参芍胶囊是由人参茎叶总皂苷和白芍制成的复方制剂，具有活血化瘀、益气止痛的功效，临床上适用于气虚血瘀所致的胸闷、胸痛、心悸、气短，以及冠心病心绞痛见上述证侯者^[1]。参芍胶囊以人参茎叶总皂苷为君药，用于补气；白芍为臣药，行瘀止痛，养阴和血；两药合用，共奏活血化瘀，益气止痛之功效^[2]。本研究参考相关文献，采用高效液相色谱-质谱(LC-MS/MS)联用技术，通过多反应离子监测对参芍胶囊中的人参皂苷Rb₂、Rd、Re、Rg₁和芍药苷5个成分同时进行测定。本方法的建立可为参芍胶囊的质量控制提供参考，并大大提高现行标准(中国药典2015年版一部参芍胶囊)常规液相色谱方法的检测效率，缩短检测时间。

1 仪器与试药 1.1 仪器

U-3000高效液相色谱仪(Thermofisher公司)，TSQ Quantum ACCESS MAX三重四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源(ESI) (Thermofisher公司)；Hypersil Gold C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm，3 μm；填料：十八烷基硅烷键合硅胶；Thermofisher公司)；AE240电子天平(Mettler Toledo公司)；Milli-Q Integral超纯水仪(Millipore公司)。

1.2 试药

对照品人参皂苷Rb₂(批号111715-200802，含量以94.8%计)、人参皂苷Rd(批号111828-201603，含量以92.1%计)、人参皂苷Re(批号110754-201626，供含量测定用)、人参皂苷Rg₁(批号110703-201128，含量以93.4%计)、芍药苷(批号110736-201640，含量以95.2%计)均购于中国食品药品检定研究院。样品参芍胶囊(每粒装0.25 g)购于山东华源天宏药业有限公司。甲醇、乙腈和甲酸(Thermo Fisher公司)为色谱纯，水为超纯水，其他试剂(天津大茂化学试剂厂)均为分析纯。

2 方法与结果 2.1 溶液的制备 2.1.1 混合对照品储备液

分别精密称取人参皂苷Rg₁、Rb₂、Re、Rd和芍药苷的对照品适量，用70%甲醇水制成含人参皂苷Rg₁ 172.9 μg·mL^-1，人参皂苷Rb₂ 126.6 μg·mL^-1，人参皂苷Re 174.4 μg·mL^-1，人参皂苷Rd 103.4 μg·mL^-1和芍药苷123.6 μg·mL^-1的混合溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液

取样品内容物适量，混匀，取约0.2 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加70%甲醇水适量，超声处理(功率400 W，频率40 kHz)30 min，放冷至室温，用70%甲醇水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取5 mL，置100 mL量瓶中，用70%甲醇水稀释至刻度，用0.22 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.1.3 阴性样品溶液

按参芍胶囊制法，取辅料分别制备缺白芍和人参茎叶总皂苷的阴性样品。按照“2.1.2”项下方法制备溶液，即得。

2.2 色谱-质谱条件

色谱条件：采用Hypersil Gold C₁₈色谱柱(2.1 mm× 100 mm，3 μm)，柱温40 ℃，以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱(0~10 min，15%乙腈→40%乙腈；10~13 min，40%乙腈→70%乙腈)，流速0.3 mL·min^-1，进样量10 μL。

质谱条件：采用电喷雾离子源(ESI)，蒸发温度为400 ℃，离子传输毛细管温度为350 ℃，鞘气压力276 kPa，辅助气压力34 kPa，电压为3 kV。选择负离子扫描方式，多反应监测(MRM)模式，5个分析物的质谱参数见表 1。

在上述试验条件下，样品及阴性样品的提取离子流图谱见图 1-a、b。

2.3 线性关系考察及定量限测定

取混合对照品储备液适量，加70%甲醇水稀释制备成5个浓度的系列混合对照品溶液，按照“2.2”项下的条件进行测定。以对照品质量浓度(X)为横坐标，待测物质峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归计算，得到线性回归方程及相关系数，结果表明5个分析物在相应的范围内线性关系良好。采用混合对照品溶液逐级稀释，进样测定，以S/N=10时的对照品质量浓度为5个分析物各自的定量限，结果见表 2。

2.4 精密度试验

取混合对照品溶液，连续进样6次，测得人参皂苷Rg₁、Rb₂、Re、Rd和芍药苷峰面积的RSD分别为2.2%、1.5%、1.8%、2.0%、1.7%，表明仪器的精密度良好。

2.5 重复性试验

按“2.1.2”项下方法制备同一批样品(批号160701)的供试品溶液6份，进样测定。结果人参皂苷Rg₁、Rb₂、Re、Rd和芍药苷的平均含量分别为8.38、3.99、11.58、6.70、86.90 mg·g^-1，RSD分别为1.7%、2.7%、2.5%、1.8%、2.2%，表明本方法的重复性良好。

2.6 稳定性试验

取“2.1.2”项下同一份供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样测定，测得人参皂苷Rg₁、Rb₂、Re、Rd和芍药苷峰面积的RSD分别为2.5%、1.9%、1.8%、2.9%、2.4%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7 加样回收率试验

精密称取已知含量的参芍胶囊(批号160701)6份，每份0.1 g，分别置100 mL量瓶中，精密加入混合对照品储备液适量，按“2.1.2”项下方法制备供试溶液，进样测定，计算回收率。结果见表 3。

2.8 样品测定

取3批次参芍胶囊样品，按照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，通过回归方程计算含量，结果见表 4。

3 讨论 3.1 检测方法的选择

人参皂苷Rg₁与人参皂苷Re分离困难，用常规液相色谱方法实现分离造成每次进样时间很长。LC-MS/MS法表现出的高选择性、高灵敏度，不要求人参皂苷Rg₁与人参皂苷Re完全分离，大大缩短分析时间。另外人参皂苷类成分没有生色团，用紫外检测器测定时只能取末端吸收，干扰较大，采用质谱检测器，用MRM方式测定，可以有效避免干扰，专属性更强，可以准确测定样品中人参皂苷的含量。

3.2 提取条件的选择

实验中分别考察了50%甲醇水、70%甲醇水和100%甲醇作为提取溶剂，超声与回流2种提取方式，结果发现选用70%甲醇水超声提取30 min，各被测成分峰形较好，提取率较高。

3.3 流动相的选择

实验中分别考察了甲醇-0.1%甲酸水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液等流动相体系。结果显示，采用乙腈-0.1%甲酸水溶液作为流动相，检测灵敏度较高。故选用乙腈-0.1%甲酸水溶液作为本实验的流动相。采用梯度洗脱方式，可有效缩短分析时间，改善峰形，提高灵敏度和分离能力等。

3.4 质谱条件的考察

质谱分析中，对各被测成分的质谱参数进行了优化，人参皂苷类成分在负离子模式下有较高的响应和较好的峰形^[4]。芍药苷在负离子检测模式下易产生加合离子峰[M+HCOO]^-[5]，以m/z 525.1作为母离子进行优化，确定以m/z 525.1→327.0为芍药苷的定量离子对，故本实验选择负离子模式进行测定。

3.5 小结

本实验建立了LC-MS/MS法同时测定参芍胶囊中人参皂苷Rb₂、Rd、Re、Rg₁和芍药苷5个有效成分的含量，该方法简便、快速，灵敏度高，专属性好，可用于参芍胶囊的质量控制。相较于现行标准(中国药典2015年版一部参芍胶囊)，能很大程度提高检测效率。LC-MS/MS法具有高准确性、高灵敏度、高专属性以及检测限和定量限更低的优点，已逐渐成为中药多成分测定的有效方法。