肺癌发病率和病死率逐年上升，严重威胁人类生命健康。目前的医疗方法对早期肺癌的预后有较大提高，但晚期肺癌预后水平仍然较差，5年生存率仅为15%^[1]。研究证实，脉管癌栓是影响癌症预后的独立因素^[2]。但目前为止还没有报道脉管癌栓与临床具体的病理因素之间的关系。已知表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)、切除修复交叉互补基因-1(excision repair-cross complementing-1，ERCC1)和c-Met在肺癌组织中均存在异常表达，本文主要探讨肺癌患者脉管癌栓与EGFR、ERCC1和c-Met表达的关系以及对疾病预后的影响。

1 资料与方法 1.1 一般资料

收集本院2010年3月至2013年3月病理科确诊的肺癌组织及其癌旁组织128例，所有患者临床资料及随访记录齐全。其中男性73例，女性55例；年龄52~64岁，(57.9±4.6)岁，中位年龄56岁。其中有脉管癌栓52例，无脉管癌栓76例。

1.2 主要试剂

兔抗人EGFR单抗(上海科汇生物技术有限公司)；兔抗人c-Met单抗(上海古朵生物科技有限公司)；兔抗人ERCC1单抗(上海樊克生物科技有限公司)；DAB显色剂(上海浩然生物技术有限公司)；即用型快捷免疫组织化学试剂盒(鼠)[生工生物工程(上海)股份有限公司]；枸橼酸钠缓冲液(上海宝曼生物科技有限公司)；苏木精(上海宝曼生物科技有限公司)。

1.3 方法 1.3.1 免疫组织化学法

将肺癌组织和癌旁组织均进行临床病理切片，然后行脱蜡处理，水化过后使用PBS冲洗。阻断15 min，室温下10%血清封闭非特异性背景15 min，加入一抗(EGFR、ERCC1及c-Met单克隆抗体)，4℃冰箱过夜。取出后PBS冲洗，加入生物素标记的二抗，室温孵育30 min后进行冲洗。链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶溶液室温孵育30 min后再次冲洗，DAB显色剂处理后进行冲洗，苏木精对比染色，中性树胶封固，观察。

1.3.2 结果判定

随机选择需要观察的视野计数100个细胞，求出视野内表达特定蛋白的阳性细胞的平均数。深浅度积分：0分为无着色，1分为弱着色，2分为强着色。染色细胞阳性率评分：1分为阳性细胞百分比1%~25%，2分为26%~50%，3分为51%~75%，4分为76%~100%。二者乘积≤2分为阴性，3~4分为弱阳性(+)，5~6分为中度阳性(+ +)，≥7分为强阳性(+ + +)；+~+ + +为阳性表达。

1.4 随访

采用电话随访，随访时间12~36个月，中位随访时间25个月，无失访。

1.5 统计学分析

采用SPSS 17.0软件进行数据分析。计数资料组间比较采用χ²检验。蛋白表达的相关性分析采用Spearman相关分析。采用Kaplan-Meier法计算生存率。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果 2.1 EGFR、ERCC1和c-Met在肺癌组织和癌旁组织中的表达

在肺癌组织和癌旁组织中，EGFR的阳性表达率分别为85.9%和19.5%，ERCC1分别为33.6%和88.3%，c-Met分别为82.0%和16.4%，差异均具有统计学意义(均P＜0.05，表 1)。

2.2 EGFR、ERCC1和c-Met在肺癌脉管癌栓组织中的表达

EGFR、ERCC1和c-Met在52例脉管癌栓阳性组织中的阳性表达率分别为78.9%、19.2%和92.3%；在76例脉管癌栓阴性组织中的阳性表达率分别为9.2%、85.5%和15.8%。EGFR、ERCC1和c-Met在脉管癌栓阳性和阴性组织中的表达比较，差异均具有统计学意义(均P＜0.01)。

2.3 肺癌脉管癌栓组织EGFR、ERCC1和c-Met表达的关系

肺癌脉管癌栓组织中，ERCC1阳性表达与EGFR阳性表达、c-Met阳性表达均呈负相关(r=-0.475，P=0.037；r=-0.513，P=0.024)；EGFR阳性表达与c-Met阳性表达呈正相关(r=0.466，P=0.041)。

2.4 肺癌脉管癌栓患者术后生存率比较

脉管癌栓阳性和阴性患者术后1年生存率分别为67.3%(35/52)和85.5%(65/76)，差异具有统计学意义(P＜0.05)；术后3年生存率分别为34.6%(18/52)和73.7%(56/76), 差异具有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨论

肺癌是最为常见的恶性肿瘤之一，其发生和发展的机制非常复杂，尚未完全清晰肺癌的具体发生机制^[3]。EGFR在人体的多种实体肿瘤中存在过表达状态，如胃癌、肺癌、乳腺癌和胰腺癌等^[4-5]。EGFR可以促进肿瘤细胞在机体内的自我增殖过程，并能够有效抑制肿瘤细胞自身的凋亡活动，与肿瘤细胞的发生和发展过程密切相关^[6]。研究显示，在正常组织、癌旁组织和肺癌组织中，EGFR的表达逐渐升高^[7]。当肺癌患者组织中EGFR过表达时，其生存率通常较低，发生预后不良，且肿瘤细胞更容易发生转移^[8]。ERCC1在体内多种DNA损伤中发挥修复作用，已经成为肿瘤内累积DNA损伤程度的间接性生物标志物^[9]。ERCC1的异常低表达常伴随着肿瘤发病率的升高^[10]。c-Met是一种肝细胞生长因子受体，参与肿瘤细胞增殖与移动的信号转导过程^[11]。研究显示，c-Met在体内多种实体瘤中过表达，如胃癌、肺癌、肝癌和乳腺癌等^[12-14]，而且c-Met的过表达通常对肺癌患者的病情起促进作用，导致患者的预后效果差，提示c-Met可以作为预测肺癌预后的标志因子之一^[15]。

本研究结果显示，肺癌组织中EGFR和c-Met阳性表达高于癌旁组织，而ERCC1低于癌旁组织。EGFR和c-Met在脉管癌栓阳性组中表达高于脉管癌栓阴性组，ERCC1则低于脉管癌栓阴性组。相关性分析发现，肺癌脉管癌栓组织中，ERCC1阳性表达与EGFR阳性表达、c-Met阳性表达均呈负相关(r=-0.475，P=0.037；r=-0.513，P=0.024)，EGFR阳性表达与c-Met阳性表达呈正相关(r=0.466，P=0.041)，提示EGFR、ERCC1和c-Met可能在肺癌的发生过程中相互协同，共同促进其发展。脉管癌栓阴性患者术后1年和3年生存率均高于脉管癌栓阳性患者，进一步表明EGFR、ERCC1和c-Met的表达对于肺癌患者特别是肺癌脉管癌栓患者可以进行更好的预后判断。

综上所述，肺癌脉管癌栓患者EGFR和c-Met的表达程度越高、ERCC1表达程度越低，肺癌患者的预后可能越差，脉管癌栓可作为肺癌患者预后不良的标志之一，为临床治疗诊断提供参考依据。