅, 余长柱, 徐衡, 等. 赤芍饮片质量标准研究——芍药苷的含量测定[J]. 中国中药杂志, 2004, 29(8): 46. XIE XM, YU CZ, XU H, et al. Quality evaluation of prepared slices of Paeonia lactiflon-determination of paeoniflorin by HPLC[J]. China J Chin Mater Med, 2004, 29(8): 46. |
| [10] |
万丹, 蔡萍, 张水寒. 土鳖虫超微粉体中尿嘧啶、次黄嘌呤的含量测定[J]. 湖南中医药大学学报, 2011, 31(9): 36. WAN D, CAI P, ZHANG SH. Determination of uraci and hypoxanthine contents in ultramicro power of Eupolyphaga[J]. J Tradit Chin Med Univ Hunan, 2011, 31(9): 36. |
| [11] |
刘英慧, 刘海涛, 黄琪, 等. 甘松中甘松新酮的含量测定[J]. 中华中医药杂志, 2015, 30(1): 249. LIU YH, LIU HT, HUANG Q, et al. Determination of the content of nardosinone in Nardostachys chinensis Batal[J]. Chin J Tradit Chin Med Pharm, 2015, 30(1): 249. |
| [12] |
WANG JH, ZHAO JL, LIU H, et al. Chemical analysis and biological activity of the essential oils of two valerianaceous species from China:Nardostachys chinensis and Valeriana officinalis[J]. Molecules, 2010, 15(9): 6411. DOI:10.3390/molecules15096411 |
| [13] |
HIROAKI T, MICHIHO I, TOMOHIRO S, et al. Sedative effects of vapor inhalation of agarwood oil and spikenard extract and identification of their active components[J]. J Nat Med, 2008, 62(1): 41. |
| [14] |
KEN T, KATSUKO K. Comparative study on volatile components of Nardostachys Rhizome[J]. J Nat Med, 2008, 62(1): 112. |
| [15] |
刘敏彦, 赵韶华, 王玉峰, 等. 超高效液相色谱法同时测定参松养心胶囊中8种活性成分的含量[J]. 中国医院药学杂志, 2014, 34(6): 435. LIU MY, ZHAO SH, WANG YF, et al. Simultaneous determination of eight active ingredients in Shensong Yangxin capsules by UPLC[J]. Chin J Hosp Pharm, 2014, 34(6): 435. |
| [16] |
LIU MH, TONG X, WANG JX, et al. Rapid separation and identification of multiple constituents in traditional Chinese medicine formula Shenqi Fuzheng injection by ultra-fast liquid chromatography combined with quadrupole-time-of-flight mass spectrometry[J]. J Pharm Biomed Anal, 2013, 74: 141. DOI:10.1016/j.jpba.2012.10.024 |
| [17] |
陈玉平, 黄开毅, 刘亚东, 等. 反相高效液相色谱法测定参松养心胶囊中五味子甲素和五味子酯甲含量[J]. 中南药学, 2010, 8(7): 517. CHEN YP, HUANG KY, LIU YD, et al. Determination of deoxyschizandrin and schisantherin A in Shensong Yangxin capsules by RP-HPLC[J]. Cent South Pharm, 2010, 8(7): 517. |
| [18] |
何秋月. SPSS在L9(34)正交试验数据处理中的应用[J]. 中国中医药现代远程教育, 2005, 3(12): 27. HE QY. Application of SPSS in data processing of L9(34)orthogonal design[J]. Chin Med Mod Dis Educ China, 2005, 3(12): 27. DOI:10.3969/j.issn.1672-2779.2005.12.008 |
| [19] |
韩凌飞, 侯德胜, 柳文媛. HPLC法同时测定紫锥菊维生素C胶囊中菊苣酸和维生素C的含量[J]. 海峡药学, 2016, 28(8): 58. HAN LF, HOU DS, LIU WY. Simultaneous determination of cichoric acid and vitamin C in echinacea and vitamin C capsules by HPLC[J]. Strait Pharm J, 2016, 28(8): 58. |
| [20] |
陈玉平, 黄开毅, 王曙宾. RP-HPLC法同时测定参松养心胶囊中4种主要成分的含量[J]. 北京中医药大学学报, 2010, 33(12): 848. CHEN YP, HUANG KY, WANG SB. Quantitative determination simultaneously of 4 major constituents in Shensong Yangxin capsules by RP-HPLC[J]. J Beijing Univ Tradit Chin Med, 2010, 33(12): 848. |
| [21] |
陈燏. HPLC法测定参松养心胶囊中的丹参酮含量[J]. 海峡药学, 2013, 25(8): 49. CHEN Y. Determination of tanshinones in Shensong Yangxin capsules by HPLC[J]. Strait Pharm J, 2013, 25(8): 49. |
| [22] |
邹伟. 双孢蘑菇风味料加工工艺研究[D]. 西安: 陕西师范大学, 2011 ZOU W. Research on processing technic of Agaricus bisporus Flavour Materials[D]. Xi'an: Shaanxi Normal University, 2011 |