麻杏止咳糖浆来源于后汉名医张仲景《伤寒论》中的麻杏石甘汤方剂，是由麻黄、苦杏仁、石膏、甘草(炙)4味药材加工而成的复方制剂，具有镇咳、平喘、祛痰的功效，主要用于治疗支气管炎咳嗽及喘息等症^[1-3]。其现行质量标准有2个，分别收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第20册^[4]和《国家药品监督管理局药品标准》(内科肺系二)^[5]。前者无含量测定项，仅有盐酸麻黄碱的薄层色谱鉴别，后者虽然设定了盐酸麻黄碱的含量测定项，但供试品溶液的制备方法复杂，2个标准内容过于简单，均不能达到对麻杏止咳糖浆制剂质量进行有效控制的目的。本文在文献报道方法^[6-8]的基础上建立了简单易行，准确度高的测定方法，可同时测定麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸的含量，为麻杏止咳糖浆的质量控制提供技术支持。

1 仪器与试药 1.1 仪器

Waters e2695高效液相色谱仪，四元泵，2998检测器(Waters公司)；UPLC-Xevo^TM TQ-S液质联用仪，Masslynx数据处理系统(Waters公司)；AE-240电子分析天平(METTLER TOLEDO公司)；超纯水仪(Millipore公司)。

1.2 试药

盐酸麻黄碱(批号171241-201007)、盐酸伪麻黄碱(批号171237-201208)、苦杏仁苷(批号110820-201607)、甘草苷(批号111610-201607)、甘草酸铵(批号110731-201619)均购自中国食品药品检定研究院，含量均在98%以上；甲醇、乙腈(色谱纯，Merck公司)，水为超纯水，磷酸、磷酸二氢钾(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；麻杏止咳糖浆样品为河北康芝制药有限公司生产。

2 方法与结果 2.1 色谱条件

色谱柱：Thermo C₁₈(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：以乙腈为流动相A，以0.02 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(含0.1%三乙胺+0.1%磷酸)为流动相B，梯度洗脱，洗脱程序见表 1；流速：1.0 mL·min^-1；柱温：25 ℃；检测波长：210 nm(麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷)、237 nm(甘草苷、甘草酸)；进样量：10 μL。

2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品储备液及混合对照品溶液

精密称取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸铵的对照品适量，分别置于50 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，制得盐酸麻黄碱质量浓度为0.999 0 mg·mL^-1，盐酸伪麻黄碱质量浓度为0.439 1 mg·mL^-1，苦杏仁苷质量浓度为1.199 mg·mL^-1，甘草苷质量浓度为0.327 2mg·mL^-1，甘草酸铵质量浓度为0.679 1 mg·mL^-1的单一成分对照品储备液，低温保存。分别精密吸取上述5个化合物储备液依次为10、10、10、15、10 mL至同一100 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成质量浓度分别为99.9、43.9、119.9、49.0、67.9 μg·mL^-1的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液

精密量取样品10 mL，置50 mL量瓶中，加80%甲醇水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液

按照《中药成方制剂》第20册麻杏止咳糖浆质量标准中规定的处方工艺，分别制备不含麻黄药材的阴性样品、不含苦杏仁药材的阴性样品、不含甘草药材的阴性样品。按“2.2.2”项下方法制备阴性样品溶液。

2.3 专属性试验

分别取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，色谱图见图 1。由图可知，其分离度较好；阴性样品色谱图中，在与对照品色谱峰相应的位置上无色谱峰出现，表明处方中的其他药味对测定成分无干扰，专属性良好。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取各对照品储备液稀释10倍后的溶液1、2、5、10 μL和各对照品储备液1、2、5、10 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定。以进样量(X，μg)为横坐标，峰面积值(Y)为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，结果见表 2，表明各成分线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密吸取麻杏止咳糖浆供试品溶液10 μL，按照“2.1”项下色谱条件连续进样6次，结果麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸峰面积的RSD分别为0.68%、0.50%、0.65%、0.39%、0.38%，表明本方法具有良好的精密度。

2.6 稳定性试验

取麻杏止咳糖浆供试品溶液按“2.1”项下色谱条件，分别在0、3、6、9、15、21、24 h进样测定，结果麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸峰面积的RSD分别为0.31%、1.4%、0.96%、0.41%、1.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批样品5、10、15 mL各3份，制备供试溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸平均含量分别为0.497、0.218、0.539、0.150、0.309 mg·mL^-1，RSD分别为0.24%、0.37%、1.2%、0.33%、0.59%。结果表明，本方法重复性良好。

2.8 回收率试验

精密量取已知含量的样品(盐酸麻黄碱0.497 mg·mL^-1，盐酸伪麻黄碱0.218 mg·mL^-1，苦杏仁苷含量为0.539 mg·mL^-1，甘草苷含量为0.150 mg·mL^-1，甘草酸含量为0.309 mg·mL^-1)5 mL共9份，每3份为一组，分别加入低、中、高3个浓度的混合对照品溶液一定量，按“2.2.2”项下方法制备供试溶液。按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表 3，表明回收率良好。

2.9 样品测定

取3批麻杏止咳糖浆各2份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，并用外标法计算样品中5个成分的含量，结果见表 4。

3 讨论

本研究建立了麻杏止咳糖浆中5个成分的HPLC测定方法，该方法高效，分离度好，结果准确，阴性无干扰，具有良好的精密度、稳定性和重复性。

3.1 检测波长的确定

对盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸5个成分的甲醇溶液进行全波长扫描，结果显示麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷检测波长集中在210 nm附近，所以选择在210 nm波长下测定；甘草苷、甘草酸的检测波长参照《中华人民共和国药典》2015年版一部甘草项下的含量测定方法，最终选择237 nm。

3.2 流动相的选择

实验中遇到麻黄碱、伪麻黄碱峰形拖尾的问题，且苦杏仁苷与其紧邻未知物的峰分离度难以达到要求，本文参考文献[9-14]，首先尝试了采用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸水、甲醇-乙腈-0.1%磷酸水等流动相进行试验，效果不理想。其次改用乙腈-0.1%磷酸(0.1%三乙胺)，结果麻黄碱、伪麻黄碱峰形拖尾现象有改善，但是苦杏仁苷的峰依旧没有分开；之后又尝试乙腈-0.02 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(0.1%三乙胺)作为流动相，结果分离效果明显改善。在上述基础上经过多次试验，发现加入0.1%磷酸调节pH，可以得到理想的分离效果。

3.3 技术难点分析

本实验难点在于苦杏仁苷峰与其相邻未知峰的分离，因此通过UPLC-MS/MS对该未知峰进行了分析，结果表明，此未知峰和苦杏仁苷的一级和二级碎片图谱完全相同，推测此未知物可能为苦杏仁苷的同分异构体。

3.4 小结

运用本文方法对麻杏止咳方其他剂型(麻杏止咳片、麻杏止咳胶囊、麻杏止咳颗粒)进行检测，结果盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、甘草酸5个成分都能达到很好分离；经过方法学验证，结果表明该方法也适用于上述剂型的质量控制。本文制订的方法可有效提高麻杏止咳系列制剂的质量控制水平，为其质量标准的进一步修订提供了依据。