斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)属于鲈形目(Perciformes)、科(Serranidae)、石斑鱼属(Epinephelus)，是我国广东、海南等省的重要海水养殖品种。目前石斑鱼养殖主要以投喂冰鲜鱼为主，饲料普及率低下，其主要原因是石斑鱼营养需要研究基础薄弱。因此，开展斜带石斑鱼营养需求的研究进而开发精准的配合饲料已成为斜带石斑鱼集约化养殖可持续发展的迫切需要。

海水鱼类对蛋白质需要量高，但在资源日益短缺的今天，鱼粉等优质蛋白源价格高昂。为节约成本，养殖者希望饲料蛋白质能更有效地转化为鱼体蛋白。鱼类的生理特点决定了其对饲料碳水化合物的利用能力有限，但却能很好地利用脂肪，因此饲料脂肪常常作为鱼类重要的能量来源^[1]。饲料中脂肪含量低，水产动物生长缓慢，添加适量的脂肪则可有效促进水产动物的生长，还能起到节约蛋白质的作用^[2]。

石斑鱼对脂肪需要量的研究已有部分报道。以鱼油为脂肪源，初重10.9 g的斜带石斑鱼获得最大生长的脂肪水平为10%^[3]；以鱼油和玉米油(1∶1)为脂肪源，初重4.43 g的点带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)饲料中适宜脂肪水平为9%^[4]；以鱼油和豆油(1∶1)为脂肪源，9 g的点带石斑鱼对脂肪的需要量为11.85%^[5]，而17 g的点带石斑鱼获得最大生长的脂肪水平为12%^[6]。初重7.71 g的赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)在饲料脂肪水平为3%~4%时，增重率最高^[7]；初重6.38 g的褐石斑鱼(Epinephelus bruneu)对脂肪的需要量为15%^[8]；初重为39.33 g的青石斑鱼(Epinephelus awoara)饲料中脂肪适宜含量为9.87%^[9]。以上研究表明：石斑鱼幼鱼(<40 g)对脂肪需要量为3%~15%，因石斑鱼种类、脂肪源等的不同而差异较大。因此，本实验以初重278.5 g的斜带石斑鱼为对象，研究养成期斜带石斑鱼对脂肪的适宜需要量，为研制精准高效石斑鱼饲料提供基础数据。

在基础饲料中添加不同水平的鱼油，配成5种脂肪水平的等氮饲料，饲料脂肪含量分别为7.07%、9.92%、12.92%、15.95%、和19.04%，记为L1、L2、L3、L4和L5组，饲料配方见表 1。原料粉碎后过40目筛，按配方比例称取各种原料进行混合，然后加入鱼油和大豆磷脂油，将油脂微粒搓散后，放入V型立式混合机中混合均匀，缓慢加入占饲料质量30%~40%的水后再次混匀，用F-26型双螺杆挤条机(华南理工大学)加工成直径为6 mm的颗粒饲料，风干至水分含量10％左右，用封口袋分装后放于-20 ℃冰箱保存备用。

表 1(Tab. 1)

表 1 实验饲料组成及营养水平Tab. 1 Composition and nutrient levels of experimental diets % 原料 ingredient 饲料 diets L1 L2 L3 L4 L5 注：1. 每千克维生素预混料含：VA 10 g；VD3 50 g；VE 99 g；VK3 5.0 g；VB1 25.50 g；VB2 25 g；VB6 50 g；VB12 0.1 g；泛酸钙 61 g；烟酸 101 g；生物素 2.5 g；肌醇153.06 g；叶酸6.25 g；纤维素411.59 g； 2. 每千克矿物质预混料含：KIO4 0.03 g；CoCl2·6H2O 4.07 g；CuSO4·5H2O 19.84 g；柠檬酸铁 13.71 g；ZnSO4·7H2O 28.28 g；MnSO4·7H2O 0.12 g；Ca(H2PO4)2 80 g；MgSO4·H2O 12.43 g；KCl 15.33 g；Na2SeO3 2 g；沸石粉 824.19 g。 Note: 1. The per kg vitamin premix content: VA 10 g,VD3 50 g,VE 99 g,VK3 5.0 g,VB1 25.50 g,VB2 25 g,VB6 50 g,VB12 0.1 g,Calcium pantothenate 61 g,Nicotinic acid 101 g,Biotin 2.5 g,Inositol 153.06 g,Folic acid 6.25 g,Cellulose 411.59 g.2. The per kg mineral premix content: KIO4 0.03 g,CoCl2·6H2O 4.07 g,CuSO4·5H2O 19.84 g,Ferric citrate 13.71 g,ZnSO4·7H2O 28.28 g,MnSO4·7H2O 0.12 g,Ca(H2PO4)2 80 g,MgSO4·H2O 12.43 g,KCl 15.33 g,Na2SeO3 2 g,Zeolite powder 824.19 g. 白鱼粉white fish meal 55 55 55 55 55 小麦谷朊粉vital wheat gluten 12 12 12 12 12 面粉 wheat flour 16 16 16 16 16 α-淀粉 α-starch 13.82 10.82 7.82 4.82 1.82 鱼油 fish oil 0 3 6 9 12 大豆磷脂油 soybean lecithin 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 维生素C vitamin C (35%) 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 氯化胆碱 choline chloride 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 维生素预混料 vitamin premix1 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 矿物质预混料 mineral premix2 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 诱食剂 attractant 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 乙氧基喹啉 ethoxyquin 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 合计 total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 营养水平 nutrient levels 干物质 dry matter 90.48 90.75 90.85 90.56 90.54 粗蛋白 crude protein 50.57 49.96 50.27 50.85 50.53 粗脂肪 crude lipid 7.07 9.92 12.92 15.95 19.04 灰分 ash 15.62 15.95 15.47 15.23 15.85

表 1 实验饲料组成及营养水平 Tab. 1 Composition and nutrient levels of experimental diets

石斑鱼购自湛江雷州市覃斗镇某石斑鱼养殖场。实验鱼运回后，投喂商品饲料(中山统一饲料有限公司，粗蛋白46%)一周，再投喂L1组饲料一周，使之逐渐适应养殖环境和饲料。

养殖实验在湛江市南三岛近海浮式网箱中进行。挑选均重为278.5 g左右、规格均匀，体格健壮的石斑鱼随机分配于各网箱中。根据实验设计，共5个处理，每个处理设3个重复，每重复一个1.2 m×1.2 m×2.5 m的网箱，每个网箱放20尾鱼。每天投喂2次(07：00和17：00)，饱食投喂，养殖期10周。水温27~ 29.5 ℃，盐度为22 ~ 26，溶解氧含量7 mg/L以上。

养殖实验结束石斑鱼饥饿24 h后，取样。将石斑鱼全部捞出，以丁香酚(1∶10 000)麻醉后称重，计数，计算生长指标。每个网箱中随机取5尾鱼测量其体重、体长，计算肥满度，测量完成后于-20 ℃冰箱保存，用于全鱼常规成分分析。再随机取5尾鱼尾静脉采血，血样放入1.5 mL抗凝管中，室温下静置4 h后离心(3 500 r/min，10 min，4 ℃)，收集的血浆放入-80 ℃冰箱保存，用于血浆生化指标测定。取血后的石斑鱼分离内脏，分别称每尾鱼的内脏团和肝脏重量，计算肝体比和脏体比；然后分离背部肌肉，分装于封口袋中于-80 ℃ 冰箱保存，用于肌肉常规成分分析。最后随机取3尾鱼，分离肝脏，-80 ℃冰箱保存，备测肝脏酶活。

实验饲料、全鱼、肌肉常规成分的测定方法为：水分105 ℃烘干恒重法；粗蛋白凯氏定氮法(Kjeltec^TM 8400 瑞典)；脂肪索氏抽提法(抽提溶剂为乙醚)；粗灰分550 ℃灼烧法。

血浆生化指标测定采用全自动生化分析仪(7020型，Hitachi，日本)。

肝脏相关酶活采用南京建成生物公司的试剂盒测定，相应操作参照说明书。溶菌酶测定方法参照ELLIS^[10]。

数据均以平均值±标准差(Mean±SD)表示。用SPSS 17.0软件对数据进行单因子方差分析(One-way ANOVA)，当处理间差异显著(P<0.05)时，进行Duncan氏多重比较。

如表 2所示，石斑鱼的WGR、SGR和PER均呈上升后下降趋势；FCR变化趋势同PER相反，呈先下降后升高的趋势。以SGR为评价指标，二次曲线模型拟合得出，斜带石斑鱼对饲料中脂肪的最适需要量为14.44%(图 1)。

表 2(Tab. 2)

表 2 饲料脂肪水平对石斑鱼生长性能及饲料利用的影响Tab. 2 Effect of dietary lipid levels on growth performance and feed utilization of grouper 项目 items 饲料 diets L1 L2 L3 L4 L5 注: 同行上标小写字母不同代表差异显著(P<0.05)，下表同。 Note: Values in the same line with different letters were significantly different(P<0.05),the same as follows. 初重IBW/g 277.3±1.7 278.8±1.9 277.9±0.4 278.4±1.7 279.8±0.8 末重FBW/g 541.8±14.00a 559.3±9.0bc 568.0±2.5c 600.2±2.5d 548.9±0.3ab 增重率WGR/% 95.4±3.9a 102.8±2.4b 104.4±3.4b 115.6±1.2c 96.2±0.6a 特定生长率SGR/(%/d) 1.03±0.03a 1.09±0.02b 1.10±0.03b 1.18±0.01c 1.04±0.01a 蛋白质效率PER/% 1.25±0.06a 1.32±0.04b 1.42±0.05cd 1.45±0.01d 1.36±0.01bc 饲料系数FCR 1.60±0.08d 1.54±0.04cd 1.44±0.05ab 1.41±0.01a 1.50±0.01bc 成活率SR/% 96.67±2.89 96.67±5.77 98.33±2.89 100.00±0.00 100.00±0.00

表 2 饲料脂肪水平对石斑鱼生长性能及饲料利用的影响 Tab. 2 Effect of dietary lipid levels on growth performance and feed utilization of grouper

图 1(Fig. 1)

图 1 饲料脂肪水平与石斑鱼特定生长率(SGR)之间的关系 Fig. 1 Relationship between SGR and dietary lipid level for grouper as described by second-order polynomial regression model

由表 3可知，随着饲料脂肪水平升高，石斑鱼全鱼、肌肉粗脂肪含量逐渐上升；全鱼粗灰分含量逐渐下降，全鱼水分、粗蛋白和肌肉水分、粗蛋白、粗灰分不受饲料脂肪水平的影响。

表 3(Tab. 3)

表 3 饲料脂肪水平对石斑鱼全鱼和肌肉常规成分的影响 (干物质)Tab. 3 Effect of dietary lipid levels on whole body and muscle composition of grouper % 项目 items 饲料 diets L1 L2 L3 L4 L5 全鱼 whole body 水分 moisture 68.46±1.32 67.39±5.53 69.09±3.37 69.44±4.23 69.96±2.93 粗蛋白 crude protein 61.13±1.14 60.64±0.71 60.07±0.42 60.09±0.16 59.97±1.25 粗脂肪 crude lipid 21.56±0.89a 21.96±3.21a 22.87±1.86a 24.02±1.39ab 26.41±1.66b 灰分 ash 13.56±0.92b 12.88±0.73b 13.99±0.86b 11.40±1.36ab 10.79±1.18a 肌肉 muscle 水分 moisture 77.05±2.8 77.16±1.53 77.04±1.37 76.48±1.32 76.86±1.09 粗蛋白 crude protein 86.59±0.53 86.15±0.41 86.21±0.77 85.19±0.94 85.14±0.27 粗脂肪 crude lipid 4.86±0.30a 5.24±0.47ab 6.02±0.33b 6.93±0.62c 7.07±0.23c 灰分 ash 5.92±1.28 5.49±0.35 5.42±0.27 5.31±0.20 5.37±0.28

表 3 饲料脂肪水平对石斑鱼全鱼和肌肉常规成分的影响 (干物质) Tab. 3 Effect of dietary lipid levels on whole body and muscle composition of grouper

随着饲料脂肪水平升高，CF和VSI逐渐上升后稳定，HSI逐渐上升(表 4)。

表 4(Tab. 4)

表 4 饲料脂肪水平对石斑鱼形态学指标的影响Tab. 4 Effect of dietary lipid levels on CF,HSI and VSI of grouper % 项目 items 饲料 diets L1 L2 L3 L4 L5 肥满度 CF 2.43±0.15a 2.48±0.19a 2.89±0.12b 2.74±0.12ab 2.88±0.24b 肝体比 HSI 3.90±0.19a 4.33±0.07b 4.30±0.28b 4.31±0.25b 4.79±0.09c 脏体比 VSI 8.93±0.24a 9.09±0.35a 10.03±0.62b 9.98±0.29b 10.05±0.48b

表 4 饲料脂肪水平对石斑鱼形态学指标的影响 Tab. 4 Effect of dietary lipid levels on CF,HSI and VSI of grouper

随着饲料脂肪水平升高，石斑鱼血浆葡萄糖(glucose,GLU)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)和高密度脂蛋白(high density lipoprotein cholesterol,HDLC)水平均逐渐升高，低密度脂蛋白(low density lipoprotein cholesterol,LDLC)和总蛋白(total protein,TP)逐渐下降(P<0.05),见表 5。

表 5(Tab. 5)

表 5 饲料脂肪水平对石斑鱼血浆生化指标的影响Tab. 5 Effect of dietary lipid levels on plasma biochemical parameters of grouper 项目 items 饲料 diets L1 L2 L3 L4 L5 总蛋白 TP/(g/L) 43.00±1.00b 40.67±1.53b 37.00±1.73a 37.00±2.00a 34.67±1.52a 葡萄糖 GLU/(mmol/L) 1.72±0.05ab 1.58±0.04a 1.90±0.04b 2.25±0.08c 3.15±0.29d 甘油三酯 TG/(mmol/L) 1.11±0.14a 1.78±0.02ab 1.73±0.44ab 2.64±0.99bc 3.28±0.62c 总胆固醇 TC/(mmol/L) 3.57±0.31a 4.13±0.23a 4.03±0.25a 5.30±0.62b 6.10±0.50c 高密度脂蛋白 HDLC/(mmol/L) 0.91±0.11a 1.22±0.22b 1.19±0.15ab 1.37±0.14b 1.68±0.16c 低密度脂蛋白 LDLC/(mmol/L) 1.91±0.34b 1.46±0.69ab 1.56±0.26ab 1.32±0.14ab 0.94±0.29a

表 5 饲料脂肪水平对石斑鱼血浆生化指标的影响 Tab. 5 Effect of dietary lipid levels on plasma biochemical parameters of grouper

随着饲料脂肪水平升高，肝脏肝酯酶(hepatic lipase,HL)、脂蛋白酯酶(lipoproteinesterase,LPL)和苹果酸脱氢酶(malic dehydrogenase,MDH)活力均呈逐渐下降趋势，乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力逐渐上升。肝脏碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和溶菌酶(lysozyme,LZ)活性呈升高后稳定趋势，酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)呈逐渐下降趋势(表 6)。

表 6(Tab. 6)

表 6 饲料脂肪水平对石斑鱼肝脏酶活性的影响Tab. 6 Effect of dietary lipid levels on enzyme activities in liver of grouper 项目 items 饲料 diets L1 L2 L3 L4 L5 肝脂酶 HL/(U/mg) 0.73±0.05c 0.65±0.14bc 0.49±0.09ab 0.48±0.09ab 0.46±0.06a 脂蛋白酯酶 LPL/(U/mg) 0.77±0.05b 0.70±0.09b 0.65±0.06b 0.50±0.11a 0.45±0.01a 乳酸脱氢酶 LDH/(U/mg) 1083.24±66.45a 1224.61±127.74ab 1254.01±29.40ab 1379.01±218.83bc 1493.64±35.54c 苹果酸脱氢酶 MDH/(U/mg) 7.86±1.48b 7.63±1.47b 6.47±0.62ab 5.94±0.28ab 4.86±0.37a 碱性磷酸酶 AKP/(U/g) 12.23±0.79a 14.95±1.58ab 14.24±0.86ab 17.63±3.76b 15.53±2.18ab 酸性磷酸酶 ACP/(U/g) 154.55±7.03c 144.12±11.52c 121.49±9.08ab 126.24±3.05b 108.82±7.99a 超氧化物歧化 SOD/(U/mg) 51.08±4.09a 58.46±2.69ab 65.06±3.02bc 75.34±6.68c 68.34±2.71bc 溶菌酶 LZ/(U/mg) 150.00±9.00a 185.00±13.23b 212.00±13.11c 205.67±3.79bc 220.67±17.62c

表 6 饲料脂肪水平对石斑鱼肝脏酶活性的影响 Tab. 6 Effect of dietary lipid levels on enzyme activities in liver of grouper

在本实验中，随饲料脂肪水平的升高，WGR和SGR表现为先升高后下降的趋势，最大值均出现在L4组。表明饲料中适量地添加脂肪，可以促进石斑鱼的生长，而过高的饲料脂肪水平可降低石斑鱼的生长。鱼类在饲料蛋白水平相同时，高脂肪水平比低脂肪水平有更好的生长表现，称作“脂肪对蛋白质的节约效应”^[11]。白姑鱼(Argyrosomus regius)^[12]和石首鱼(Atractoscion nobilis)^[13]也获得了与本实验相同的结果。但也有研究表明，饲料中添加过多的脂肪可导致鱼类摄食率减少和生长下降，如齿鲷(Dentex dentex)^[14]、异育银鲫(Carassius auratus gibelio)和长尾(Leiocassis longirostris Gunther)^[15]。本研究结果表明，当饲料脂肪含量达到14.44%时，石斑鱼的生长性能和饲料系数达到最佳(图 1)。蛋白质效率是饲料蛋白转化为动物体蛋白程度的评价指标。本实验中，随着饲料脂肪水平升高，PER呈先上升后降低的趋势。这与红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)^[16]的研究结果一致。但也有研究表明，蛋白质效率和饲料脂肪水平呈一定的正相关^[17]。这可能由于一定水平的饲料脂肪增加了饲料中可利用的能量，使蛋白质分解供能降低，进而提高了蛋白质的沉积率。

本实验中石斑鱼全鱼和肌肉脂肪含量逐渐上升。长吻幼鱼全鱼脂肪含量随着日粮脂肪水平的升高而增加^[18]，异育银鲫^[19]、军曹鱼(Rachycentron canadum)^[20]的实验结果也表明鱼体脂肪含量与饲料脂肪水平呈正相关；本实验中饲料脂肪水平升高对鱼体和肌肉蛋白含量无显著影响，与石首鱼^[13]的研究结果类似，而篮子鱼(Siganus rivulatus)^[21]的研究结果表明饲料脂肪降低了全鱼和肌肉中的蛋白含量。SHEARER等^[22]研究认为鱼类的体成分受内源因素(规格、性别等)和外源因素(饲料、环境等)的共同影响，鱼体蛋白和灰分含量与鱼类的生长阶段(内源因素)有关，而体脂肪含量主要受外源因素影响。

鱼类形态学指标与饲料脂肪水平密切相关。异育银鲫的VSI^[19]及团头鲂的HIS^[23]随饲料脂肪水平的增加而显著升高，与本实验类似。齐口裂腹鱼的CF随着饲料脂肪水平升高呈先上升后下降的趋势^[24]，而团头鲂的CF则呈逐渐升高趋势^[23]，但异育银鲫^[19]、鳡(Elopichthys bambusa)^[25]的实验结果表明CF不受饲料脂肪水平的影响。实验结果的不同可能源于鱼种、初重、饲料脂肪水平和来源、养殖环境因子等的不同。

准确掌握鱼类的血液生化指标的变化规律有利于了解鱼类健康状况及对饲料营养水平和营养价值进行评估^[26]。镜鲤(Cyprinus specularis)血清TP、TG、TC和GLU浓度随着脂肪水平的增加而升高^[27]，与本实验结果一致；相似的研究还有红鳍东方鲀^[16]、大西洋鳕(Gadus morhua L)^[28]。鱼类血浆脂蛋白与肝脏脂肪(主要是甘油三脂)结合后随血液运出肝脏，从而使肝脏中的脂肪和外周组织的脂肪代谢保持平衡^[29]。在本实验中，随着饲料脂肪水平的升高，血浆HDLC逐渐升高，LDLC下降；而厚唇弱棘表现为随饲料脂肪水平的升高血浆HDLC浓度逐渐升高，而LDLC浓度呈现先上升后下降的趋势^[30]。鳡血浆HDLC和LDLC浓度均随脂肪水平的升高而降低^[25]。实验结果的差异可能源于鱼种、脂肪源等的不同。红鳍东方鲀血浆GLU浓度同饲料脂肪水平呈正相关^[16]。随着饲料脂肪水平升高，鳡血浆TP逐渐下降^[25]，与本实验结果基本一致。

HL和LPL是鱼类肝脏中参与脂肪降解的两种关键酶，HL可促进LDLC和乳糜微粒残粒进入肝细胞，并直接参与HDLC逆转运和HDLC残粒的分解^[31]。LPL能够水解富含甘油三酯的脂蛋白，产生游离脂肪酸^[32]。本实验中随着饲料脂肪水平升高，石斑鱼肝脏HL和LPL活性均显著下降；说明饲料中添加大量的脂肪使得鱼体脂肪分解代谢减弱。但梭鱼(初重5.4 g)的实验结果表明，随饲料脂肪水平的升高，HL和LPL的活性显著升高^[33]。实验结果的不同可能源于鱼种、实验鱼初始体重、油源和添加水平的不同。苹果酸脱氢酶(MDH)和葡萄糖六磷酸脱氢酶(G-6-PD)活性的高低直接关系到NADPH的生成量，进而影响体内脂肪的合成^{[34, 35]}。在本实验中，随着饲料脂肪水平升高，肝脏MDH活力逐渐下降；这与对塞内加尔鳎(Solea senegalensis)^[36]的研究一致；说明随着饲料脂肪水平升高在一定程度上抑制了石斑鱼体内的脂肪合成代谢。随着脂肪水平升高，肝脏乳酸脱氢酶(LDH)活性逐渐上升，锦鲤^[37]的研究也得到相似结果。

本研究表明，随着饲料脂肪水平增加，石斑鱼肝脏中AKP、SOD和LZ活力逐渐上升，ACP逐渐下降。点带石斑鱼的研究结果表明，LZ活性同饲料脂肪含量的增加呈正相关^[38]。锦鲤肝胰脏中SOD活力随脂肪水平的升高而下降，而饲料脂肪水平对AKP等免疫指标没有显著影响^[39]。梭鱼肝脏SOD活性随着饲料脂肪水平的升高呈先上升后下降的趋势^[33]；镜鲤肝脏SOD和LZ随饲料脂肪水平的增加先升高后降低^[40]。鱼类免疫力的提高可能与随饲料脂肪水平的升高，饲料中必需脂肪酸含量的增加有关。

综上所述，在本实验条件下，体重278.5 g左右的养成期斜带石斑鱼对饲料中脂肪的最适需要量为14.44%。