泡囊草系茄科植物泡囊草[Physochlaina phsaloides(L.)G. Don]的干燥根，具有杀粘、消肿、镇痛、解痉、清“协日乌素”、壮阳之功效^[1]，主要分布于内蒙古自治区锡林郭勒阿巴嘎旗，呼伦贝尔鄂温克旗和乌兰察布市。

泡囊草始载于经典著作《无误蒙药鉴》，后在《认药白晶鉴》等历代文献中也均有记载。现已载入《中华人民共和国卫生部药品标准》(蒙药分册)，但缺理化鉴别和含量测定项。经查阅近几十年国内外相关药学文献，发现目前国内外对泡囊草的化学成分及其质量控制方法的研究报告较少。关于其化学成分研究，刘永湰等^[2]1979年从泡囊草乙醇提取液中鉴定出2个生物碱；张润祥等^[3]采用HPLC法测定了泡囊草中莨菪碱的含量；刘东明等^[4]以托烷类生物碱的含量作为指标，采用正交设计对泡囊草的奶制和膏制工艺进行了优化。

从泡囊草化学成分前期研究结果可知，主要化学成分为香豆素和生物碱，但目前尚未报道泡囊草中同时测定香豆素和生物碱含量的方法。故本文据参考文献[5-10]中记载的TLC和HPLC法研究思路，以课题组泡囊草化学成分前期工作中分离得到的化合物香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱为指标，采用反相高效液相色谱法同时测定其中2个香豆素和2个生物碱的含量，并同时对其进行薄层色谱定性鉴别，为综合评价泡囊草的质量控制提供可靠数据。

1 仪器及试药

岛津公司高效液相色谱仪(LC-20AT输液泵，SPD-M20A检测器，CBM-20A工作站，CTO-22A柱温箱)；奥泰公司Alltima C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm；填料：十八烷基硅烷键合硅胶)；昆山市超声仪器有限公司KQ-600DB型系列超声波仪；岛津公司AUW220D型电子天平。上海海洋化工厂硅胶G。

本课题组前期对泡囊草化学成分进行了研究，从其乙酸乙酯提取物中分离得到本实验所用对照香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱；它们的结构式通过其磁共振波谱数据与文献数据^[11-15]比较分析，确定为香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱，其纯度经高效液相色谱法分析均高于98.0%，可作为对照品使用。甲醇和乙腈为色谱纯(Fisher Scientific Inc，United States)，其余试剂均为分析纯(天津市大茂化学试剂厂)，水为超纯水。泡囊草收集于内蒙古，由内蒙古民族大学蒙医药学院蒙药生药教研室布和巴特尔教授鉴定为茄科植物泡囊草(Physochlaina phsaloides(L.)G. Don)的干燥根，药材来源见表 1。

2 方法与结果 2.1 香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷的薄层色谱鉴别 2.1.1 供试品溶液制备

称取泡囊草1.00 g，加乙醇50 mL，超声(功率为600 W，频率为40 kHz)处理30 min，滤过，取滤液即得。

2.1.2 对照品溶液制备

精密称取香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品10 mg，置于10 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.3 薄层色谱条件

以硅胶G为吸附剂，乙酸乙酯-甲醇(13:2)为展开剂，在紫外灯(365 nm)下观察。

2.1.4 薄层色谱分析

分别吸取对照品溶液4 μL和供试品溶液10 μL点于同一硅胶板上，展开，取出，晾干，在紫外灯(365 nm)下观察，结果见图 1。

2.2 东莨菪碱的薄层色谱鉴别 2.2.1 供试品溶液制备

称取泡囊草2.0 g，加乙醇50 mL，超声(功率为600 W，频率为40 kHz)处理30 min，滤过，滤液回收至干；药渣加水30 mL，搅拌成混悬液，加氨水1 mL碱化，然后用氯仿10 mL萃取，取氯仿液即得。

2.2.2 对照品溶液制备

精密称取东莨菪碱10 mg，置于10 mL量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 薄层色谱条件

以硅胶G为吸附剂，乙酸乙酯-甲醇-氨试液(17:3:1)为展开剂，改良碘化铋钾溶液为显色剂。

2.2.3 薄层色谱分析

分别吸取对照品溶液4 μL和供试品溶液10 μL点于同一硅胶板上，展开，取出，晾干，喷改良碘化铋钾溶液显色，结果见图 2。

2.3 含量测定 2.3.1 色谱条件

采用Alltima C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-醋酸钠缓冲液(pH 6.0)(15:85)为流动相，流速1.0 mL·min^-1，检测波长257 nm，进样量20 μL。在上述色谱条件下，香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱的色谱峰达到基线分离(^R > 1.5)，理论塔板数均不低于5 000，分离色谱图见图 3。

2.3.2 对照品储备液的制备

精密称取各对照品适量，用乙腈分别配成香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷质量浓度为2.0 mg·mL^-1，6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷质量浓度为1.0 mg·mL^-1，东莨菪碱质量浓度为2.0 mg·mL^-1及莨菪碱质量浓度为1.0 mg·mL^-1的储备液，置于4 ℃冰箱中储存。

2.3.3 供试品溶液的制备

称取干燥样品粉末(过80目筛)1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，先用石油醚20 mL超声(功率为600 W，频率为40 kHz)处理30 min，滤过；药渣自然晾干后，加乙醇20 mL，超声(功率为600 W，频率为40 kHz)处理30 min，滤过，滤液用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.3.4 线性关系考察

精密吸取香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷和东莨菪碱对照品储备液各0.25、0.50、1.0、1.50和2.50 mL，6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷和莨菪碱对照品储备液各0.20、0.40、0.60、0.80和1.00 mL，分别置于10 mL量瓶中，用乙醇配制成不同质量浓度的系列香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷和莨菪碱对照品溶液，0.45 μm微孔滤膜过滤。在上述色谱条件下进行测定，求得回归方程，结果见表 2。

2.3.5 精密度试验

在上述色谱条件下，取同一供试品溶液(A1号样品)连续进样5次，根据峰面积计算香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱的RSD分别为1.0%、0.80%、1.0%和0.92%，表明仪器精密度良好。

2.3.6 稳定性试验

取同一供试品溶液(A1号样品)，分别在不同时间(0、4、6、8、10、12 h)进样测定，计算香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱含量的RSD分别为1.1%、1.0%、1.1%和1.6%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.3.7 重复性试验

取同一样品(A1号样品)5份，分别按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，测定，计算香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱的平均含量分别为1.334、0.471、0.979和0.385 mg·g^-1，其RSD分别1.4%、1.3%、1.6%和1.2%。

2.3.8 回收率试验

精密称取样品(A1)0.5 g，6份，精密加入香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱的对照品适量，按“2.3.3”项下方法制备供试溶液，测定，计算加样回收率和RSD，结果见表 3。

2.3.9 样品测定

精密吸取不同来源样品的供试品溶液各3份，按本文确定的色谱条件进样测定，按外标两点法计算样品中香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱的含量，结果见表 4。不同来源样品中上述4个化合物平均含量变化分别为(1.271±0.045)、(0.407±0.035)、(0.906±0.044)和(0.325±0.036) mg·g^-1。

3 讨论

本实验比较了甲醇-醋酸钠缓冲液、甲醇-磷酸、乙腈-磷酸、乙腈-醋酸钠缓冲液等洗脱系统，发现以乙腈-醋酸钠缓冲液(15:85)为流动相时，被测成分分离效果较好，分析时间适当，分离度符合要求。采用二极管陈列检测器对对照品香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱进行全波长扫描发现4个化合物约在257 nm处有最大吸收，故本文选择257 nm为检测波长。同时，本文建立了香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷和东莨菪碱的薄层鉴别方法。

本文所建立的含量测定方法对不同来源样品中香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基香豆素-7-O-β-D-葡萄糖苷、东莨菪碱和莨菪碱进行了分析，发现它们在不同来源样品平均变化分别为(1.271±0.045)、(0.906±0.044)、(0.407±0.035)和(0.325±0.036) mg·g^-1。

总之，本研究建立了泡囊草质量多指标成分评价方法，简便、快速、准确，可为评价该药材质量提供依据。