小叶榕Ficus microcarpa L. f.是桑科榕属植物，主要分布在广东、广西、海南、福建、贵州等地，其性味淡、凉，具有止咳化痰、清热祛湿、活血散瘀的功效^[1]，民间用于治疗跌打损伤、支气管炎、流感、百日咳、扁桃体炎、菌痢、肠炎、目赤、牙痛等症，传统主要以叶入药。

经查有关文献资料，国内已有对小叶榕止咳化痰作用的报道^[2-3]，但对成分的研究相对较少^[4-8]。作者前期对小叶榕的止咳化痰有效部位进行了筛选，并对其有效部位的化学成分进行了研究，主要含黄酮类化合物，分析鉴定出了3个含量相对较大成分，分别为表阿夫儿茶精、牡荆素、异牡荆苷。通过测定表阿夫儿茶精、牡荆素、异牡荆苷的含量，可以更好地控制和评价小叶榕药材的内在质量。本实验建立UPLC同时测定小叶榕叶中表阿夫儿茶精、牡荆素、异牡荆苷含量的方法，为建立全面合理的小叶榕药材质量控制和评价标准奠定基础；同时采用该方法测定小叶榕茎、气生根、果实中3个成分的含量，进一步了解小叶榕主要黄酮类成分在植物中的分布情况，为确定小叶榕止咳化痰作用入药部位提供理论依据。

1 仪器与试药 1.1 仪器

Waters Acquity UPLC超高效液相色谱仪，配置四元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、PAD检测器、Empower 2色谱工作站（Waters公司），CPA225D电子天平（Sartorius公司），BS224S电子天平（Sartorius公司），610H超声清洗机（Zealway公司），3-30K离心机（Sigma公司），Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm，Waters公司）。

1.2 试药

对照品表阿夫儿茶精为自行从小叶榕药材中分离、精制而得，经MS、¹H-NMR和¹³C-NMR确定结构，UPLC峰面积归一法测得纯度＞98%；对照品牡荆素（批号111687-200602）购自中国食品药品检定研究院；对照品异牡荆苷（批号150921）购自上海融禾医药科技发展有限公司，纯度均＞98%。

甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为超纯水（Milli-Q超纯水系统）。

小叶榕药材采自福建厦门五缘湾湿地公园，由福建省食品药品质量检验研究院金鸣副教授鉴定为Ficus microcarpa L. f.。

2 方法与结果 2.1 混合对照品储备液的制备

分别取表阿夫儿茶精、牡荆素、异牡荆苷的对照品适量，精密称定，加50%甲醇水溶液溶解制成浓度分别为0.14、0.252、0.464 mg·mL^-1的混合溶液，即得。

2.2 供试品溶液的制备

取小叶榕各部位粉末（过3号筛）各约1 g，精密称定，置于具塞三角瓶中，精密加入50%甲醇水溶液10 mL，称量，超声处理（功率900 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称量，用50%甲醇水溶液补足减失的量，摇匀，5 000 r·min^-1离心15 min，取上清液过0.22 μm微孔滤膜，即得。

2.3 色谱条件

采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），以甲醇（A）-0.1%磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0~5 min，20%A→20%A；5~30 min，20%A→50%A；30~35 min，50%A→20%A），流速0.3 mL·min^-1，检测波长为270 nm，柱温为35 ℃，进样量为3 μL。对照品及供试品的色谱图见图 1。

2.4 线性关系考察

精密吸取“2.1”项下的混合对照品储备液0.5、1、2、3、4、5 mL，分别置于25 mL量瓶中，加50%甲醇水溶液定容至刻度，摇匀。在上述色谱条件下进样分析，以各成分峰面积Y为纵坐标，质量浓度X（mg·mL^-1）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程和线性范围见表 1，表明各成分质量浓度在相应范围内线性关系良好。

2.5 检测限和定量限

取“2.1”项下的混合对照品储备液适量，分别用50%甲醇水溶液逐级稀释，在上述色谱条件下进样分析，当信噪比（S/N）分别为3和10时，确定为检测限及定量限。结果表阿夫儿茶精、牡荆素、异牡荆苷的检测限分别为0.056、0.090 7、0.074 2 μg·mL^-1，定量限分别为0.14、0.302 4、0.185 6 μg·mL^-1。

2.6 精密度考察

精密吸取同一份小叶榕叶供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，计算表阿夫儿茶精、牡荆素、异牡荆苷峰面积的RSD分别为1.86%、1.57%、0.60%，表明本法精密度良好。

2.7 稳定性考察

取同一份小叶榕叶供试品溶液，室温放置，在上述色谱条件下分别于0、2、4、8、10、12、24 h进样分析，计算表阿夫儿茶精、牡荆素、异牡荆苷峰面积的RSD分别为2.05%、1.73%、1.10%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性考察

取小叶榕叶粉末1 g，按“2.2”项下方法操作，平行制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，计算表阿夫儿茶精、牡荆素、异牡荆苷平均含量分别为0.176、0.372、0.510 mg·g^-1，RSD分别为1.90%、1.87%、1.37%，表明本法重复性良好。

2.9 加样回收率考察

取已知含量的小叶榕叶粉末9份，每份0.5 g，3份为一组，精密称定。分别精密加入对照品溶液适量，按“2.2”项下方法制成低、中、高3个浓度的供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，计算平均回收率，结果见表 2，表明本法具有良好的加样回收率。

2.10 含量测定

分别取小叶榕叶、茎、气生根、果实粉末约1 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，依据外标法计算表阿夫儿茶精、牡荆素、异牡荆苷含量，结果见表 3。

3 讨论 3.1 检测波长的选择

通过对各成分紫外吸收光谱的分析并结合文献报道，表阿夫儿茶精的最大吸收波长为208、280 nm^[4]，牡荆素、异牡荆苷的最大吸收波长为270、338 nm^[9-11]，故以270 nm为检测波长。

3.2 提取条件的选择

供试品溶液制备时对不同提取溶剂（30%、50%、70%甲醇水溶液）及提取时间（15、30、45 min）进行考察，结果采用50%甲醇水溶液作为提取溶剂时提取率最高，同时随着提取时间的增加，提取率有所提高，但提取30 min的提取率与45 min相差不大，故供试品溶液的制备选择50%甲醇超声提取30 min。

3.3 实验结果分析

由表 3可知，仅小叶榕叶中含有表阿夫儿茶精，仅叶、果实中含有异牡荆苷，叶、茎、气生根、果实中均含有牡荆素，虽茎中牡荆素的含量最高，但综合3个黄酮类成分的含量，确定叶为小叶榕止咳化痰作用的最佳入药部位。

2015年版中国药典及其他中药材标准中均未见有关小叶榕药材含量测定的相关标准^[12-13]，本实验建立了同时测定小叶榕中3个黄酮类成分含量的方法，操作简单，准确可靠，重复性好，可用于小叶榕药材的质量控制和评价。同时比较了小叶榕的叶、茎、气生根、果实中3个黄酮类成分的含量，为确定小叶榕药材的合理应用提供了理论依据。