‘岭南奇蝶’属建兰奇蝶花，其叶面翠绿，叶型中垂，新芽呈紫红色，整体端庄素雅，花型较稳定，具有较高的观赏价值。野生兰花一般生长较缓慢，数量有限，优良的新品种更为稀有。传统的兰花繁殖方式为分株法，其周期长、速度慢，难以满足市场的需求^[1-4]。目前，有关兰花组织培养方面的文献较多^[5-8]，但建兰‘岭南奇蝶’组织培养研究国内尚未见报道。本文以‘岭南奇蝶’的种子为外植体，开展组织培养研究，以期为‘岭南奇蝶’组培苗的产业化生产提供依据，同时为兰花优良种苗的推广提供技术支持。

选择福建省林业科技试验中心温室大棚种植的建兰‘岭南奇蝶’作为试验材料。

以建兰‘岭南奇蝶’自交并成熟的果荚为诱导材料，用体积分数为75%酒精棉擦拭干净，放于自来水下冲洗0.5～1 h，再用无菌水冲洗2遍后置于70%酒精中处理1 min，立刻浸入0.1%HgCl₂分别消毒15、20、25、30 min，最后用无菌水冲洗5遍。用手术刀将果荚剖开，取出种子并播种于萌发培养基上，每个处理接种40瓶，培养45 d后，统计各处理的污染率和存活率。‘岭南奇蝶’种子萌发培养基为：1/2 MS+50 g·L^-1土豆+0.8 g·L^-1活性炭+30 g·L^-1糖。

以1/2 MS+0.1 mg·L^-1 6-BA+0.8 g·L^-1活性炭+30 g·L^-1糖为基本培养基，分别添加0.5、1.5、3.0 mg·L^-1 NAA及0.5、1.5、3.0 mg·L^-1 IBA，以不加生长素为对照，共7个处理。每个处理均接入1 cm左右生长一致且无分枝的根状茎100个，重复3次。培养室中培养45 d时，统计根状茎的增殖系数、鲜重、侧枝长度等指标。增殖系数=根状茎侧枝数/接种根状茎数。

基本培养基(因素A)共设3个水平：MS、1/2 MS、MS(改良);6-BA浓度(因素B)3个水平：0.5、1.5、3.0 mg·L^-1；NAA浓度(因素C)3个水平：0、0.2、0.4 mg·L^-1，进行正交试验，共9个处理，培养基代号分别为1～9,试验设计见表 1。选取1 cm左右，生长一致，并且无分枝的根状茎，每个处理接种30个，重复3次。在培养室中培养45 d时，统计诱导的新芽个数，计算平均分化率：分化率/%=诱导出芽的根状茎数/根状茎总数×100。

以1/3 MS+0.5 g·L^-1蛋白胨+0.5 g·L^-1活性炭+20 g·L^-1糖为基本培养基，分别添加50 g·L^-1土豆、50 g·L^-1香蕉、50 mL·L^-1椰汁，以不添加有机添加物为对照，共4个处理。每瓶培养基接种‘岭南奇蝶’不定芽10个，每个处理接种10瓶，重复3次。培养60 d后，统计芽的生长及生根情况。

所用培养基中均加入20～30 g·L^-1蔗糖、5.0~5.2 g·L^-1琼脂，并调节pH值为5.6左右。培养温度22～25 ℃，光照12 h·d^-1，光强2 000 lx。

采用DPS软件进行统计分析。

由表 2所示，当HgCl₂消毒时间低于25 min时，外植体污染率高于35.0%，而当消毒时间高于25 min时，污染率大大降低，均低于10%。因此，‘岭南奇蝶’外植体较适宜的消毒方法为：0.1% HgCl₂溶液消毒25～30 min。存活率取决于污染率，污染的种子丧失了萌发的能力，因此当污染率低至7.5%时，存活率最高，达92.5%。

由表 3可知，添加生长素对兰花根状茎增殖生长有显著的促进作用。添加NAA后，‘岭南奇蝶’根状茎的增殖系数均极显著高于对照。当培养基中添加3.0 mg·L^-1 NAA时，根状茎的鲜重、侧枝长均高于其他处理组；当培养基中添加0.5 mg·L^-1 IBA时，根状茎的增殖系数显著高于对照组，而当IBA浓度高于3.0 mg·L^-1时，增殖系数反而降低，并且与对照组差异不显著。因此，添加0.5～3.0 mg·L^-1 NAA与0.5～1.5 mg·L^-1 IBA均有利于‘岭南奇蝶’根状茎继代增殖生长，增殖系数均达5.25以上，根状茎生长良好(图 1)。

	图1 ‘岭南奇蝶’根状茎继代苗 Fig.1 C.ensifolium cv. ‘lingnanqidie’ rhizomes subculture seedlings
图选项

将‘岭南奇蝶’根状茎接种到诱导分化的培养基上培养25～60 d，观察其根状茎长出新芽的情况。培养25 d时，可观察到根状茎不断变粗、变绿，在其表面有小芽冒出；培养60 d时，根状茎分化出丛生芽。对试验数据进行统计及方差分析，结果见表 4、5。由表 4可知，6号培养基对‘岭南奇蝶’根状茎分化的效果最理想，分化率可达 63.6%，显著高于其他处理组。因此，‘岭南奇蝶’根状茎分化的最佳培养基配方为:1/2 MS+3.0 mg·L^-1 6-BA。由表 5可知，基本培养基、6-BA、NAA对‘岭南奇蝶’根状茎分化率的影响均达极显著水平，3个因素影响根状茎分化率的主次关系为：A>B>C,即基本培养基>6-BA>NAA。

‘岭南奇蝶’根状茎分化出的芽比较细弱(图 2)，可通过添加天然有机添加物进行壮苗及生根培养。本试验以1/3 MS+0.5 g·L^-1蛋白胨+0.5 g·L^-1活性炭+20 g·L^-1糖为基本培养基，分别添加50 g·L^-1土豆、50 g·L^-1香蕉、50 mL·L^-1椰汁,‘岭南奇蝶’生根情况见表 6。由表 6可知，添加土豆和香蕉对‘岭南奇蝶’分化苗的增高及生根有明显的促进作用，显著差异于添加椰汁的处理组和对照组。添加椰汁虽然也有利于苗的增高及根数的增加，但是效果不如其他处理组。因此，‘岭南奇蝶’壮苗生根的有机添加物以土豆或香蕉为宜，其生根苗粗壮(图 3)，平均根数达4.20条以上，生根率高达100%。

	图2 ‘岭南奇蝶’根状茎芽的分化培养 Fig.2 Differentiation and cultivation of C.ensifolium cv.‘lingnanqidie’ rhizome bud
图选项

	图3 ‘岭南奇蝶’壮苗生根培养 Fig.3 C.ensifolium cv.‘lingnanqidie’ seedling rooting culture
图选项

以兰花茎尖为外植体进行消毒污染率一般比较高，导致大多数兰花无菌体系难以建立^[9-10]。本试验以‘岭南奇蝶’种子为外植体进行消毒，灭菌效果较为理想，污染率低至7.5%，且存活率高达92.5%，克服了通过茎尖作为诱导材料污染率居高不下的难题^[11]。徐程等^[12]、刘明志等^[13]以丛生芽的方式进行增殖，发现该增殖方式缺陷比较明显，平均单芽的增殖数不高。本试验在根状茎增殖培养基中添加0.5～3.0 mg·L^-1NAA 及0.5～1.5 mg·L^-1IBA，大大提高了增殖系数，增殖倍数达5.25，同时，通过正交试验方法优化了根状茎的分化培养基使其分化率达63.6%，从而加快了兰花新优品种的扩繁增殖速度，在短期内提供大量的优质种苗。

有机添加物对壮苗生根存在影响。本研究表明，香蕉和土豆对‘岭南奇蝶’的壮苗生根有明显的促进作用，苗高度及平均根数与对照组相比均显著增加，生根率可达100%。