文章信息
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- WANG Yaqiong, LIU Qiang, JIANG Fabin, YUAN Qingqi, YAN Rui, ZHUANG Su. 2016.
- 胍基乙酸对樱桃谷肉鸭生产性能和抗氧化能力的影响
- Effects of guanidinoacetic acid on performance and antioxidant capacity in Cherry Valley ducks
- 南京农业大学学报, 39(2): 269-274
- Journal of Nanjing Agricultural University, 39(2): 269-274.
- http://dx.doi.org/10.7685/jnau.201505024
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文章历史
- 收稿日期:2015-05-14
胍基乙酸(GAA)是动物机体内源合成肌酸的前体物,而肌酸是机体能量代谢中的重要物质。在肾脏和胰脏中,精氨酸和甘氨酸在精氨酸-甘氨酸脒基转移酶的作用下合成GAA,合成的GAA经血液进入肝脏,然后被甲基化生成肌酸[1]。体内肌酸以游离态肌酸和磷酸肌酸两种形式存在,两者一起构成磷酸原系统,该系统作为ADP/ATP循环的备用,当短期需要时以储存和动员能量。
肌酸既可以从动物性蛋白类食物中获取,也可以通过生物体自身合成,或者通过肌酸补剂补充。已有研究表明,在日粮中补充肌酸能够提高畜禽的生长性能和胴体品质[2, 3],同时肌酸还具有一定的抗氧化作用[4, 5]。
GAA作为肌酸的前体物质,是机体有效的肌酸源,其在动物试验中已表现出促进能量代谢,提高胴体质量,降低料重比等效果[6, 7]。与肌酸相比,GAA更加稳定且成本较低,更适合作为饲料添加剂使用。有关GAA在肉鸭饲料中应用的研究却鲜见报道。本试验通过在肉鸭日粮中添加不同剂量的GAA,研究GAA对樱桃谷肉鸭生长性能、屠宰性能和抗氧化能力的影响,为GAA在畜禽生产中的科学应用提供依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料胍基乙酸由济南金牧达有限公司提供,有效含量不小于98%。
1.2 试验设计、时间及地点试验采用单因子完全随机区组设计,选用10日龄健康且体质量相近的樱桃谷肉鸭720只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复30只。分别饲喂添加质量分数为0%(对照组)、0.025%(试验组Ⅰ)、0.05%(试验组Ⅱ)和0.10%(试验组Ⅲ)GAA的试验日粮。
试验于2013年7月22日至8月23日在徐州恒杰饲料有限公司肉鸭养殖场进行。
1.3 日粮组成及饲养管理基础日粮参照肉鸭营养需要配制,基础日粮组成及营养水平见表 1。试验鸭采用网上平养,按常规进行疫苗接种,饲喂颗粒饲料,自由采食和饮水,24 h光照,每天记录采食量、死淘数。试验于42日龄结束。
| 组成 Composition | 生长阶段 Growth stage | 组成 Composition | 生长阶段 Growth stage | ||
| 10~21 d | 22~42 d | 10~21 d | 22~42 d | ||
| 原料组成/% Ingredient composition | 营养组成/% Nutrition composition | ||||
| 玉米 Corn | 49.40 | 53.35 | 粗蛋白质 Crude protein | 19.00 | 16.91 |
| 小麦 Wheat | 3.00 | 10.00 | 钙 Calcium | 1.00 | 0.90 |
| 次粉 Wheat middling | 11.00 | 8.00 | 总磷 Total phosphorus | 0.70 | 0.65 |
| 米糠 Rice bran | 6.50 | 5.10 | 赖氨酸 Lysine | 0.95 | 0.83 |
| 棉粕 Cottonseed meal | 5.00 | 6.00 | 蛋氨酸 Methionine | 0.47 | 0.43 |
| 豆粕 Soybean meal | 10.35 | 5.00 | 代谢能2 Metabolizable energy | 12.10 | 12.27 |
| 玉米蛋白粉 Corn gluten meal | 10.00 | 8.00 | |||
| 赖氨酸 Lysine | 0.15 | 0.20 | |||
| 蛋氨酸 Methionine | 0.15 | 0.20 | |||
| 石粉 Limestone | 1.59 | 1.40 | |||
| 磷酸氢钙 Dicalcium phosphate | 1.56 | 1.45 | |||
| 氯化钠 NaCl | 0.30 | 0.30 | |||
| 预混料1 Premix | 1.00 | 1.00 | |||
| 注: 1)预混料可为每千克饲料提供:维生素A 10 000 IU,维生素D3 2 000 IU,维生素E 20 mg,维生素K 0.5 mg,烟酸60 mg,泛酸11 mg,吡哆醇2.5 mg,核黄素4.0 mg,生物素0.02 mg,叶酸0.6 mg,硫胺素3 mg,胆碱600 mg,维生素B12 0.012 mg,铜8 mg,铁80 mg,锰80 mg,锌60 mg,硒0.20 mg,碘0.40 mg;2)代谢能为计算值,单位为MJ · kg-1。 Note: 1)The premix provides for per kg diet:vitamin A 10 000 IU,vitamin D3 2 000 IU,vitamin E 20 mg,vitamin K 0.5 mg,nicotinic acid 60 mg,D-pantothenic acid 11 mg,pyridoxine 2.5 mg,riboflavin 4.0 mg,biotin 0.02 mg,folic acid 0.6 mg,thiamine 3 mg,choline chloride 600 mg,vitamin B12 0.012 mg,Cu 8 mg,Fe 80 mg,Mn 80 mg,Zn 60 mg,Se 0.20 mg,I 0.40 mg;2)Metabolizable energy is calculated,and unit is MJ · kg-1. | |||||
42日龄时,所有试验鸭禁食12 h后(仅供饮水)测定肉鸭的活体质量,然后在每重复中随机抽取1只肉鸭屠宰。颈静脉放血,取血于离心管中(每只试验鸭各取2管血样,1支离心管经肝素溶液润洗,另1支未经处理),静置一段时间后,在低温离心机中以3 000 r · min-1离心15 min,取上清液分装,于-70 ℃下保存待测。放血后采用湿法拔毛,分别称量每只鸭的屠体质量、半净膛、全净膛、胸肌、腿肌和腹脂质量。取部分肝脏、胸肌样品,于-70 ℃保存备用。
1.5 测定指标与方法 1.5.1 生长性能计算平均体质量(average body weight,ABW)、平均日增质量(average daily gain,ADG)、料重比(feed gain ratio,F/G)。
1.5.2 屠宰性能计算屠宰率、半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率、瘦肉率。测定方法按文献[8]的方法进行。
1.5.3 肌酸含量血浆及胸肌组织中的肌酸(Cr)含量的测定采用反相高效液相色谱法。色谱条件为:Agilent Zorbax ODS-C18色谱柱(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相为乙腈+29.4 mmol · L-1 KH2PO4缓冲液(体积比为2 ∶ 98),其中缓冲液内含1.15 mmol · L-1四丁基硫酸氢铵(TBAHS),溶液经0.45 μm滤膜过滤;脱气,流速1.0 mL · min-1,注温25 ℃,进样量20 μL,紫外检测波长210 nm,运行时间均为15 min,保留时间为1.95 min。
1.5.4 抗氧化指标血清及肝脏组织中总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)含量,均采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定。
1.6 数据统计和处理试验数据经Excel 2010进行初步整理后,用统计软件SPSS 18.0中的单因素方差分析(One-way ANOVA)进行差异显著性检验,用Duncan′s进行多重比较,结果均以平均值±标准误( x±SE)表示。
2 结果与分析 2.1 胍基乙酸(GAA)对樱桃谷肉鸭生长性能的影响表 2显示:与对照组相比,试验组的平均日增体质量分别提高了1.40%、2.60%、0.07%;料重比分别降低了0.40%、2.20%、1.80%;两项指标均以试验组Ⅱ表现最好,但差异均不显著(P>0.05)。说明GAA对肉鸭生产性能无明显影响。
| 项目Items | 对照组 Control | 试验组Ⅰ Exp.Ⅰ | 试验组Ⅱ Exp.Ⅱ | 试验组Ⅲ Exp.Ⅲ |
| 初始体质量/g Initial body weight | 281.00±1.59 | 279.67±2.67 | 278.67±3.29 | 279.51±3.02 |
| 终末体质量/g Final body weight | 2 303.56±25.13 | 2 331.01±52.15 | 2 353.43±25.42 | 2 316.43±23.86 |
| 平均日增体质量/(g·d-1)Average daily body weight gain | 63.20±0.78 | 64.10±1.62 | 64.84±0.82 | 63.66±0.75 |
| 料重比Feed/gain ratio(F/G) | 2.23±0.02 | 2.22±0.05 | 2.18±0.06 | 2.19±0.04 |
由表 3可见:与对照组相比,试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的半净膛率分别提高了1.02%、1.29%、0.96%;全净膛率分别提高了1.73%、1.98%、1.08%;腿肌率分别提高了0.56%、5.59%、2.61%;3项指标均表现出试验组Ⅱ显著高于对照组(P<0.05);腹脂率分别降低了6.34%、9.09%、12.70%,但是差异不显著(P>0.05)。此结果表明GAA对肉鸭屠宰性能具有改善作用。
| % | ||||
| 项目 Items | 对照组 Control | 试验组Ⅰ Exp.Ⅰ | 试验组Ⅱ Exp.Ⅱ | 试验组Ⅲ Exp.Ⅲ |
| 屠体率 Dressing rate | 87.37±0.12 | 87.65±0.27 | 87.87±0.15 | 87.76±0.26 |
| 半净膛率 Half eviscerated yield rate | 81.11±0.38b | 81.94±0.21ab | 82.16±0.10a | 81.89±0.34ab |
| 全净膛率 Eviscerated yield rate | 73.89±0.49b | 75.17±0.15a | 75.35±0.09a | 74.69±0.60ab |
| 胸肌率 Breast muscle rate | 11.18±0.39 | 12.00±0.39 | 12.16±0.31 | 12.14±0.61 |
| 腿肌率 Leg muscle rate | 10.74±0.20b | 10.80±0.08ab | 11.34±0.14a | 11.02±0.25ab |
| 腹脂率 Abdominal fat rate | 1.42±0.11 | 1.33±0.08 | 1.29±0.11 | 1.24±0.06 |
| 瘦肉率 Lean meat rate | 21.91±0.50 | 22.80±0.42 | 23.50±0.38 | 23.17±0.72 |
| 注:同行数据肩注不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。 Note:In the same row,values with different superscript small letters mean significant difference at 0.05 level. | ||||
由表 4可知:与对照组相比,试验组胸肌和血浆中的肌酸水平均呈现出增高趋势,其中试验组Ⅱ的胸肌中肌酸含量显著高于对照组(P<0.05),试验组Ⅲ的血浆中肌酸含量较对照组显著提高(P<0.05)。试验结果提示GAA能有效提高肉鸭体内的肌酸水平。
项目 Items | 对照组 Control | 试验组Ⅰ Exp.Ⅰ | 试验组Ⅱ Exp.Ⅱ | 试验组Ⅲ Exp.Ⅲ |
| 胸肌中肌酸水平/(mg·kg-1) Creatine level of breast meat | 3 560.17±25.22b | 3 594.78±67.34ab | 3 792.33±76.70a | 3 652.81±32.07ab |
| 血浆中肌酸水平/(mg·L-1) Creatine level of plasma | 107.53±4.66b | 108.88±6.21ab | 113.31±5.20ab | 124.37±3.90a |
由表 5可知:与对照组相比,试验组Ⅱ、Ⅲ的血清中T-AOC水平和CAT、SOD活性均有增加趋势,但是差异均不显著(P>0.05);试验组的MDA含量分别降低了14.38%、16.95%、14.38%,其中试验组Ⅱ显著低于对照组(P<0.05);GSH-Px活性分别增高了9.96%、32.46%、12.34%,且试验组Ⅱ显著高于其他3组(P<0.05);GSH含量也均增加,其中试验组Ⅱ显著高于对照组(P<0.05)。
与对照组相比,试验组Ⅲ肝脏中的T-AOC水平显著提高(P<0.05);试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ肝脏中的CAT活性均有增加趋势,MDA含量有降低趋势,但是差异均不显著(P>0.05);SOD活性分别增加了3.28%、10.97%和1.79%,其中试验组Ⅱ显著高于其他3组(P<0.05);GSH-Px活性分别增加了21.08%、31.18%和26.82%,且试验组Ⅱ显著高于对照组(P<0.05);GSH含量分别增加了4.09%、44.68%与15.66%,其中试验组Ⅱ显著高于其他组(P<0.05)。结果表明GAA能提高机体的抗氧化性能以及降低体内MDA含量。
| 组织 Tissue | 指标 Items | 对照组 Control | 试验组Ⅰ Exp.Ⅰ | 试验组Ⅱ Exp.Ⅱ | 试验组Ⅲ Exp.Ⅲ |
| 血清 Serum | T-AOC水平/(U·mL-1)T-AOC level | 12.79±0.78 | 12.81±0.80 | 14.33±1.04 | 13.59±1.77 |
| CAT活性/(U·mL-1)CAT activity | 1.68±0.14 | 1.85±0.09 | 1.83±0.02 | 1.85±0.03 | |
| SOD活性/(U·mL-1)SOD activity | 54.04±0.52 | 53.78±4.20 | 59.41±4.07 | 62.83±2.62 | |
| MDA含量/(nmol·mL-1)MDA content | 5.84±0.26a | 5.00±0.59ab | 4.85±0.28b | 5.00±0.42ab | |
| GSH-Px活性/(U·mL-1)GSH-Px activity | 260.05±11.85b | 285.96±15.08b | 344.45±15.49a | 292.15±24.8b | |
| GSH含量/(μmol·L-1)GSH content | 13.81±2.36b | 14.96±1.30ab | 20.85±3.70a | 14.52±0.81ab | |
| 肝脏 Liver | T-AOC 水平/(U·mg-1)T-AOC level | 4.89±0.33b | 4.19±0.40b | 5.43±0.20ab | 6.27±0.82a |
| CAT活性/(U·mg-1)CAT activity | 45.81±5.92 | 47.98±0.74 | 52.39±0.12 | 48.14±0.52 | |
| SOD活性(U·mg-1)SOD activity | 98.35±1.22b | 101.58±3.02b | 109.14±2.20a | 100.11±2.95b | |
| MDA含量/(nmol·mg-1)MDA content | 2.22±0.05 | 2.17±0.14 | 2.14±0.09 | 2.19±0.17 | |
| GSH-Px活性/(U·mg-1)GSH-Px activity | 57.72±3.90b | 69.89±4.55ab | 75.72±0.88a | 73.20±2.22a | |
| GSH含量/(μmol·g-1)GSH content | 13.92±2.00b | 14.49±1.62b | 20.14±2.16a | 16.10±1.90b |
GAA是动物机体内源合成肌酸的前体物,其在体内合成反应分为两步:第一步,主要发生在肾脏和胰脏,精氨酸和甘氨酸在精氨酸-甘氨酸脒基转移酶(AGAT)的作用下,合成GAA;第二步,GAA经血液运输至肝脏,在S-腺苷蛋氨酸-胍基乙酸-N-甲基转移酶(GAMT)的作用下发生甲基化生成肌酸。合成的肌酸大约95%经过血液循环运输至肌肉组织,结合高能磷酸基后作为机体重要的能量储备。
研究表明,补充肌酸能够提高动物的体质量[2, 9]。Ringel等[6]和Lemme等[7]的试验表明,日粮中添加GAA能够显著增加肉仔鸡肌肉中的肌酸水平,同时具有增加肉仔鸡的平均日增质量和降低料重比的效果。本试验结果也表明,日粮中添加GAA能够显著提高樱桃谷肉鸭胸肌和血浆中的肌酸水平,但对日增质量和料重比的影响并不显著,这与Wang等[10]的试验结果相似。
本试验结果表明,补充0.05% GAA能够显著增加樱桃谷肉鸭的半净膛率、全净膛率、腿肌率,同时有增加胸肌率和降低腹脂率的趋势,这与吴娟等[11]的试验结果相似。
肌酸能够增加细胞的水合作用,引起液体渗透入细胞内,进而增加细胞体积和机体总水分,最终增大肌肉体积[12]。细胞的水合作用能够激发蛋白质的合成,抑制蛋白质分解,同时还可以增加糖原的合成[13]。有体外研究表明,肌酸能够促进肌细胞的肌动蛋白、肌球蛋白重链的合成[14]。Young等[15]研究结果也表明,补充一水肌酸能够增加Duroc和Landrace猪肌管蛋白质的合成,对蛋白质降解并没有影响。因此,补充GAA可能会通过提高机体内肌酸水平而增加肌肉中的水分滞留和蛋白沉积,进而增加机体体质量。同时,也有研究报道,日粮中补充GAA能够节约机体内源合成GAA所需的精氨酸和甘氨酸,使更多的精氨酸和甘氨酸参与机体蛋白质或内源氨基酸的合成,进而促进机体生长[16, 17]。
Lemme等[18]在肉仔鸡日粮中添加不同剂量的GAA,结果尽管没有表现出持续的剂量效应,但是呈现出的最适范围是0.06%~0.08%。FEEDAP专家组[19]通过5个效能试验,提出对育肥期肉鸡,GAA添加剂的最低有效添加量为0.06%,且效果最稳定的添加量是0.08%。本试验中,除血浆中肌酸含量外,试验组Ⅱ(即0.05%的GAA添加量)虽与试验组Ⅰ、Ⅲ均没有显著差异,但在各项指标中都呈显出数字上最好的效果,此结果与以上研究结论一致。
3.2 GAA对肉鸭抗氧化能力的影响氧化还原反应是机体内部的重要生理生化反应,反应过程中伴随着自由基的生成与降解。正常情况下该过程处于动态平衡,但当有不利条件诱发时(如低氧或外源物质入侵),机体氧化与抗氧化平衡失调,可能造成自由基的积累,而机体过多的自由基会引起机体组织的氧化应激损伤。自由基的种类很多,其中由氧诱发的自由基称为活性氧(reactive oxygen species,ROS),主要包括超氧化物、羟自由基、过氧化氢(H2O2)、一氧化氮等[20]。机体内过量的ROS可能会氧化脂质、蛋白质、DNA、碳水化合物等物质,引起组织的损伤[21]。MDA是ROS作用于生物膜中的脂质发生过氧化反应的终产物,常被用来反映机体内脂质过氧化的程度。ROS可以被机体内的一群抗氧化酶清除,这些酶主要包括过CAT、SOD、GSH-Px。SOD催化超氧离子(O-2)发生歧化反应转化为H2O2,而CAT和GSH-Px催化H2O2分解为氧气和水,其中GSH-Px是特异的催化还原型谷胱甘肽(GSH)与H2O2反应[21]。
Wang等[10]的试验结果表明,添加GAA可以显著提高生长育肥猪血浆的GSH-Px、CAT、T-AOC和肌肉中的SOD、CAT、T-AOC等抗氧化指标,且极显著性降低了血浆和肌肉中MDA浓度。本试验结果表明,添加GAA具有提高血清和肝脏组织中各抗氧化物酶活性和GSH含量的趋势,其中试验组Ⅱ(即0.05%的GAA添加量)效果最好,多项指标达到显著水平。且添加GAA也降低了血清中MDA的含量,其中试验组Ⅱ较对照组达到显著水平。可见,添加GAA可在一定程度上提高机体的抗氧化能力。
GAA的抗氧化作用可能与其能够提高机体肌酸水平密切相关。Lawler等[22]在无细胞的体外研究中发现高浓度肌酸可以消除自由基。Sestili等[5]通过体外应激模型(暴露于H2O2和叔丁基过氧化氢等氧化因子中)发现,肌酸在哺乳动物活细胞中通过直接清除活性氧(特别是羟自由基)和活性氮而发挥抗氧化作用。金宏等[4]发现,补充肌酸可以显著降低大鼠游泳运动后骨骼肌线粒体脂质过氧化物水平。Guidi等[23]研究发现,肌酸对氧化应激损伤的线粒体DNA基因活性具有显著的保护作用,有助于维持线粒体基因组稳定,保证其正常功能的发挥。
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