芸香浸膏为枫香脂的乙醇提取物，是伤湿止痛膏、伤湿止痛搽剂等中成药的原料之一。目前，全国约有30多家中成药生产企业使用芸香浸膏作为原料。由于枫香脂原料掺假现象严重^[1]，导致芸香浸膏的质量参差不齐。至今为止芸香浸膏仍缺乏统一的药用标准，无法对其质量进行控制。本文采用薄层色谱法对芸香浸膏进行鉴别及对掺伪物松香进行检查，采用高效液相色谱法测定肉桂酸含量，为芸香浸膏的质量控制提供可靠的依据。

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱仪、Waters 2998紫外检测器、Waters Empower色谱管理软件（Waters公司）；Syncronis C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm；填料：十八烷基硅烷键合硅胶；Thermo公司）；AutoMatic TLC Sampler 4型全自动薄层色谱点样仪（卡玛公司）；高效硅胶GF₂₅₄薄层预制板HPTLC silica gel 60 F₂₅₄（Merck公司）；EV311旋转蒸发仪（北京莱伯泰科仪器有限公司）；XS205DU型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）、BUT2030-40-60型超声波清洗器（必能信超声上海有限公司）。

12批芸香浸膏来源于福建、广西等地；枫香脂对照药材（批号121637-201201）及松香酸对照品（批号111938-201201）、肉桂酸对照品（批号110786-200503）均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、冰醋酸为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果 2.1 鉴别与检查

取样品0.2 g，加乙醇10 mL溶解，即得供试品溶液；另取枫香脂对照药材0.2 g，同法制成对照药材溶液。再取松香酸对照品适量，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以正己烷-石油醚（60~90 ℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（6:2:3:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。在样品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。见图 1。

2.2 含量测定 2.2.1 对照品溶液的制备

取肉桂酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含8 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取样品约0.25 g，精密称定，加新制的乙醇制氢氧化钾试液（0.5 mol·L^-1）10 mL，加热回流1 h，于45 ℃水浴上减压蒸去乙醇，残渣加热水20 mL使均匀分散，放冷，加水30 mL与硫酸镁溶液（1.5→50）20 mL，混匀，静置10 min，滤过，滤渣用水20 mL分次洗涤，合并滤液与洗液，加盐酸调pH为1~2，用乙醚振摇提取4次（40、40、20、20 mL），合并乙醚液，挥干；残渣用甲醇溶解，转移至50 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 色谱条件与系统适用性试验

采用Syncronis C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm），以甲醇-1%醋酸溶液（50:50）为流动相，流速1.0 mL·min^-1，检测波长285 nm，柱温30 ℃，进样量10 µL。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，在上述色谱条件下进样，色谱图见图 2。肉桂酸与其他成分色谱峰得到较好的分离，分离度大于1.5，且峰形良好，肉桂酸峰理论塔板数均不低于7 000。

2.2.4 方法学验证 2.2.4.1 线性关系考察

取肉桂酸对照品适量，以甲醇制成质量浓度分别为1.66、4.15、8.30、16.61、24.91、41.52 μg·mL^-1的系列对照品溶液；精密吸取上述系列浓度对照品溶液各10 µL，分别按“2.2.3”项下色谱条件进样测定；以肉桂酸对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：

$\begin{array}{*{20}{c}} {Y = 83{\rm{ }}120X - 48{\rm{ }}022}&{r = 0.999{\rm{ }}9} \end{array}$

结果表明肉桂酸质量浓度在1.66~41.52 μg·mL^-1范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.2.4.2 检出限与定量限测定

取对照品溶液逐级稀释，按照“2.2.3”项下色谱条件进样测定；以肉桂酸计，信噪比S/N=3时相应的浓度确定检测限（LOD），以信噪比S/N=10时相应的浓度确定量限（LOQ）。在本色谱条件下，LOD为16.61 ng·mL^-1，LOQ为49.82 ng·mL^-1。

2.2.4.3 精密度试验

取“2.2.1”项下对照品溶液10 µL，连续进样6次，肉桂酸峰面积的RSD为0.2%。表明仪器精密度良好。

2.2.4.4 稳定性试验

取同一批供试品溶液（样品批号2011410001），分别于0、1、4、8、12、20 h各取10 µL进样，测定峰面积。肉桂酸峰面积的RSD为0.1%。结果表明，供试品溶液在20 h内稳定性良好。

2.2.4.5 重复性试验

取同一批号样品（批号2011410001）6份，分别按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，进样测定，结果样品中肉桂酸平均含量（n=6）为14.90%，RSD为2.6%，表明方法的重复性良好。。

2.2.4.6 加样回收试验

精密称取已知含量的样品（批号2011410001，含量为14.90%）适量，共9份，分别精密加入对照品适量，按“2.2.2”项下方法制成供试溶液，进样测定，计算回收率。结果见表 1。

2.2.5 样品测定

取不同来源的12批样品的供试品溶液，按照“2.2.3”项下色谱条件进样测定，以外标法计算含量，结果见表 2。

3 讨论

伤湿止痛膏、伤湿止痛搽剂为常用中成药己收载于中国药典2015年版，其中芸香浸膏为主要原料之一。但至今为止，芸香浸膏仍无专用药用标准。只有轻工部推荐标准^[2]及按摩软膏（按摩乳）附芸香浸膏质量标准^[3]1168，其质控项目有色状、溶解度、含膏量、折光率几个物理性指标，对其内在质量无法控制。因此，制定鉴别、含量测定方法很有必要。

因枫香脂来源较紧缺，市场上常出现用松脂、松香掺假。为了防止假劣枫香脂被用于生产芸香浸膏，故增加松香酸的TLC检查。为了简化操作，采用TLC鉴别相同的层析条件，经方法学考察，效果良好。试验结果表明，在薄层色谱中，对照药材与正品枫香脂均无松香酸的对应斑点，而掺伪品呈现与松香酸对照品相同的斑点。并曾进行过松香酸检出限试验：取样品（批号2011410001）0.2 g，分别加入质量浓度分别为10、20、40、50 μg·mL^-1松香酸对照品溶液各10 mL使溶解，按“2.1”展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。当加入的对照品质量浓度小于20 μg·mL^-1，TLC未检出，松香酸的检出限为100 μg·g^-1。

枫香脂与苏合香^[3]164来源于金缕梅科同属植物的树脂，含有肉桂酸及其脂类、挥发油等成分，药理作用类似^[4-12]，参考中国药典2015年版苏合香的检测方法，建立含量测定方法。经方法学验证，表明本文方法灵敏，精密度高，重现性好，结果准确，可作为芸香浸膏的质量控制方法。

采用传统采集法得到的枫香脂是固态树脂，而目前多采用割采法得到液态树脂^[13-15]。用液态枫香脂直接生产的芸香浸膏肉桂酸含量特别高（见表 2中的2号样品）。因此，对芸香浸膏的原料质量控制、肉桂酸的含量指标准确以及稳定性还有必要做进一步研究。