硒是人体必需的15种微量元素之一，参与体内许多重要的代谢过程，是谷胱甘肽过氧化物酶的重要组成部分^[1]。硒元素在预防疾病和提高人体免疫方面有着重要的作用^[2]，比如防癌作用，预防心血管疾病和心肌梗塞的发生，抗衰老作用，对重金属有解毒作用等^[3]。缺少硒元素会导致大骨节病和克山病，但是摄入过多的硒会对人体健康造成危害^[4]。金枪鱼是富硒食物之一。近年来，有关金枪鱼的营养研究主要集中于氨基酸组成及含量，不饱和脂肪酸、蛋白质的测定等方面^[5-6]，检测及比较不同种类的金枪鱼肉中硒的含量研究较少。

硒的检测方法主要有荧光法、原子吸收光谱法和原子荧光法等^[7-10]。荧光法的优点是准确，但存在试剂毒性强，显色物质不稳定，操作步骤烦琐等缺陷^[11]；原子吸收火焰法的缺点是灵敏度低，并且石墨炉法有基体干扰^[12]；原子荧光法测定硒克服了以上方法的缺点，是一种简便、灵敏度高的检测方法。原子荧光法原理是样品加酸经过微波消化后，继续加入盐酸溶液（6 mol·L^-1）高温湿法消解，将样品中的六价硒全部还原成四价硒，硼氢化钠作还原剂将四价硒还原成硒化氢（H₂Se），由载气带入原子化器中进行原子化，在硒特制空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量成正比。

本文以蓝鳍金枪鱼（T. thynnus）、长鳍金枪鱼（T. alalunga）、黄鳍金枪鱼（T. albacares）和大眼金枪鱼（T. obesus）作为研究对象，采用原子荧光法检测并比较其背部硒的含量。

1 材料与方法 1.1 仪器与试剂

北京吉天仪器有限公司AFS-9130双道原子荧光分光光度计，配有计算机处理系统，硒空心阴极灯；CEM公司Mars 5微波消解仪；梅特勒公司AE-163电子天平；硝酸、盐酸为优级纯，氢氧化钠、硼氢化钠（98%）、铁氰化钾为分析纯，实验用水为超纯水；硒标准液：国家标准物质GBW（E）080215，100 μg·mL^-1；载流：盐酸溶液5%（V/V）。

1.2 试样处理

黄鳍金枪鱼（远洋打捞，-40 ℃运输保存）试样背部肉，搅拌机搅拌，精密称定试样（约0.2 g）于消化管中，加硝酸6 mL，过氧化氢1 mL，微波消化仪消化（见表 1），冷却后转入石英锥形瓶中，继续加热至近干，加入盐酸溶液（6 mol·L^-1）5 mL，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，完全将六价硒还原成四价硒；冷却，转移至15 mL刻度离心管中，定容至10 mL，加盐酸2 mL，混匀，移取2.0 mL于15 mL刻度离心管中，加铁氰化钾水溶液（100 g·L^-1）1 mL，加5%（V/V）盐酸溶液定容至10 mL，放置30 min后待测。同时做待测样品平行、试剂空白实验。

1.3 标准曲线的制备

精密移取硒标准液10 mL，以超纯水定容至100 mL（10 μg·mL^-1），精密移取10 mL，以超纯水定容至100 mL（1 000 ng·mL^-1），移取1.5 mL，以超纯水定容至50 mL，即得30.0 ng·mL^-1的标准溶液。仪器自动稀释30.0 ng·mL^-1标准溶液，即得3.0、12.0、18.0、24.0、30.0 ng·mL^-1，放置30 min后测定，得到标准曲线。

2 结果与讨论 2.1 实验条件优化

优化试验在硒质量浓度为5 ng·mL^-1的标准溶液，100 g·L^-1铁氰化钾溶液，5%（V/V）盐酸溶液作载流的反应体系中进行，对硼氢化钠浓度、灯电流、负高压、屏蔽气流和载气流量工作条件进行试验。

2.1.1 硼氢化钠浓度的选择

硼氢化钠还原剂的浓度对硒的测定有着重要的影响，可将四价硒还原成二价硒。硼氢化钠浓度太低则反应不完全，灵敏度降低；浓度太高则会由于氢气稀释硒原子蒸气而使灵敏度降低，反应不稳定^[13-14]。本实验考察还原剂1%、1.5%、2%、2.5%硼氢化钠溶液，结果（图 1）表明，随着硼氢化钠浓度增大，荧光强度增大，当硼氢化钠浓度为1.5%或2%，荧光强度趋于稳定，因此选用1.5%硼氢化钠溶液作还原剂。

2.1.2 空心阴极灯电流的选择

灯电流大小与待测元素测定的荧光信号强度、信噪比有密切关系。在一定范围内（50~100 mA），随着灯电流增大，仪器灵敏度增大，测得的荧光信号越强，但灯电流过大会引起自吸，且噪音增大，并且降低灯的使用寿命。由图 2可知，当阴极灯的电流为50~100 mA时，可以得到较好的线性关系，荧光强度相对较大。考虑到方法的实用性和灯的使用寿命，选用60 mA灯电流。

2.1.3 光电倍增管负高压的选择

负高压的高低与测定的荧光强度、信噪比有密切的关系，在一定范围内（负高压260~320 V），负高压越高，灵敏度越高。但是太高的负高压会增加暗电流和噪声，基线漂移，影响其稳定性^[15]，且过高的负高压可缩短光电倍增管的使用寿命。由图 3可知，负高压为260~320 V时，荧光强度相对稳定，灵敏度高，能够满足分析要求。因此，在保证实验灵敏度的前提下，本方法选定负高压为300 V。

2.1.4 屏蔽气流的选择

屏蔽气作为外围保护气，流量小时会导致氩氢火焰肥大，信号不稳定；气流大时会导致氩氢火焰细长，信号不稳定且灵敏度降低^[16]。适当的屏蔽气可阻止空气干扰氩氢火焰，保证火焰形状稳定。本实验考察屏蔽气流速400、600、800、1 000 mL·min^-1，保证实验灵敏度的前提下，选择600 mL·min^-1，结果见图 4。

2.1.5 载气流量的选择

合适的载气流速对样品检出信号具有重要作用，过小的流速不利于氢氩焰的稳定，难以将氢化物迅速带入原子化器，测量的重现性差，并且容易产生记忆效应；过高的载气会冲稀气态原子的浓度，测量的荧光值降低。本实验考察载气流量300、400、500、600 mL·min^-1。保证实验灵敏度的前提下，选择400 mL·min^-1。结果见图 5。

以上仪器条件是在本方法的线性范围内选择的，如改变线性范围，仪器条件可在适当范围内调整。优化后仪器条件：硒灯电流60 mA；负高压300 V；载气流量400 mL·min^-1；屏蔽气流600 mL·min^-1。测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；延迟时间1 s，读数时间7 s。

2.1.6 硒标准曲线、检出限、精密度

取3.0、12.0、18.0、24.0、30.0 ng·mL^-1硒标准溶液，测定其荧光强度，并进行回归分析。结果，线性范围3.0~30.0 ng·mL^-1，硒线性方程：

$ Y = 60.203\;9X + 22.732\;6\;\;r = 0.999\;7 $

根据本仪器设定的检出限测定程序，连续测定试剂空白溶液（不加待测样品的试剂空白，按“1.2”项下方法制备的溶液）11次，根据公式DL=3σ/K，自动计算检出限为0.16 μg·L^-1。对标准溶液（5 ng·mL^-1）连续测定11次，RSD为1.7%。

2.1.7 加样回收率

精密称定黄鳍金枪鱼样品适量，加入低、中、高3种浓度的标准溶液适量，按照“1.2”项下方法操作，制备供试溶液，用本文优化后的条件进行测定，测得加样回收率结果见表 2。回收率范围为92.6%~101.8%，准确度较好。

2.1.8 4种金枪鱼背部肉硒含量测定

对蓝鳍金枪鱼、长鳍金枪鱼、黄鳍金枪鱼、大眼金枪鱼背部肉硒进行测定，并比较4种金枪鱼背部肉中硒的含量。由表 3可知，蓝鳍金枪鱼背部肉硒的含量最高，其他3种金枪鱼背部肉硒含量由高到低依次为大眼金枪鱼、黄鳍金枪鱼、长鳍金枪鱼。

3 结论

硒是人体必需的重要微量元素，成人每天通过尿液、粪便、汗液和毛发等排出的硒约为50 μg ^[11]，这些硒的损失主要通过摄入食物中所含的微量硒来补充，硒的推荐日摄入量被限制在每人50~200 μg之间^[17]。由本文实验结果可知，金枪鱼背部肉中硒的含量极为丰富，具有很高的营养价值，是补硒的理想物质。本文建立了原子荧光法测定金枪鱼背部肉中硒含量的测定方法。该方法具有简便、快速、准确和灵敏等特点，可用于不同品种金枪鱼肉中的硒的测定。