厚朴排气合剂收载于国家药品标准《新药转正标准第82册》^[1]，其处方组成为厚朴、木香、枳实和大黄，具有行气消胀、宽中除满的功效，临床常用于腹部非胃肠吻合术后早期肠麻痹，症见腹部胀满，胀痛不适，腹部膨隆，无排气排便，舌质淡红，舌苔薄白或薄腻^{[2, 3]}。厚朴排气合剂的标准目前仅为薄层鉴别和大黄的含量测定项，对君药厚朴没有进行相关规定^[4]。国家食品药品监督管理局于2009年向生产企业下发的药品标准颁布件中，仅对厚朴的和厚朴酚与厚朴酚进行了含量规定，未对其他成分有要求，在厚朴排气合剂的质量控制上存在一定的缺陷，而2015年中国药典也未收载该品种，因此建立厚朴排气合剂主要成分检测方法对控制成药质量势在必行。厚朴主含和厚朴酚与厚朴酚，是厚朴排气合剂理气作用的主要有效成分^[5]，大黄中的大黄素和大黄酚是排气排便的主要成分^[6-7]，本文拟采用HPLC法同时检测厚朴排气合剂中的上述4种成分，为厚朴排气合剂的质量控制提供参考。

1 仪器与试药 1.1 仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪，安捷伦科技公司；OV-2001柱温箱，赛默飞世尔科技公司；Syncronis C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm；填料：十八烷基硅烷基键合硅胶）色谱柱，Thermo公司；XS-205电子分析天平，梅特勒-托利多公司；AS3120A型超声提取器，天津奥特赛恩斯仪器有限公司；3K15离心机，Sigma公司。

1.2 试药

对照品和厚朴酚（批号110730-20020）、厚朴酚（批号110729-20020）、大黄素（批号110756-200110）和大黄酚（批号110796-201017）均由中国食品药品检定研究院提供。厚朴排气合剂，规格为每瓶50 mL，国药准字Z20050563，瑞阳制药有限公司生产，批号15011501、15012301、15060801、15080301和15101601。甲醇为色谱纯、磷酸和乙酸乙酯均为分析纯，重蒸馏水。

2 方法与结果 2.1 色谱条件

色谱柱：Syncronis C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-0.1%磷酸水（B），梯度洗脱（0~15 min，80%A→85%A；15~40 min，85%A→95% A）；流速：1.0 mL·min^-1；检测波长：254nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备 2.2.1 混合对照品溶液

精密称取由五氧化二磷减压干燥至恒重的和厚朴酚、厚朴酚、大黄素与大黄酚的对照品适量，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含和厚朴酚194.67 mg，厚朴酚282.00 mg，大黄素23.07 ng和大黄酚、77.33 mg，即得混合对照品储备液。精密量取储备液3 mL，置于20 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL含和厚朴酚29.20 mg，厚朴酚42.31 mg，大黄素3.46 mg和大黄酚11.61 mg的混合对照品溶液。对照品储备液及混合对照品溶液均置于4 ℃冰箱密闭保存。

2.2.2 供试品溶液

取厚朴排气合剂5 mL，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次10 min，每次用乙酸乙酯20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3 专属性

取混合对照品溶液和供试品溶液各20 μL，按上述色谱条件，进行HPLC分析，和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚的保留时间分别为13.1、19.0、24.1和32.1 min，见图 1。

2.4 线性关系考察

精密量取混合对照品储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0和6.0 mL，分别置于20 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，记录色谱图，以质量浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标作图，进行线性回归，结果见表 1。

2.5 精密度试验

将混合对照品溶液连续进样5次，记录色谱图，记录和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚的峰面积并计算RSD，结果分别为3.2%、3.1%、3.2%和2.8%，表明精密度较好。

2.6 稳定性试验

取批号为15011501的厚朴排气合剂制成供试品溶液，每隔1 h进样1次，获得6次进样的和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚峰面积，计算RSD分别为3.2%、3.1%、3.4%和2.9%，表明供试品溶液中稳定性较好。

2.7 重复性试验

取批号为15011501的厚朴排气合剂5份，按“2.2.2”项下方法操作，进样测定和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚峰面积，计算平均含量分别为17.26、25.41、2.01和1.81 mg·mL^-1，RSD分别为3.1%、3.0%、3.2%和2.6%，表明本法的重复性较好。

2.8 加样回收率试验

分别精密量取批号为15011501的厚朴排气合剂4份各1 mL，分别置于10 mL量瓶中，分别精密加入和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚的混合对照品溶液（和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚的浓度分别为1.46、2.12、0.17和0.87 mg·mL^-1）1.0、3.0和5.0 mL，各2份，用溶剂稀释至刻度，混匀，每个溶液连续进3次，测定和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚加样回收率，结果见表 2。

2.9 含量测定

取5个批号的厚朴排气合剂，分别按“2.2.2”项方法制备供试品溶液，进样测定，以回归方程计算含量，结果见表 3。

3 讨论 3.1 流动相的选择

等度洗脱很难将和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚4种极性有差别的成分同时分离，因此采用梯度洗脱。依据大黄和厚朴中有效成分的分离文献[^8-12]，分别考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸水、甲醇-0.1%醋酸、乙腈-1%醋酸及乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱法，结果显示采用甲醇-0.1%磷酸水的梯度洗脱法，各个峰的分离效果较好，分离度均＞1.5。

3.2 检测波长的选择

参考文献[13-15]并结合和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚4个化合物的全波长扫描，分析在324、262和254 nm波长处各色谱峰的强度，结果显示4个化合物的色谱峰在254 nm处均有较大吸收，因此选择254 nm为检测波长。

3.3 提取溶剂的选择

分别考察以甲醇、乙醇、含水甲醇、含水乙醇及乙酸乙酯为提取溶剂的提取效果，结果采用乙酸乙酯提取的杂质峰较少，有效去除干扰成分，且不影响4个待测物的测定，因此选择乙酸乙酯为厚朴排气合剂的提取溶剂。

3.4 小结

目前公开的厚朴排气合剂的质量控制仅见于厚朴的和厚朴酚与厚朴酚含量测定，2015年版中国药典也未对厚朴排气合剂进行相关的质量规定，而本品在消化外科应用较广，因此有必要提高该制剂的质量标准，从有效成分的含量切入常常是质量标准提高的重要研究部分。本课题检测了上市品种的5批厚朴排气合剂中和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚含量，结果显示各批次的上述4个成分均可检测到，方法回收率高，重复性好，可见HPLC同时检测厚朴排气合剂中的和厚朴酚、厚朴酚、大黄素和大黄酚成分是可行性的，本法可为厚朴排气合剂、原材料或中间品的质量控制标准的建立提供参考。