2017, Vol. 37 
葡萄糖氯化钠注射液是临床上广泛应用的用以调节人体水电解质及酸碱平衡的制剂，主要用于大出血、腹泻、呕吐等引起的脱水症的治疗[1]。而保存药液的包装材料往往需要各种抗氧剂来保证其理化性质和稳定性。在塑料包装材料生产中，使用必要的添加剂可以保持高分子材料的优良性能，其可以延缓高分子材料的氧化过程[2]，延长使用寿命[3]。但使用不当会带来新的药品安全问题。美国食品与药品管理局（FDA）、欧盟委员会（EC）和中国开展的包装材料化学物迁移理论与试验的大量研究结果表明，塑料包装材料中的加工助剂有可能迁移人食品和药品中[4-5]。摄入过量的抗氧化剂存在毒性与癌症风险，最新研究还发现人造抗氧化剂会加速小鼠皮肤癌转移[6]。欧洲药典规定，抗氧化剂在聚合物中的添加量不得超过0.3%[7]。输液袋材料中常加入抗氧剂、润滑剂、抗酸剂等，其中抗氧剂168属于三层共挤膜输液袋的常用添加剂之一，化学名为亚磷酸三（2，4-二叔丁基苯基）酯，挥发性低，不溶于水，微溶于醇类，溶于各种烃类溶剂，是由2，4-二叔丁基苯酚与三氯化磷进行酯化反应生成，抗氧剂可能会被消耗，也可能发生降解反应[8]。有研究表明：2，4-二叔丁基苯基易发生水解反应，产物多为2，4-二叔丁基苯酚（DBP）[9-10]（图 1）。目前大部分的标准或文献着重介绍抗氧剂的迁移量检测方法[11-13]，但对于抗氧剂降解物的检测方法却较少[14]。目前，文献报道有使用气相－质谱联用仪对于聚丙烯薄膜中168降解产物的测定[15]，但对于药液中抗氧剂168降解产物未见有文献报道。本文研究建立了葡萄糖氯化钠注射液中2，4-二叔丁基苯酚（CAS号96-76-4，抗氧剂168降解产物）迁移量的HPLC测定方法，线性良好，回收率高。
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图 1 三[2.4-二叔丁基苯基]亚磷酸酯（A）及2，4-二叔丁基苯酚结构式（B） Figure 1 Structures of Tns-(2.4-di-tert-butyl)-phosphite(A)and 2, 4-di-tert-butyl-phenol(B) |
Agilent 1100高效液相色谱仪（Agilent公司）；XS205天平（Mettler公司）；AGILENT BOND ELUT-PPL固相萃取柱（Agilent公司，规格：100 mg/3 mL批号：12105004）
2，4-二叔丁基苯酚（抗氧剂168降解产物）J & K批号：244431，99.5%；葡萄糖氯化钠注射液来源于药厂，分别经加速试验0、3、6月。
2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱：Eclipse XDB-C18（十八烷基硅烷键合硅胶，5 µm，4.6 mm×150 mm）；流动相-乙腈-水（70:30）；流速：1.0 mL·min-1；检测器：VWD（可变波长检测器）；检测波长：210 nm；进样量：20 µL。
2.2 对照溶液制备称取2，4-二叔丁基苯酚对照品约10 mg，以乙腈稀释，定容至10 mL，作为对照储备液。分别吸取对照储备液1.0 mL用甲醇稀释，分别定容至20 mL、50 mL、100 mL，作为对照1、2、3；分别吸取对照1溶液2.0 mL用甲醇稀释，分别定容至20 mL、50 mL、100 mL，作为对照4、5、6。分别吸取对照3溶液1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL用甲醇稀释，定容至100mL，作为对照7、8、9。
2.3 样品溶液制备固相萃取柱使用前分别用甲醇8 mL活化。量取200 mL的输容器内液体，经过固相萃取柱萃取。用10 mL甲醇洗脱（洗脱过程不加压），收集洗脱液，直接进样测定。
2.4 检测波长选择将抗氧剂168降解产物2，4-二叔丁基苯酚的甲醇溶液进行210~400 nm扫描，选择最大吸收波长210 nm作为检测波长。
2.5 系统性试验取对照溶液按“2.1”项下条件进样，记录色谱图.结果表明在上述条件下，测得2，4-二叔丁基苯酚（抗氧剂168降解产物）的理论塔板数为6 400，同时从图 2可见抗氧剂168降解产物达到基线分离。
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图 2 对照溶液HPLC色谱图 Figure 2 HPLC Chromatograph of reference sdution |
分别取对照液2，4，9，按“2.1”项下条件连续测定6次；在0、24 h分别重复测定3次，结果见表 1。表明抗氧剂168降解产物重复性良好，在24 h内稳定性良好。
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表 1 抗氧剂168降解产物2，4-二叔丁基苯酚重复性试验结果 Table 1 Antioxidant 168 degradation product 2, 4-di-tert-butyl-phenol reproducible test results |
分别取对照液1、2、3、4、5、6、7、8、9按“2.1”项下条件测定，记录峰面积，以抗氧剂168降解产物峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，进行线性回归，得回归方程为：
A=0.025 9C-0.049 7 r=0.999 9
结果表明抗氧剂168降解产物在0.1~50 µg·mL-1范围内线性相关性良好。
2.8 回收率试验称取抗氧剂168降解产物2，4-二叔丁基苯酚对照品约10 mg，用乙腈定容至10 mL，作为对照溶液。
固相萃取柱使用前用8 mL甲醇活化。量取100 mL葡萄糖氯化钠注射液，分别加入相应对照溶液20、50、100 µL，混匀。溶液经过固相萃取柱萃取。用10 mL甲醇洗脱（洗脱过程不加压），收集洗脱液，甲醇定容至10 mL，按“2.1”项下条件直接进样测定。同一浓度平行制备3份，结果见表 2，回收率介于95%~100%。
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表 2 回收率试验结果（n=3） Table 2 Results of recovery test |
称取2，4-二叔丁基苯酚对照品适量，甲醇逐步稀释，进样测定。当信噪比为2.8时测得检测限为0.003 µg·mL-1，当信噪比为11时测得定量限为0.01 µg·mL-1。
2.10 样品测定按照“2.3”项下方法制备样品溶液，进样测定，结果见表 3。样品中抗氧剂168降解产物2，4-二叔丁基苯酚的质谱定性图谱见图 3。
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表 3 葡萄糖氯化钠注射液中抗氧剂2，4-二叔丁基苯酚迁移量测定结果 Table 3 Results of 2, 4-di-tert-butyl phenol migration in three batches of glucose and sodium chloride injection |
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图 3 样品溶液中抗氧剂168降解产物2，4-二叔丁基苯酚质谱 Figure 3 MS of 2, 4-di-tert-butyl-phenol in sample solution |
本研究建立了HPLC法测定葡萄糖氯化钠注射液中抗氧剂168降解产物的迁移量，并分别测定了3批不同放置条件下葡萄糖氯化钠药液中的抗氧剂168降解产物的迁移量。分别以A、B、C代表 0月、加速3月以及加速6月3种放置时间的样品，结果表明放置时间最长的C袋有检出，说明材料中的抗氧剂168在长时间的储存过程中不但可能会被消耗，也可能发生降解反应，并导致向葡萄糖氯化钠注射液此类药液中迁移，导致药品中相关物质的增加。本研究测定了抗氧剂168降解产物随着时间递增向葡萄糖氯化钠注射液此类药液中迁移规律的初步研究，可为其在其他药液中迁移研究作一定参考。
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