子宫内膜癌作为女性生殖道常见的上皮性恶性肿瘤，发病率呈升高趋势，且出现年轻化^[1]。目前，其发病原因及机制尚未完全清楚。早期明确诊断及干预对改善患者预后和延长患者生存期具有重要意义^[2-3]。因此，从分子生物学角度深入探讨子宫内膜癌发病机制及早期诊断及预后评估的敏感基因已成为临床研究重点。黏蛋白(mucins，MUCs)作为广泛存在于机体中的一种高相对分子质量的糖蛋白，具有细胞保护和润滑作用，在表皮细胞分化、细胞间黏附、细胞信号转导及免疫应答等生物学功能中发挥重要作用^[4]。MUC4作为一种跨膜型MUCs家族成员，具有癌基因特性且在多种恶性肿瘤组织中表达异常，参与肿瘤发生和进展过程^[5]。本研究拟分析子宫内膜癌组织中MUC4表达，探讨其与临床病理特征及预后的关系，以期为子宫内膜癌机制研究提供参考。

1 资料与方法 1.1 一般资料

选取2012年3月至2013年3月在河南省焦作煤业(集团)中央医院行手术切除且资料完整的76例子宫内膜癌患者组织石蜡标本。所有患者术前均未行放化疗，术后病理学检查示子宫内膜样腺癌。年龄41~74岁，中位年龄53岁。按照国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO)2009分期标准^[6]：Ⅰ期56例，Ⅱ期6例，Ⅲ期10例，Ⅳ期4例；分化程度：低分化24例，中分化21例，高分化31例；浸润深度：≥1/2肌壁19例，< 1/2肌壁57例；发生淋巴结转移13例。同期，留取因子宫肌瘤行全子宫切除术的45例患者正常子宫内膜组织石蜡标本，年龄38~75岁，中位年龄55岁。

1.2 方法 1.2.1 免疫组织化学法检测组织中MUC4蛋白表达

按照SP免疫组织化学试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)说明进行操作。取子宫内膜癌和正常子宫内膜组织石蜡标本，经切片(厚度约4 μm)，二甲苯脱蜡，梯度乙醇至水，PBS冲洗3次，高温高压下进行抗原修复15 min，室温下用3%过氧化氢孵育10 min以灭活内源性过氧化物酶。加入一抗鼠抗人MUC4多克隆抗体(美国Abcam公司，1 :800稀释)，4℃过夜孵育，加入二抗，室温下孵育120 min。二氨基联苯胺(3, 3′-diaminobenzidine，DAB；福州迈新生物技术开发有限公司)显色，苏木精对比染色，经脱水、透明、封固，用显微镜观察。PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定：以细胞质中出现黄色或棕黄色染色为阳性；高倍镜下随机取5个视野，采用半定量法进行结果判定^[7]。染色强度：不染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分；阳性细胞比例：< 5%为0分，5%~25%为1分，26%~50%为2分，51%~75%为3分，>75%为4分；根据染色强度评分与阳性细胞比例评分乘积，0~1分为阴性，≥2分为阳性。

1.2.2 随访

患者出院后，利用电话、QQ群和门诊复查对患者进行随访，手术时间作为起始时间，以死亡作为终止事件，末次随访时间2018年3月31日。随访时间7~60个月，随访期间，失访3例，死亡28例。

1.3 统计学分析

采用SPSS 21.0统计学软件分析数据。计数资料采用频数(百分比)表示，组间比较采用χ²检验。生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验。多因素分析采用Cox比例风险模型。以P < 0.05为差异具有统计学意义。

2 结果 2.1 子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中MUC4蛋白表达

子宫内膜癌组织中MUC4蛋白阳性表达率为71.1%(54/76)，正常子宫内膜组织中MUC4蛋白阳性表达率为20.0%(9/45)，差异具有统计学意义(χ²=29.517，P < 0.01；图 1)。

2.2 子宫内膜癌组织中MUC4蛋白表达与临床特征的关系

子宫内膜癌组织中MUC4蛋白阳性表达率在年龄和淋巴结转移方面比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，而在FIGO分期、分化程度和浸润深度方面比较，差异均具有统计学意义(均P < 0.05，表 1)。

2.3 子宫内膜癌组织中MUC4蛋白表达对生存时间的影响

Kaplan-Meier生存分析结果显示，MUC4蛋白阳性表达患者生存时间为(38.48±3.24)个月，MUC4蛋白阴性表达患者生存时间为(55.57±2.13)个月。Log-rank检验显示，二者差异具有统计学意义(χ²=5.505，P=0.019；图 2)。

2.4 Cox比例风险回归模型分析

Cox比例风险回归模型分析结果显示，分化程度、浸润深度和MUC4蛋白表达是影响子宫内膜癌患者预后的风险因素(均P < 0.05，表 2)。

3 讨论

子宫内膜癌作为威胁女性健康的主要恶性肿瘤类型，病因复杂。近年来随着诊疗手段的不断进展，患者早期诊疗率不断提高，5年生存率不断提高^[8]，但仍有部分患者发现时已处于晚期错过最佳治疗时机，且有部分早期诊治的患者因复发转移而预后不佳^[9-10]，因此，仍需从机制方面对影响子宫内膜癌发生和进展开展深入研究以改善患者预后。MUC4位于人染色体3q29，由26个外显子组成，是一种重要的黏蛋白，在细胞保护和润滑中发挥重要作用^[11]。MUC4可能是一种潜在的癌基因，通过调控细胞间黏附^[12]、信号转导^[13]和细胞凋亡^[14]等而与多种恶性肿瘤的发生和进展过程密切相关。本研究结果显示，子宫内膜癌组织中MUC4蛋白阳性表达率高于正常子宫内膜组织，说明MUC4蛋白在子宫内膜癌组织中呈高表达，可能参与子宫内膜癌的发生。对其与临床特征的关系分析发现，MUC4蛋白在FIGO分期Ⅰ期+Ⅱ期、低分化和浸润深度≥1/2肌壁的子宫内膜癌组织中呈高表达，说明MUC4可能参与子宫内膜癌进展及恶性化过程。本研究发现，发生淋巴结转移的子宫内膜癌组织中MUC4蛋白呈高表达，但与未发生淋巴结转移的患者比较，差异无统计学意义(P>0.05)，分析原因，可能与本研究入选样本量较少有关。

研究指出，MUC4阳性表达的肝内胆管细胞癌患者术后生存率低于阴性表达者^[15]。本研究Kaplan-Meier生存分析结果显示，MUC4蛋白阳性表达患者平均生存时间低于MUC4蛋白阳性表达患者，说明MUC4蛋白阳性表达可能是影响子宫内膜癌生存时间的因素。Cox比例风险回归模型分析结果显示，分化程度、浸润深度和MUC4蛋白表达是影响子宫内膜癌患者预后的风险因素(均P < 0.05)，进一步说明MUC4蛋白阳性表达是影响子宫内膜癌患者预后的风险因素。

综上所述，子宫内膜癌组织中MUC4蛋白呈高表达，且与肿瘤的发生、进展及恶性化过程有关，是影响患者预后的风险因素，有望为子宫内膜癌机制研究、靶向治疗及预后评估提供新靶位。但本研究亦有不足之处，仍需进一步扩大样本量并开展更长时间的随访以验证结论。