农药学学报  2013, Vol. 15 Issue (6): 704-707   PDF    
引用本文
邓曼, 曹梦超, 王全胜, 朱国念. 气相色谱法同时检测水果中氟吡菌酰胺、肟菌酯及其代谢物肟菌酸的残留量.农药学学报,2013,15(6):704-707  
DENG Man, CAO Mengchao, WANG Quansheng, ZHU Guonian. Simultaneous determination of fluopyram,trifloxystrobin and its metabolite trifloxystrobin acid in fruits by gas chromatography. Chinese Journal of Pesticide Science,2013,15(6):704-707  
气相色谱法同时检测水果中氟吡菌酰胺、肟菌酯及其代谢物肟菌酸的残留量
邓曼, 曹梦超, 王全胜, 朱国念     
浙江大学 农药与环境毒理研究所, 杭州 310029
收稿日期：2013-08-08 ;修回日期：2013-09-26.
作者简介: 邓曼，女，硕士研究生，E-mail：21116154@zju.edu.cn;*朱国念，通信作者（Author for correspondence），男，博士，教授，主要从事残留检测和环境毒理研究，E-mail：zhugn@zju.edu.cn.
摘要：采用气相色谱法建立了水果中氟吡菌酰胺、肟菌酯及其代谢物肟菌酸残留的分析方法。样品用乙腈匀浆提取，氯化钠和无水硫酸镁盐析后，经N-丙基乙二胺（PSA）分散固相萃取净化，气相色谱-电子捕获检测器（GC-ECD）检测。结果表明：在0.05~1 mg/kg添加水平下，氟吡菌酰胺、肟菌酯及其代谢物肟菌酸的平均回收率为79%~120%，相对标准偏差（RSD）为0.7%~16%。氟吡菌酰胺、肟菌酯及其代谢物肟菌酸在不同水果样品中的检出限（LOD）分别为0.01、0.015和0.01 mg/kg，定量限（LOQ）均为0.05 mg/kg。该方法快速、简单和稳定，可以满足水果中氟吡菌酰胺、肟菌酯及其代谢物肟菌酸残留量的检测要求。
关键词： 气相色谱     氟吡菌酰胺     肟菌酯     肟菌酸     水果     残留    
Simultaneous determination of fluopyram,trifloxystrobin and its metabolite trifloxystrobin acid in fruits by gas chromatography
DENG Man, CAO Mengchao, WANG Quansheng, ZHU Guonian     
Institute of Pesticide and Environment Toxicology, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China
Abstract: A method was established for determining fluopyram,trifloxystrobin and its metabolite trifloxystrobin acid residued in fruits by gas chromatography(GC).Residues were extracted with acetonitrile,salted-out by sodium chloride and magnesium sulfate,cleaned up by primary secondary amine (PSA),and determined by GC equipped by ECD.The results showed that the method was validated using fruits samples spiked with pesticides at concentration levels ranging from 0.05 to 1 mg/kg.The average recovery is from 79% to 120%,with relation standard deviations between 0.7% to 16%.The limits of detection (LOD) were 0.01,0.015 and 0.01 mg/kg for fluuopyram,trifloxystrobin and trifloxystrobin acid in the different fruits samples.And the limit of quantification (LOQ) was 0.05 mg/kg. The method is rapid,easy and stable for determination of fluopyram,trifloxystrobin and trifloxystrobin acid in fruits.
Key words: gas chromatography     fluopyram     trifloxystrobin     trifloxystrobin acid     fruits     residue    

氟毗菌酞胺(fluopyram)化学名称为N-2-[3-氯-5 -(三氟甲基)-2 -毗陡基]乙基-α,α,α-三氟刁-O-甲苯酞胺，分子式为C16H11C1F6N20，相对分子质量为396.71，属苯甲胺酞胺类杀菌剂，对卵菌纲病菌 有很高的生物活性，具有保护和治疗双重作用，且对 作物和环境安全[1]肪菌醋(trifloxystrobin)化学名 称为(2Z)-2-甲氧基亚氨基-2-[2-[[1-[3-(三氟甲 基)苯基]亚乙基氨基]氧甲基]苯基]，分子式为C20H19F3N2O4，相对分子质量为408. 37，属甲氧基 丙烯酸类杀菌剂，是一种呼吸抑制剂[2]，杀菌谱广、 活性高，对子囊菌、半知菌类、担子菌类等真菌有良 好的活性，植物吸收肪菌醋后被代谢为肪菌酸，而肪 菌酸在毒理学上的意义则超过母体[3]。欧洲食品安 全局规定[4]:氟毗菌酞胺在柑橘中的最大残留限量 (MRL)值为0. 5 mg/kg;国际食品法典中规定[5]:氟 毗菌酞胺在葡萄中的MRL值为2 mg/kg,肟菌醋在 柑橘和葡萄中的MRL值分别为0. 5和3 mg/kg。

日前，采用气相色谱法-氢火焰离子检测器 (GC-FID)检测氟毗菌酞胺[1]和气相色谱-氮磷检测 器(GC-NPD)检测肪菌酉旨、肪菌酸残留的分析方 法[6-7]已有报道，但2种检测方法只能用于单个农 药品种的检测，且耗费溶剂量大，尚未见关于同时检 测3种农药在水果中残留的GC-ECD分析方法。 笔者采用乙睛高速匀浆提取、N-丙基乙二胺(PSA ) 净化、GC-ECD测定的方法，拟建立同时检测氟毗菌 酞胺、肪菌醋和肪菌酸在水果中残留量的简便、快速 的分析方法。

1 材料与方法
1.1主要仪器

GC-2010岛津气相色谱仪及GC-2010电子捕 获检测器(日本Shimadzu公司);RE-2000旋转蒸发 仪(上海亚荣生化仪器厂);T25匀质机(德国IKA 公司)。

1.2药剂与试剂

99.4%氟毗菌酞胺(fluopyram) ,99.6%肪菌醋 ( trifloxystrobin)和98.7%肪菌酸(trifloxystrobin acid)均为标准品，德国Bayer公司产品。

乙睛、氯化钠、无水硫酸镁均为分析纯;乙酸乙醋为色谱纯;PSA(美国W elchrom公司)。

1.3试验材料

水果样品从浙江省杭州市南肖埠菜市场随机抽 取，包括西瓜(瓜瓤)、葡萄、草毒、柑橘(橘肉)、苹果 和梨，分别代表瓜类、浆果类、柑橘类和仁果类。

1.4 标准溶液的配制

准确称量10.3 mg(精确至0.1 mg)氟毗菌酞胺、肪菌醋、肪菌酸标准品，用丙酮定容至10 mL ,配成质 量浓度为1 000 mg/L的标准储备液，于-20℃下保 存，备用。使用时用乙酸乙醋逐级稀释成质量浓度 分别为0.01 ,0.05 ,0.1 ,0.5 ,1 mg/L的标准工作溶 液，于4℃下保存，备用。

1.5 样品的提取与净化
1. 5. 1提取

准确称取经粉碎、匀浆的水果可食用 部位样品20 g(精确至0. 1 g)于250 mL离心瓶中，加 人50 mL乙睛[8]，在高速匀质机中于 10 000 r/min 下匀浆1 min;加人Sg氯化钠和7g无水硫酸镁再 在10 000 r/min下匀浆1 min，在4 000 r/min下离 心5 min;取10 mL上清液，在45℃水浴下减压浓 缩至近干，待净化。

1.5.2净化

向待测样品中加人4 mL乙酸乙醋，转人25 mL加有0. 1 g PSA[9]和1.2 g无水硫酸镁的离心管中，涡旋1 min，然后在4 000 r/min下离心5 min，取上清液过0. 22μm微孔滤膜，待测。

1.6气相色谱检测条件

DB-35色谱柱(30 m x 0. 32 mm x 0. 25 μm)， 柱温:起始温度80℃，以30℃/min升至220℃，保 持1 min;以5 ℃/min升至240 ℃，保持2 min;以 10℃/min升至260 ℃，保持4 min [10,11,12]。

进样口温度260 ℃，检测器温度280 ℃;载气为 氮气，纯度≥99-99%;流速3. 2 mL/min;尾吹气流 速(氮气)60 mL/min;进样体积为1 μL，不分流进 样;隔垫吹扫时间为0. 75 min。

1.7标准曲线的绘制

将0.01,0.05,0.1,0.5、1 mg/L的氟毗菌酞 胺、肪菌醋、肪菌酸标准工作溶液分别按1.6节条件 进行GC测定。以进样质量浓度为横坐标，相应峰 面积为纵坐标绘制标准工作曲线。外标法定量。

1.8添加回收试验

向6种水果空白样品中分别添加氟毗菌酞胺、 肪菌醋和肪菌酸标准工作溶液，添加水平分别为 0. O5 ,0. 5和1 mg/L，采用所建立的方法测定添加 回收率。每个添加水平3次重复，同时设空白对照。

2 结果与讨论
2.1 样品提取条件的选择

氟毗菌酞胺的pKa值为11. 14，在酸性条件下 易生成盐而溶于水中，因此提取剂应为中性或碱性; 肪菌醋在含水基质中水解易转化成酸，在碱性条件 下酸易离解转化成盐而溶于水中，故选择中性条件 下以乙睛为提取剂。

2.2 样品净化条件的选择

苹果、柑橘基质中含丰富有机酸，西瓜、草毒、葡 萄中含大量糖分、色素以及预处理反应产物，会干扰 气相色谱对待测物的信号响应。本研究采用PSA 分散固相萃取净化，PSA与样品提取液充分接触， 利用其较弱的阴离子交换功能，可有效去除提取液 中多种极性杂质，避免有机酸、色素、部分糖和脂肪 酸等杂质在进样口和柱头堆积所引起的基质效应， 提高了仪器的检测灵敏度。

2.3 方法的线性范围与检出限

结果表明：在质量浓度为0.01~1mg/L范围内，氟毗菌酞胺、肪菌醋和肪菌酸的进样质量浓度(x)与色谱峰面积(力之间呈现出较好的线性关系。氟毗菌酞胺标准曲线为y =10 338x-2 009(决定系数 R2 = 0. 997 0) ;肪菌醋标准曲线为y = 67 726x + 9 193( R2 = 0. 9986) ;肪菌酸标准曲线为y = 73 975x +40 320(R2 -0.990 0)。氟毗菌酞胺、肪菌酸和肪菌醋的保留时间分别为8.51 ,8.96和13.01 min。

氟毗菌酞胺、肪菌醋、肪菌酸在不同水果样品中的检出限(LOD)分别为0.01 , 0. 015 , 0.01 mg/kg,定量限(LOQ)均为0.05 mg/kg。

2.4 方法的准确度与精确度

添加回收率试验结果(表 1)表明:在0.05~1 mg/kg添加水平下，氟毗菌酞胺的平均回收率在83%~116%之间，相对标准偏差(RSD)为0. 7%~13%;肪菌酸的平均回收率在84%~109%之间，RSD为1.2%~16% ;肪菌醋的平均回收率在79%~120%之间，RSD为0. 8%~15%。测定结果可满足农药残留测定的要求[13]。葡萄空白样品和添加氟毗菌酞胺、肪菌醋和肪醋酸样品图谱见图 1。

表 1 氟毗菌酞胺、肟菌醋和肟菌酸在水果中的添加回收率和相对标准偏差(n=3) Table 1 Recoveries of fluopyram，trifloxystrobin and trifloxystrobin acid in fruits samples at different levels ( n=3)

图 1 葡萄空白样品(A)和葡萄中添加氟毗菌酞胺、肟菌酸和肟菌醋样品(0.5mg/kg)(B)的气相色谱图 Fig. 1 GC chromatograms for grape blank sample(A) and grape sample spiked of fluopyram， trifloxystrobin acid and trifloxystrobin at 0.5 mg/kg(B) 1：氟吡菌酰胺；2：肟菌酸；3：肟菌酯
1:fluopyram;2:trifloxystrobin acid;3:trifloxystrobin
2.5 6种市售水果中的农药残留

运用本研究中建立的GC-ECD分析方法，检测 了从杭州市南肖埠菜市场随机抽取的6种水果中氟 毗菌酞胺、肪菌醋和肪菌酸的残留量。结果表明，在 6种被抽检水果中均未检出这3种被检物。

3 结论

运用分散固相萃取净化-气相色谱技术，建立了同时检测水果中氟吡菌酰胺、肟菌酯和肟菌酸残留的方法。样品用乙腈匀浆提取，氯化钠和无水硫酸镁盐析后，经PSA净化，气相色谱-电子捕获检测器(ECD)检测。在0.05～1 mg/kg添加水平下，氟吡菌酰胺、肟菌酯和肟菌酸的平均回收率在79%～120%之间，相对标准偏差(RSD)在0.73%～16%之间。该方法简单、快速、高效、灵敏和安全，满足色谱分析条件，是同时检测氟吡菌酰胺、肟菌酸和肟菌酯比较理想的方法。

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