信号转导和转录激活因子3 (signal transducer and activators of transcription 3，STAT3)是一种转录因子，可以通过酪氨酸或丝氨酸磷酸化等方式被激活，主要通过调控细胞粘附、血管生成、细胞外基质降解和上皮间质转化等过程，参与肿瘤的侵袭转移。多种肿瘤均发现STAT3的过度激活。STAT3激活后可以调节下游靶基因的转录，促进肿瘤的发生^[1-2]。STAT3及其下游基因Survivin已被证实在多种肿瘤中发挥作用^[3-5]，但在胸腺上皮肿瘤中尚未见报道。本研究采用免疫组织化学法检测各型胸腺瘤中STAT3的表达，探讨其与胸腺瘤的分型及复发的相关性。

1 资料与方法 1.1 一般资料

收集2000年10月至2012年10月潍坊市人民医院(46例)和潍坊市益都中心医院(39例)的85例胸腺瘤标本。患者年龄21~72岁，中位年龄57岁；其中男性38例，女性47例。所有标本均经4%甲醛固定，石蜡包埋，按照WHO分类(2015)标准进行诊断和分型^[6]。同时，分析患者临床病理资料及随访资料。另选取其中24例患者肿瘤周边正常胸腺组织作对照组。

1.2 主要仪器及试剂

使用仪器有德国徕卡公司Leica石蜡切片机、日本奥林巴斯OLYMPUS BX53显微镜、美国罗氏公司BenchMark自动免疫组织化学机。兔抗人单克隆即用型STAT3抗体购买于福州迈新生物开发有限公司。

1.3 方法

将胸腺瘤和正常胸腺切片后放于70℃的烤箱烤片60 min。玻片处理：使用10%无糖全脂奶粉浸泡15 min，增加亲水性，蒸馏水冲洗。将冲洗干净的切片背面及标签处残余的水分擦干净。将处理好的玻片放入BenchMark XT免疫组织化学机内，开启机器。机器内操作流程：用稀释好的Ez prep脱蜡液(溶剂)脱蜡后，Tris-碱缓冲液(pH 7.6~7.8)清洗，用细胞前处理液修复抗原30 min，使抗原暴露。加入过氧化酶抑制剂(Ultraview DAB detection kit组分)封闭。清洗后手工滴加STAT3抗体100 μL，孵育37℃ 32 min，冲洗后滴加二抗(Ultraview DAB detection kit组分)100 μL，冲洗后用DAB(Ultraview DAB detection kit组分)显色、苏木精对比染色及返蓝。从免疫组织化学机内取出玻片，放在切片架上，加入清洗剂清洗，80%、95%和无水乙醇逐级脱水，每次3 min。二甲苯透明，中性树胶封固。实验用已知阳性的胸腺瘤切片作阳性对照，用PBS液代替一抗作为阴性对照，以排除假阳性结果。

1.4 结果判定标准

STAT3阳性染色为棕黄色，着色部位为细胞质。利用OLYMPUS BX53显微镜进行观察。结果判断方法：阳性细胞数＜5%为0分，5%~25%为1分，26%~50%为2分，51%~75%为3分，76%~100%为4分；着色强度无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两者计分相乘0~4为阴性，＞4为阳性。

1.5 随访

所有胸腺肿瘤患者均行电话随访，随访内容包括患者身体状况、是否复发及复发时间、是否死亡及死亡时间，随访时间均＞5年，中位随访时间100.8个月。

1.6 统计学分析

应用SPSS 19.0软件进行统计学分析。计数资料采用频数(百分比)表示，组间比较采用χ²检验。以P < 0.05为差异具有统计学意义。

2 结果 2.1 胸腺瘤中STAT3表达与临床病理特征的关系

STAT3在胸腺瘤组织中阳性染色为棕黄色(图 1~2)，表达在上皮样细胞细胞质中，淋巴细胞偶有表达，在A、B1型胸腺瘤及正常胸腺组织中较少表达(图 3~4)。胸腺瘤组织中STAT3的表达阳性率高于正常胸腺组织[49.4%(42/85) vs 25.0%(6/24)，P=0.033]。胸腺瘤中STAT3的表达在年龄和性别方面比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，但在病理类型、肿瘤分期、复发及预后方面比较，差异均具有统计学意义(均P < 0.01，表 1)。

2.2 胸腺瘤中STAT3的表达与生存情况的关系

截止随访，所有患者中死亡14例，其中STAT3表达阳性12例(85.7%)；生存71例，STAT3表达阳性30例(42.3%)；两者比较，差异具有统计学意义(P=0.003)。共16例患者复发，其中15例阳性(93.8%)，高于无复发患者(阳性率为39.1%)，差异具有统计学意义(P < 0.01，表 1)。

3 讨论

胸腺上皮肿瘤(thymic epithelial tumors，TET)是源自胸腺上皮细胞的一类肿瘤。在所有纵隔肿瘤中，胸腺瘤镜下结构的变化非常大，其多样性仅次于畸胎瘤。过去将胸腺瘤分为4类^[1]：淋巴细胞为主型，上皮细胞为主型，淋巴、上皮细胞混合型以及梭形细胞型。但此分类没有包括胸腺各类型癌^[2]。另外还有多种胸腺瘤的分类方法，如将胸腺瘤划分为胸腺皮质肿瘤和髓质肿瘤^[3]。WHO 2015版将胸腺上皮性肿瘤分为胸腺瘤(A型、AB型、B1型、B2型、B3型)和胸腺癌，其中胸腺癌肿瘤细胞显著异型，多无胸腺样器官结构，呈胸腺外多种类型癌的形态^[7]。但各种方法都不能明确反映患者预后。胸腺肿瘤的分期和分型对其良恶性和远期预后的预测有重要参考意义^[8]。但临床治疗中发现，有些胸腺上皮肿瘤患者虽然分期和分型相近，但远期预后差异很大。这可能是因为在确定患者分期方面存在较大的人为因素。另外还发现有些A型和AB型胸腺瘤也有复发及转移的可能。2015版WHO胸腺瘤分类纠正了胸腺瘤是良性肿瘤的观点，除伴有淋巴样间质的微结节型胸腺瘤生物学行为编码保留原有的1(交界性或生物学行为未定的肿瘤)以及微小胸腺瘤生物学编码由1改为0以外，其他所有胸腺瘤的编码均由1改为3^[7]。但各型胸腺瘤及胸腺癌的预后差别很大。且各组织学分型不能明确预示预后，因此探索能提示胸腺肿瘤预后的生物学标志有重要的临床意义。

本研究发现，STAT3在胸腺瘤中表达高于正常胸腺组织，其中25例胸腺癌中分型包括鳞状细胞癌9例(8例阳性)、基底细胞样癌4例(4例阳性)、淋巴上皮瘤样癌3例(2例阳性)(图 1)、腺癌4例(3例阳性)、未分化癌3例(2例阳性)、肉瘤样癌1例(1例阳性)和神经内分泌癌1例(0例阳性)。根据胸腺瘤病理类型的差别，恶性程度越高STAT3表达阳性率越高，比其在食管癌、肺癌、卵巢癌和肝癌等肿瘤中表达趋势更明显^[9-11]，说明STAT3的表达与胸腺瘤的恶性程度有关。本研究还发现，复发患者STAT3表达阳性率高于无复发者。至随访结束，死亡患者和生存患者的STAT3表达阳性率比较，差异也具有统计学意义(P＝0.003)，表明STAT3的表达与胸腺瘤的组织学类型及预后有关，可能是影响胸腺瘤预后的一个独立因素。STAT3作为一种重要的转录因子，为抗肿瘤的治疗提供一个有效的靶点^[12]，其重要地位值得进一步深入探讨。