自然风干处理前后活血丹挥发油化学组分GC-MS分析

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陈月华, 智亚楠, 陈利军, 陈思宇, 梁利香. 自然风干处理前后活血丹挥发油化学组分GC-MS分析[J]. 药物分析杂志, 2017, 37(8): 1476-1480. DOI: 10.16155/j.0254-1793.2017.08.17.

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CHEN Yue-hua, ZHI Ya-nan, CHEN Li-jun, CHEN Si-yu, LIANG Li-xiang. Analysis of the essential oil in Glechoma longituba (Nakai) Kupr. before and after air drying by GC-MS[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis, 2017, 37(8): 1476-1480. DOI: 10.16155/j.0254-1793.2017.08.17.

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基金项目

国家自然科学基金项目（301401798）

第一作者

陈月华, Tel:15188277316;E-mail:chenyuehua1981@126.com。

文章历史

收稿日期：2016-09-16

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自然风干处理前后活血丹挥发油化学组分GC-MS分析

陈月华 , 智亚楠 , 陈利军 , 陈思宇 , 梁利香

信阳农林学院, 信阳 464000

收稿日期：2016-09-16

基金项目：国家自然科学基金项目（301401798）

第一作者：陈月华, Tel:15188277316;E-mail:chenyuehua1981@126.com

摘要：目的：研究活血丹风干前后挥发油的化学成分，比较两者之间的异同。方法：采用水蒸气蒸馏法提取自然风干处理前后活血丹的挥发油，计算挥发油含油率并进行比较。利用GC-MS分析其化学组分，峰面积归一法比较各组分间的相对含量。色谱条件：采用毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），柱温为程序升温（起始柱温60℃，保持2 min，以10℃·min^-1升温速率升至230℃，保持1 min），载气为高纯氦气，柱流速为1.0 mL·min^-1，进样量1.0 μL，挥发油用乙醚稀释100倍，不分流；质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，扫描范围33~350 amu，四极杆温度和离子源温度分别为150℃和230℃。结果：自然风干前后活血丹挥发油平均含量分别为0.15%和0.01%；分别检出32个和27个色谱峰，鉴定了其中的23个和18个化合物，各占挥发油总量的91.8%和90.2%。主要成分包括柠檬烯、薄荷酮、胡薄荷酮、γ-榄香烯、石竹烯等。结论：经自然风干处理后，活血丹的含油率下降，自然风干处理前后的活血丹挥发油化学成分基本一致，但各主要成分含量存在明显差异。

关键词：活血丹连钱草挥发油自然风干处理含油率水蒸气蒸馏气相色谱-质谱分析

Analysis of the essential oil in Glechoma longituba (Nakai) Kupr. before and after air drying by GC-MS

CHEN Yue-hua, ZHI Ya-nan, CHEN Li-jun, CHEN Si-yu, LIANG Li-xiang

Xinyang College of Agriculture and Forestry, Xinyang 464000, China

Abstract: Objective: To investigate the chemical components of essential oil from Glechoma longituba(Nakai) Kupr. before and after air drying, and to compare their differences.Methods: The essential oil was extracted via the steam distillation method and the yields were compared. The components were identified by GC-MS and determined via area normalization method. The chromatographic conditions were as follows:Capillary column (30 m×0.25 mm×0.25 μm)was used combining temperature programming(the initial temperature was 60℃, kept for 2 min, then rose to 230℃ at a speed of 10℃·min^-1, and maintained for 1 min). The carrier gas was He with the flow of 1.0 mL·min^-1. The essential oil was diluted with ethyl ether by 100 times. Splitless injection was used and the injection volume was 1 μL. The mass spectrometric conditions were as follows:The ionization voltage of the EI source was 70 eV, and the scan range was 33-350 amu. Temperature of quadrupole and ion source was 150℃ and 230℃, respectively.Results: The contents of essential oil from G. longituba before and after air drying were 0.15% and 0.01%, respectively. 32 and 27 chromatographic peaks were detected in the essential oil from G. longituba before and after air drying, respectively. Among them, 23 and 18 compounds were identified, which accounted for 91.8% and 90.2% of the total essential oil, respectively. The main components detected in the essential oil were limonene (24.43%, 31.01%), menthone(15.93%, 17.15%), pulegone(12.81%, 9.92%), γ-elemene(11.27, 6.50%)and caryophyllene(6.20%, 4.49%).Conclusion: After air drying, there was a significant reduction of the essential oil in G. longituba. The components of essential oil from G. longituba before and after air drying were basically the same, but their amounts varied.

Key words: Glechoma longituba Glechomae Herba essential oil air drying oil yields steam distillation GC-MS analysis

活血丹[Glechoma longituba（Nakai）Kupr.]又名金钱艾、金钱薄荷、透骨风等，是唇形科活血丹属多年生草本植物。广泛分布于全国各地，常常生长在海拔50~2 000 m范围内的林缘、疏林下、草地中、溪边等阴湿生境中。其干燥地上部分入药，药材名连钱草^[1-3]。作为中草药，活血丹具有广泛的药理作用，已被证明具有利尿利胆^[2]、降血糖^[4]、降脂排石^[5-6]、抗菌、抗氧化^{[4, 7-10]}、抗肿瘤等活性^[11]，现常用于治疗尿路感染、黄疸、小儿惊风、跌打扭伤、风湿性关节炎等疾病^{[1, 4, 8-10]}。活血丹中含有丰富的化学成分，包括萜类、黄酮类、有机酸类、甾体类、醇类等^{[8-10, 12-16]}。活血丹全草含较丰富的挥发油，是其药效的来源之一。本研究以信阳产活血丹为研究对象，并对活血丹植物材料进行风干处理，以水蒸气蒸馏法提取其挥发油，采用GC-MS分析挥发油组分，比较自然风干处理前后活血丹挥发油组成及含量的变化，以期为活血丹的综合开发利用提供试验依据。

1 材料与方法 1.1 试验材料

供试活血丹全草于2015年10月中旬采于信阳农林学院校园内，带至室内，分为2份，一份直接提取挥发油（鲜叶），另外一份自然风干（7~8 d）后提取挥发油（干叶）。提取挥发油前植物材料剪为不超过0.5 cm的小段。

1.2 挥发油的提取

准确称量植物材料，按参考文献[17]方法提取挥发油，得透明的淡黄色具浓郁气味的油状液体，即挥发油样品。鲜叶、自然风干后的挥发油样品各平行测定3次，计算含油率。挥发油样品4 ℃冰箱保存备用。

1.3 仪器及分析条件

主要仪器：安捷伦6850/5975气质联用仪（GC-MS），NIST05谱库。色谱条件：安捷伦公司HP-5 MS毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm；固定相：（5%苯基）-甲基聚硅氧烷）；程序升温，起始柱温60 ℃，保持2 min，以10 ℃·min^-1升温速率升至230 ℃，保持1 min；载气为高纯氦气；柱流速为1.0 mL·min^-1；进样量1.0 μL，挥发油用乙醚稀释100倍即得供试品溶液，不分流。质谱条件：EI离子源，电子能量70 eV，扫描范围33~350 amu，四极杆温度和离子源温度分别为150 ℃和230 ℃，EM电压1 729 V。

1.4 方法学考察 1.4.1 分析时间考察

吸取挥发油供试品溶液1.0 μL，注入气质联用仪，运行100 min，记录色谱图，20 min以后已无明显色谱峰，因此分析时间定为20 min。

1.4.2 精密度试验

取活血丹鲜叶的挥发油供试品溶液，按“1.3”项下色谱条件连续进样5次，以5个主要成分柠檬烯、薄荷酮、胡薄荷酮、γ-榄香烯和石竹烯的保留时间和相对含量RSD为指标进行统计分析。结果表明，5个主要成分保留时间的RSD < 0.3%，相对含量的RSD < 3.0%，表明精密度较好。

1.4.3 重复性试验

取活血丹鲜叶样品5份，按“1.2”项下方法制备活血丹鲜叶挥发油供试品溶液，在所建立的测定条件下测定，记录色谱图。结果表明，5个主要成分保留时间的RSD < 0.3%，相对含量的RSD < 5.0%，表明重复性良好。

1.4.4 稳定性试验

取活血丹鲜叶挥发油样品5份，按“1.3”项下的色谱条件在0、4、8、12、24 h进样分析，考察各特征色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性。结果表明，5个主要成分保留时间的RSD < 0.2%，相对含量的RSD < 3.0%，表明挥发油样品在24 h内稳定性良好。

2 结果与分析 2.1 自然风干处理前后活血丹的含油率

采用水蒸气蒸馏法提取自然风干处理前后活血丹的挥发油，含油率分别为0.15%和0.01%。

2.2 自然风干处理前后活血丹挥发油组分GC-MS分析

采用GC-MS对自然风干前后的活血丹挥发油的化学组分进行分析，分别分离到32和27个组分，其中共有组分26个，非共有组分7个（图 1，表 1）。采用峰面积归一法测得各组分的相对含量，所得质谱图经NIST05质谱数据库检索，并经CAS号检索，分别鉴定了其中的23和18个组分，各占挥发油总量的91.8%和90.2%。

A.处理前（before air drying）B.处理后（after air drying）图 1 自然风干处理前后活血丹挥发油总离子流图 Figure 1 Total ion chromatograms of the essential oil from G.longituba before and after air drying

表 1 自然风干处理前后活血丹挥发油化学组分（n=3） Table 1 The chemical constituents of the essential oil from G.longituba before and after air drying

峰号（peak No.）	t_R/min	化合物（compound）	分子式（formula）	相对含量（relative content）/%
峰号（peak No.）	t_R/min	化合物（compound）	分子式（formula）	处理前（before air drying）	处理后（after air drying）
1	3.845	未鉴定（unknown）		0.41	0.23
2	5.243	α-蒎烯（α-pinene）	C₁₀H₁₆	0.12	0.23
3	5.906	未鉴定（unknown）		0.66	2.73
4	5.949	β-蒎烯（β-pinene）	C₁₀H₁₆	0.88	—
5	6.122	β-侧柏烯（β-thujene）	C₁₀H₁₆	2.93	4.23
6	6.785	柠檬烯（limonene）	C₁₀H₁₆	24.43	31.01
7	6.871	（E）-3，7-二甲基-1，3，6-辛三烯（（E）-3，7-dimethyl-1，3，6-octatriene，）	C₁₀H₁₆	2.89	5.26
8	7.051	（Z）-3，7-二甲基-1，3，6-辛三烯（（Z）-3，7-dimethyl-1，3，6-octatriene，）	C₁₀H₁₆	1.12	2.40
9	7.743	萜品油烯（terpinolene）	C₁₀H₁₆	0.13	0.26
10	7.880	未鉴定（unknown）		0.30	0.27
11	8.349	（E，Z）-2，6-二甲基-1，4，6-辛三烯（（E，Z）-2，6-dimethyl-1，4，6-octatriene，）	C₁₀H₁₆	0.50	0.76
12	8.795	未鉴定（unknown）		0.82	0.67
13	8.975	薄荷酮（menthone）	C₁₀H₁₈O	15.93	17.15
14	9.141	未鉴定（unknown）		1.33	1.37
15	9.350	α-萜品醇（α-terpineol）	C₁₀H₁₈O	0.16	—
16	9.473	6，6-二甲基-双环[3.1.1]庚-2-烯-2-甲醛（6，6-dimethyl-bicyclo[3.1.1]hept-2-ene-2-carboxaldehyde）	C₁₀H₁₈O	0.18	0.18
17	10.114	胡薄荷酮（pulegone）	C₁₀H₁₆O	12.81	9.92
18	10.777	1，7，7-三甲基-双环[2.2.1]庚-2-醇-乙酸酯（，1，7，7-trimethyl-bicyclo[2.2.1]hept-2-ylester acetic acid）	C₁₂H₂₀O₂	0.15	—
19	11.541	未鉴定（unknown）		0.14	—
20	12.333	β-榄香烯（β-elemene）	C₁₅H₂₄	1.43	0.84
21	12.780	石竹烯（caryophyllene）	C₁₅H₂₄	6.20	4.49
22	12.946	γ-榄香烯（γ-elemene）	C₁₅H₂₄	11.27	6.50
23	13.256	α-石竹烯（（α-caryophyllene）	C₁₅H₂₄	3.43	2.34
24	13.645	大根香叶烯D（germacrene D）	C₁₅H₂₄	1.99	1.49
25	13.868	牛儿烯（bicyclogermacrene）	C₁₅H₂₄	0.59	0.30
26	14.027	（E，Z）-α-金合欢烯（（E，Z）-（α-farnesene）	C₁₅H₂₄	0.13	—
27	14.250	荜澄茄烯（cadinene）	C₁₅H₂₄	0.83	0.54
28	14.776	未鉴定（unknown）		3.78	3.61
29	15.079	2-异丙基-5-甲基-9-亚甲基-双环[4.4.0]癸-1-烯（2-isopropyl-5-methyl-9-methylene-bicyclo[4.4.0]dec-1-ene）	C₁₅H₂₄	2.54	2.29
30	16.160	未鉴定（unknown）		0.47	0.22
31	16.246	未鉴定（unknown）		—	0.44
32	16.390	α-杜松醇（α-cadinol）	C₁₅H₂₆O	1.11	—
33	18.451	未鉴定（unknown）		0.32	0.28

表 1 自然风干处理前后活血丹挥发油化学组分（n=3） Table 1 The chemical constituents of the essential oil from G.longituba before and after air drying

从表 1可以看出，处理前后活血丹挥发油的组分基本相同，主要组分均为柠檬烯（24.43%，31.01%）、薄荷酮（15.93%，17.15%）、胡薄荷酮（12.81%，9.92%）、γ-榄香烯（11.27，6.50%）和石竹烯（6.20%，4.49%）。但各主要组分在处理前后相对含量差异较大。组分（E）-3，7-二甲基-1，3，6-辛三烯在处理前挥发油中相对含量较低（2.89%），处理后明显增加（5.26%）。其中7种非共有组分的相对含量均较低。

3 讨论

本研究中活血丹植物材料经自然风干处理后，含油率下降，表明在干燥过程中挥发油含量有散失。处理后分离到的化学组分数量减少，主要为个别相对含量较低的组分。处理前后主要化学组分种类没有发生变化，但相对含量有较大变化。

试验所分析的信阳地区活血丹鲜叶和干叶挥发油的化学组分及含量与前人的研究结果有明显的不同，如周子晔等^[18]报道浙产活血丹挥发油的主要成分是石竹烯及其氧化物、早熟素Ⅰ和Ⅱ、喇叭烯、异松蒎酮、β-荜澄茄油烯等；樊钰虎等^[19]分析的重庆缙云山产活血丹挥发油的主要成分为6，10-二甲基-2-异丙烯基螺[4, 5]-6-癸烯-8-酮、松莰酮、（+）-喇叭烯、β-葎草烯等。这些差异可能与植物的生长环境、采收生育期、挥发油的提取方法等的不同有关。本次研究对活血丹挥发油成分的分析，可以为活血丹在中药中的作用提供理论依据，为活血丹药用价值的进一步开发和质量评定提供基础依据。

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