无可观察效应浓度在赤眼蜂慢性毒性研究中的应用

http://dx.doi.org/10.7685/jnau.201506032

文章信息

王欣, 赵丹丹, 姚蓉, 袁善奎, 张燕, 高聪芬. 2016.

WANG Xin, ZHAO Dandan, YAO Rong, YUAN Shankui, ZHANG Yan, GAO Congfen. 2016.

Application of no observed effect concentration in the research of pesticides chronic toxicity on Trichogramma spp.

南京农业大学学报, 39(2): 242-248

Journal of Nanjing Agricultural University, 39(2): 242-248.

http://dx.doi.org/10.7685/jnau.201506032

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收稿日期：2015-06-28

引用本文

王欣, 赵丹丹, 姚蓉, 等. 2016. 无可观察效应浓度在赤眼蜂慢性毒性研究中的应用[J]. 南京农业大学学报, 39(2): 242-248. 复制到剪切板

WANG Xin, ZHAO Dandan, YAO Rong, et al. Application of no observed effect concentration in the research of pesticides chronic toxicity on Trichogramma spp.[J]. Journal of Nanjing Agricultural University, 39(2): 242-248. DOI: 10.7685/jnau.201506032 复制到剪切板

无可观察效应浓度在赤眼蜂慢性毒性研究中的应用

王欣¹, 赵丹丹¹, 姚蓉¹, 袁善奎², 张燕², 高聪芬¹

1. 南京农业大学植物保护学院农药科学系/农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室, 江苏南京 210095;
2. 农业部农药检定所, 北京 100125

收稿日期：2015-06-28

基金项目：国家科技支撑计划项目(2011BAE06B09);国家公益性行业(农业)科研专项(201203022)

作者简介：王欣,讲师,E-mail:wangxin2011@njau.edu.cn。

通迅作者：高聪芬,教授,博导,研究方向为杀虫剂毒理及抗药性,Tel:025-84395244,E-mail:gaocongfen@njau.edu.cn。

摘要：[目的] 探索无可观察效应浓度(NOEC)作为评价农药慢性毒性影响指标的可行性,为制定农药对赤眼蜂慢性毒性影响试验准则奠定基础。[方法] 用药膜法对3种赤眼蜂(稻螟赤眼蜂、亚洲玉米螟赤眼蜂及松毛虫赤眼蜂)进行急性毒性试验,并在此基础上采用卵卡浸渍法进行慢性毒性试验,探索5种农药(25~400 mg·L^-1乐果、10~160 mg·L^-1吡虫啉、5 000 mg·L^-1氟铃脲、4 000 mg·L^-1毒氟磷及2 000 mg·L^-1恶唑砜)对药剂敏感性较强的不同虫态赤眼蜂羽化率、寄生率及成蜂存活时间的影响。[结果] 乐果和吡虫啉的NOEC分别为200和20 mg·L^-1,高于二者防治水稻飞虱和螟虫田间最高推荐剂量,在应用时应避开赤眼蜂生防时期。5 000 mg·L^-1氟铃脲对松毛虫赤眼蜂、4 000 mg·L^-1毒氟磷和2 000 mg·L^-1恶唑砜对稻螟赤眼蜂卵期、幼虫期、预蛹期和蛹期是安全的。[结论] NOEC作为评价慢性毒性影响指标具有可行性,可作为农药对赤眼蜂慢性毒性影响的重要考察指标。

关键词：农药赤眼蜂慢性毒性测试无可观察效应浓度

Application of no observed effect concentration in the research of pesticides chronic toxicity on Trichogramma spp.

WANG Xin¹, ZHAO Dandan¹, YAO Rong¹, YUAN Shankui², ZHANG Yan², GAO Congfen¹

1. Department of Pesticide Science, College of Plant Protection/Key Laboratory of Monitoring and Management of Plant Diseases and Insects, Ministry of Agriculture, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China;
2. Institute for the Control of Agrochemicals, Ministry of Agriculture, Beijing 100125, China

Abstract: [Objectives] This research was carried out to explore the feasibility of no observed effect concentration(NOEC)used as an index to evaluate the chronic toxicity of pesticides,which can provide a technical character on formulating the guideline for chronic toxicity of pesticides to Trichogramma spp. [Methods] Glass-vial method was used on acute toxicity to Trichogramma japonicum Ashmead,T.ostriniae Pang et Chen and T.dendrolimi,and host egg exposure method was adopted in the chronic toxicity experiment to explore the chronic effects of five pesticides(25-400 mg·L^-1 dimethoate,10-160 mg·L^-1 imidacloprid,5 000 mg·L^-1 hexaflumuron,4 000 mg·L^-1 dufulin and 2 000 mg·L^-1ezuofeng)on the different development stage of Trichogramma spp.,such as emergence,parasitism,and longevity. [Results] The NOEC of dimethoate and imidacloprid are 200 and 20 mg·L^-1,respectively,which are significantly higher than the maximum recommended dose in the field,so dimethoate and imidacloprid should not be sprayed when Trichogramma spp.was released. Hexaflumuron at the concentration of 5 000 mg·L^-1 is non-toxic to T.dendrolimi at egg,larvae,prepupae and pupae stage. Dufulin and ezuofeng,at the concetration of 4 000 mg·L^-1 and 2 000 mg·L^-1,respectively,is non-toxic to T.japonicum Ashmead at egg,larvae,prepupae and pupae stage. [Conclusions] It is feasible for NOEC as an index to evaluate the chronic toxicity of pesticides to Trichogramma spp..

Keywords: pesticide Trichogramma spp. chronic toxicity test no observed effect concentration(NOEC)

赤眼蜂(Trichogramma spp.),膜翅目寄生性昆虫,是目前国内外研究最多、应用最广、影响最大的天敌昆虫之一。多年来,赤眼蜂释放作为一种重要的生物防治手段在控制鳞翅目等害虫发生方面起到了重要的作用^{[1, 2]}。我国是世界上赤眼蜂应用面积最大的国家之一,有近10种赤眼蜂被大量繁殖和推广应用。目前,赤眼蜂的防治对象已达20余种。由于化学防治仍是控制虫害的重要手段^[3],在施用农药消灭害虫的同时也可能对其天敌产生毒副作用,杀伤一部分天敌,对生态环境产生不利影响^{[4, 5]}。因此,通过开展农药对赤眼蜂的室内安全性评价,明确并掌握农药对天敌的安全性,选择合适的用药时间,以充分发挥赤眼蜂作为害虫天敌的自然控害作用,是协调化学防治和生物防治的关键,也是有害生物综合治理的重要组成部分^{[6, 7, 8]}。

目前，农药对赤眼蜂的室内安全性评价研究主要侧重于赤眼蜂的急性毒性测试,而农药对赤眼蜂除具有直接致死作用外,还会影响其生长发育、寿命和繁殖率等,在行为上表现为对寄生率、交配率、在作物上的分布、取食行为及对寄主的搜索效率等的影响^{[7, 8]}。不同发育阶段(卵、幼虫、预蛹、蛹和成虫)赤眼蜂对杀虫剂的敏感性不同,一般认为赤眼蜂对杀虫剂最敏感时期为成蜂期,其他4个虫态的敏感程度不同,但试验结果不完全一致^{[9, 10]}。因此,有必要就农药对赤眼蜂影响的慢性毒性进行系统研究。

目前,农药对赤眼蜂各发育阶段影响作用的研究考察主要指标为羽化率^{[11, 12, 13]},无法全面反映农药对赤眼蜂的慢性毒性影响。无可观察效应浓度(NOEC)是指与对照相比,对试验生物未产生显著效应的最高受试物浓度。该指标在水生生物研究中应用比较广泛,但在赤眼蜂研究中鲜见报道。为了制定农药对赤眼蜂慢性毒性影响试验准则,本研究引入无可观察效应浓度作为评价慢性毒性影响的指标。首先测定5种农药对稻螟赤眼蜂、亚洲玉米螟赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂成蜂的急性毒性,然后选择敏感性较强的赤眼蜂种类,开展慢性毒性影响试验,主要评价5种药剂在不同浓度条件下对不同虫态(卵期、幼虫期、预蛹期和蛹期)赤眼蜂羽化率、成蜂存活时间及寄生率的影响,确定其对赤眼蜂影响的无可观察效应浓度,以期明确测试药剂对不同种赤眼蜂的慢性毒性,为害虫综合防治中合理使用农药和保护天敌提供依据,并检验无可观察效应浓度(NOEC)作为评价农药慢性毒性影响指标的可行性。

1 材料与方法 1.1 供试虫源及寄主昆虫

供试虫源:稻螟赤眼蜂(Trichogramma japonicum Ashmead)、亚洲玉米螟赤眼蜂(Trichogramma ostriniae Pang et Chen)及松毛虫赤眼蜂(Trichogramma dendrolimi)均在人工气候培养箱中饲养多年,其中稻螟赤眼蜂2005年6月采集于江苏东海县水稻田被寄生的二化螟卵块;松毛虫赤眼蜂和亚洲玉米螟赤眼蜂均由南京农业大学植物保护学院李元喜教授提供。3种赤眼蜂饲养条件:温度(26±1) ℃,相对湿度70%~90%,光照周期为16 h光照、8 h黑暗。

供试寄主昆虫:米蛾卵由广东省昆虫研究所提供,幼虫在方形塑料盒(20 cm×15 cm×6 cm)内用市售玉米粉饲养。饲养条件:温度(26±1) ℃,相对湿度60%~80%,光照周期为14 h光照、10 h黑暗。成虫羽化后收集到罩有80目网纱的塑料盒中交配产卵。

1.2 供试药剂

83.4%乐果(dimethoate)原油、97%吡虫啉(imidacloprid)原药和97%氟铃脲(hexaflumuron)原药均由农业部农药检定所环境室提供。99%毒氟磷(dufulin)原药和98%恶唑砜(ezuofeng)原药均由贵州大学研发并提供。

上述药剂均用丙酮溶解,制成高浓度母液。在赤眼蜂急性毒性试验中直接用丙酮稀释成所需要的浓度梯度,在慢性毒性测定中用0.1%曲拉通(Triton X-100)水溶液稀释成所需要的浓度梯度。

1.3 试验方法 1.3.1 对3种赤眼蜂成蜂急性毒力的测定

参照GB/T 31270.17—2014化学农药环境安全评价试验准则第17部分:天敌赤眼蜂急性毒性试验,采用药膜法,用丙酮将农药原药配制成高浓度母液再稀释成所需浓度,吸取1 mL药液于55 mm×25 mm闪烁瓶内,平放于过塑机上并转动闪烁瓶,使药剂均匀地涂于瓶内壁,待溶剂完全挥发后即成药膜。每瓶接入约100±10头羽化24 h内的赤眼蜂成蜂,让其在瓶内自由爬行1 h后转入干净无药指形管中,放入浸有10%蜂蜜水的脱脂棉球于指形管口,用黑布封口并放入培养箱中:温度(26±1) ℃,相对湿度70%~90%,光照周期为16 h光照、8 h黑暗。用丙酮作对照,每处理重复3次。接蜂24 h后检查每管中成蜂总数及死亡数(用细毛笔轻触蜂体不动者为死亡)。

1.3.2 对赤眼蜂慢性毒性的测定

参照孙超等^[14]和王德森等^[15]报道的卵卡浸渍法,每个指形管放入1.0 cm×2.0 cm米蛾卵卡(约100粒卵)后引入羽化4~6 h成蜂约20头,供其寄生24 h后去除成蜂。寄生24、48、96和144 h(相应的发育阶段为卵、幼虫、预蛹、蛹)后,将卵卡分别在不同浓度供试药液中浸5 s,取出晾干后,装入指形管中,用黑布封口后放回培养箱中至成蜂羽化完毕。以0.1%曲拉通(Triton X-100)水溶液作空白对照,每处理重复9次,分为3组,每组3个重复,第1组用于检查成蜂羽化数,计算成蜂羽化率(羽化率=成蜂羽化数/黑卵粒数×100%);第2组用于在成蜂羽化(小于8 h)后,随即抽取约20头引入新的指形管中,放入1.0 cm×2.0 cm米蛾卵卡(约100粒卵)供其寄生,计算寄生率(寄生率=黑卵粒数/总卵粒数×100%);第3组用于在成蜂羽化(小于8 h)后,随即抽取约20头左右引入新的指形管中,调查存活时间。如果羽化出蜂数量小于30头或活力低无法自主转移至新指形管中,则不进行寄生率和存活时间调查。

预试验浓度设定以急性毒性试验得到的LC₅₀值为参考依据,并考虑到赤眼蜂卵期至蛹期都在寄主卵内度过,寄主卵壳的保护使其对药剂的敏感度要低于赤眼蜂成蜂^{[9, 10, 16]},故以药剂对赤眼蜂成蜂的LC₅₀值的1倍、30倍和900倍为预试浓度。如果某药剂对赤眼蜂不表现出急性毒性,则在慢性毒性试验中的最高预试浓度设定与急性毒性试验中设定的最高浓度相同(最高浓度设定以形成的药膜均匀、干燥为前提),氟铃脲、毒氟磷和恶唑砜对赤眼蜂不表现出急性毒性,故预试浓度设定分别为5 000、4 000和2 000 mg • L^-1。如在最高预试浓度下不表现出慢性毒性,则我们认为该药剂在此最高浓度下对赤眼蜂是安全的,试验终止。正式试验根据预试验结果,乐果设置为25、50、100、200和400 mg • L^-1,吡虫啉设置为10、20、40、80和160 mg • L^-1。与对照相比,对赤眼蜂的羽化率、寄生率和存活时间均未产生显著效应的最高受试浓度,即为该药剂的无可观察效应浓度。

1.4 数据处理

回归分析:数据采用DPS v7.05版软件处理,计算LC₅₀值及其95%置信限。根据LC₅₀值95%置信限是否重叠判断各处理间差异是否显著^[17]。

存活时间分析:将每个指形管中赤眼蜂成蜂的存活时间和存活率进行直线回归分析。参照董杰等^[18]的方法,以50%个体死亡的时间作为该管中成蜂的存活时间,以减少由于赤眼蜂成虫个体寿命差异而引起的误差。

数据采用DPS v7.05版软件处理。用Duncan′s新复极差法进行显著性分析。数值采用平均值±标准误(x±SE)表示。

2 结果与分析 2.1 5种药剂对3种赤眼蜂成蜂的急性毒性

急性毒性结果表明:乐果对稻螟赤眼蜂、亚洲玉米螟赤眼蜂及松毛虫赤眼蜂的毒性差异不显著,其LC₅₀值分别为0.53(0.38~0.77)mg • L^-1、0.61(0.55~0.66)mg • L^-1及0.59(0.48~0.75)mg • L^-1。吡虫啉对稻螟赤眼蜂的LC₅₀值为0.34(0.30~0.39)mg • L^-1,对亚洲玉米螟赤眼蜂的LC₅₀值为0.44(0.38~0.51)mg • L^-1,且这两种赤眼蜂间的毒力差异不显著;但对松毛虫赤眼蜂的LC₅₀值为0.19(0.12~0.28)mg • L^-1,毒力与前两种赤眼蜂间差异均显著(表 1)。5 000 mg • L^-1氟铃脲、4 000 mg • L^-1毒氟磷及2 000 mg • L^-1恶唑砜对3种赤眼蜂的死亡率均与对照无显著差异(表 2)。因此,氟铃脲、毒氟磷、恶唑砜在本试验设定的最高浓度下对3种赤眼蜂未表现出急性毒性。

表 1 乐果和吡虫啉对3种赤眼蜂(成蜂)的急性毒性 Table 1 Acute toxicity of dimethoate and imidacloprid against three species of Trichogramma spp.(adult)

药剂Insecticide	稻螟赤眼蜂 T. japonicum		亚洲玉米螟赤眼蜂 T. ostriniae		松毛虫赤眼蜂 T.dendrolimi
药剂Insecticide	斜率Slope	LC ₅₀/(mg·L ^-1)(95%置信限,95% F.L.)	斜率Slope	LC ₅₀/(mg·L ^-1)(95%置信限,95% F.L.)	斜率Slope	LC ₅₀/(mg·L ^-1)(95%置信限,95% F.L.)
乐果Dimethoate	2.53±0.14	0.53(0.38~0.77)	3.24±0.17	0.61(0.55~0.66)	3.57±0.21	0.59(0.48~0.75)
吡虫啉Imidacloprid	1.29±0.10	0.34(0.30~0.39)	1.20±0.09	0.44(0.38~0.51)	1.50±0.10	0.19(0.12~0.28)

表选项

表 2 氟铃脲、毒氟磷及恶唑砜对3种赤眼蜂(成蜂)的急性毒性 Table 2 Acute toxicity of hexaflumuron,dufulin and ezuofeng against three species of Trichogramma spp.(adult)

药剂Insecticide	质量浓度/(mg·L ^-1)Concentration	平均死亡率/% Mortality
药剂Insecticide	质量浓度/(mg·L ^-1)Concentration	稻螟赤眼蜂 T.japonicum	亚洲玉米螟赤眼蜂 T.ostriniae	松毛虫赤眼蜂 T.dendrolimi
氟铃脲	0	4.04±1.31 ^a	7.04±1.35 ^a	7.67±1.29 ^a
Hexaflumuron	5 000	4.39±0.73 ^a	9.61±2.03 ^a	11.30±1.64 ^a

毒氟磷	0	4.64±0.82 ^a	9.12±2.01 ^a	6.53±0.57 ^a
Dufulin	4 000	6.38±1.67 ^a	8.20±1.41 ^a	9.36±2.06 ^a

恶唑砜	0	2.75±0.85 ^a	4.48±1.25 ^a	3.79±1.06 ^a
Ezuofeng	2 000	5.93±2.00 ^a	4.76±1.34 ^a	5.14±1.26 ^a
注:同列数据后相同字母表示在 0.05 水平差异不显著。 Note:The data in the same column followed by the same letters are not significantly different at 5% level.The same as follows.

表选项

2.2 5种药剂对赤眼蜂的慢性毒性

根据急性毒性试验结果,在慢性毒性试验中,吡虫啉的供试试虫为松毛虫赤眼蜂。其他药剂对3种赤眼蜂的毒性差异均不显著,而且恶唑砜和毒氟磷均属新药,其中恶唑砜尚无供试对象而毒氟磷在水稻和烟草等作物上有应用。因此为了保证供试试虫一致性,对于乐果和氟铃脲的供试试虫采用松毛虫赤眼蜂,恶唑砜和毒氟磷的供试试虫采用稻螟赤眼蜂。

从表 3可见,乐果的5个浓度条件下,卵期和幼虫期的松毛虫赤眼蜂羽化率为88.47%~97.67%,与对照差异均不显著;而对于预蛹期和蛹期的松毛虫赤眼蜂,400 mg • L^-1浓度下羽化率分别为56.07%和68.30%,与对照相比差异均显著,而其他浓度下的羽化率与对照差异均不显著。对于处于卵期、幼虫期和预蛹期的松毛虫赤眼蜂,10 和20 mg • L^-1吡虫啉处理下羽化率为87.64%~100%,与对照差异均不显著,而40 mg • L^-1吡虫啉处理下3个时期羽化率分别为73.00%、77.65%和64.97%,与对照相比差异均显著,而且随浓度升高羽化率下降幅度增大。对于处于蛹期的松毛虫赤眼蜂,80和160 mg • L^-1吡虫啉处理下羽化率显著下降,分别为59.21%和29.55%,并与对照差异显著。25、50、100、200和400 mg • L^-1乐果,10、20、40和80 mg • L^-1吡虫啉处理对于4个时期的松毛虫赤眼蜂的寄生率和存活时间与对照组相比无显著差异。5 000 mg • L^-1氟铃脲对于卵期、幼虫期、预蛹期和蛹期的松毛虫赤眼蜂的羽化率、寄生率和存活时间的影响,与对照组相比差异均不显著。从表 4可见,4 000 mg • L^-1毒氟磷和2 000 mg • L^-1恶唑砜对卵期、幼虫期、预蛹期和蛹期的稻螟赤眼蜂的羽化率、寄生率和存活时间未发现显著影响。

表 3 乐果、吡虫啉及氟铃脲对松毛虫赤眼蜂羽化率、寄生率及存活时间的影响 Table 3 Effect of dimethoate,imidacloprid and hexaflumuron on T.dendrolimi at emergence rate, parasitism rate and adult longevity

不同虫态Developmental stage

药剂Insecticide

质量浓度/(mg·L ^-1)Concentration

羽化率/%Emergence rate

寄生率/%Parasitism rate

存活时间/dAdult longevity

卵期Egg	乐果Dimethoate	0	89.33±5.38 ^a	90.53±1.67 ^a	3.93±0.27 ^a
		25	92.50±6.81 ^a	87.80±1.91 ^a	2.97±0.24 ^a
		50	94.67±2.74 ^a	87.37±3.21 ^a	4.33±0.87 ^a
		100	88.47±5.60 ^a	90.33±2.34 ^a	3.47±0.52 ^a
		200	97.10±0.42 ^a	90.30±2.62 ^a	3.23±0.55 ^a
		400	97.67±2.33 ^a	90.73±3.56 ^a	3.10±0.45 ^a
	吡虫啉Imidacloprid	0	95.34±4.66 ^a	87.05±2.93 ^a	4.17±0.26 ^a
		10	87.64±1.87 ^a	91.86±4.42 ^a	3.80±0.25 ^a
		20	100.00±0.00 ^a	81.21±1.06 ^a	4.03±0.27 ^a
		40	73.00±2.16 ^b	86.65±2.56 ^a	3.80±0.12 ^a
		80	55.13±8.03 ^c	82.27±4.10 ^a	3.60±0.21 ^a
		160	30.33±5.44 ^d	*	*
	氟铃脲Hexaflumuron	0	89.32±5.39 ^a	88.83±3.33 ^a	3.97±0.35 ^a
	氟铃脲Hexaflumuron	5 000	81.47±2.77 ^a	89.14±2.03 ^a	3.80±0.47 ^a
幼虫期Larvae	乐果Dimethoate	0	93.80±4.16 ^a	90.00±2.11 ^a	3.37±0.78 ^a
		25	95.87±3.64 ^a	91.30±2.44 ^a	3.23±0.58 ^a
		50	87.83±2.20 ^a	89.43±1.80 ^a	3.07±0.19 ^a
		100	90.50±1.88 ^a	89.57±2.14 ^a	3.33±0.13 ^a
		200	88.77±3.90 ^a	90.50±1.90 ^a	3.20±0.17 ^a
		400	97.63±2.37 ^a	90.93±2.83 ^a	2.80±0.21 ^a
	吡虫啉Imidacloprid	0	91.99±6.88 ^a	80.41±2.13 ^a	4.27±0.07 ^a
		10	100.00±0.00 ^a	83.35±6.18 ^a	4.03±0.12 ^a
		20	97.54±2.46 ^a	77.95±3.00 ^a	4.43±0.09 ^a
		40	77.65±1.95 ^b	80.00±1.59 ^a	4.00±0.06 ^a
		80	53.77±5.45 ^c	82.62±3.76 ^a	4.03±0.12 ^a
		160	37.84±6.48 ^d	*	*
	氟铃脲Hexaflumuron	0	93.00±3.31 ^a	79.64±3.66 ^a	3.83±0.30 ^a
	氟铃脲Hexaflumuron	5 000	92.90±3.58 ^a	83.50±2.01 ^a	3.40±0.06 ^a
预蛹期Prepupae	乐果Dimethoate	0	96.37±2.53 ^a	90.67±2.54 ^a	3.63±0.35 ^a
		25	93.27±1.07 ^a	89.63±0.77 ^a	3.13±0.27 ^a
		50	94.30±3.54 ^a	91.93±0.37 ^a	3.23±0.37 ^a
		100	88.73±5.68 ^a	89.97±0.73 ^a	3.53±0.47 ^a
		200	91.57±4.22 ^a	90.43±1.60 ^a	3.00±0.31 ^a
		400	56.07±4.43 ^b	91.80±1.08 ^a	3.23±0.23 ^a
	吡虫啉Imidacloprid	0	96.97±3.03 ^a	83.23±7.02 ^a	4.43±0.62 ^a
		10	95.36±4.64 ^a	80.99±4.42 ^a	4.67±0.48 ^a
		20	91.47±6.26 ^a	88.83±1.88 ^a	4.17±0.23 ^a
		40	64.97±2.69 ^b	80.19±2.01 ^a	4.73±0.38 ^a
		80	38.43±6.49 ^c	82.25±5.63 ^a	3.77±0.38 ^a
		160	26.15±4.15 ^c	*	*
	氟铃脲Hexaflumuron	0	96.36±2.53 ^a	86.91±2.75 ^a	3.80±0.15 ^a
	氟铃脲Hexaflumuron	5 000	92.24±2.31 ^a	90.07±5.12 ^a	3.23±0.26 ^a
蛹期Pupae	乐果Dimethoate	0	88.03±6.22 ^a	90.83±1.16 ^a	2.97±0.22 ^a
		25	95.80±4.20 ^a	89.80±1.08 ^a	3.17±0.15 ^a
		50	94.17±4.68 ^a	88.67±2.02 ^a	3.27±0.27 ^a
		100	94.50±3.27 ^a	89.80±2.26 ^a	3.3±0.31 ^a
		200	95.27±3.27 ^a	88.97±2.74 ^a	2.67±0.03 ^a
		400	68.30±4.52 ^b	87.73±1.92 ^a	3.20±0.56 ^a
	吡虫啉Imidacloprid	0	92.03±5.12 ^a	79.81±2.21 ^a	3.80±0.10 ^a
		10	91.67±5.43 ^a	88.33±2.78 ^a	3.97±0.03 ^a
		20	92.28±1.83 ^a	82.99±3.47 ^a	3.60±0.25 ^a
		40	79.79±4.25 ^a	84.91±4.97 ^a	3.70±0.17 ^a
		80	59.21±4.38 ^b	79.88±2.65 ^a	3.80±0.15 ^a
		160	29.55±5.69 ^c	*	*
	氟铃脲Hexaflumuron	0	85.98±1.14 ^a	81.00±3.66 ^a	4.40±0.25 ^a
	氟铃脲Hexaflumuron	5 000	91.29±4.41 ^a	82.13±2.14 ^a	4.00±0.15 ^a
注:供试蜂数量小于30头,未能进一步试验。The selected were less than 30 for further observation.

表选项

表 4 毒氟磷和恶唑砜对稻螟赤眼蜂4个时期羽化率、寄生率及存活时间的影响 Table 4 Effect of dufulin and ezuofeng on emergence rate,parasitism rate and adult longevity of T.japonicum at four stages

不同虫态Developmental stage	药剂Insecticide	质量浓度/(mg·L ^-1)Concentration	羽化率/%Emergence rate	寄生率/%Parasitism rate	存活时间/dAdult longevity
卵期Egg	毒氟磷Dufulin	0	79.23±2.03	86.73±2.72	3.97±0.26
	毒氟磷Dufulin	4 000	75.27±1.38	79.90±1.27	4.13±0.03
	恶唑砜Ezuofen	0	91.70±1.80	83.77±3.32	5.40±0.61
	恶唑砜Ezuofen	2 000	90.60±3.65	81.73±2.60	5.83±0.15
幼虫期Larvae	毒氟磷Dufulin	0	81.60±3.44	85.57±4.04	4.13±0.18
	毒氟磷Dufulin	4 000	82.03±3.49	83.63±2.96	4.23±0.26
	恶唑砜Ezuofen	0	93.17±4.74	84.10±4.74	5.43±0.47
	恶唑砜Ezuofen	2 000	89.77±0.98	87.37±1.82	5.23±0.32
预蛹期Prepupae	毒氟磷Dufulin	0	75.53±2.49	86.13±3.62	4.60±0.15
	毒氟磷Dufulin	4 000	78.10±1.85	89.10±2.24	4.17±0.12
	恶唑砜Ezuofen	0	77.90±5.35	86.43±3.65	5.50±0.35
	恶唑砜Ezuofen	2 000	82.50±3.69	85.13±2.89	4.37±0.96
蛹期Pupae	毒氟磷Dufulin	0	78.00±3.52	83.07±3.61	4.00±0.21
	毒氟磷Dufulin	4 000	77.67±1.43	81.50±0.86	4.00±0.06
	恶唑砜Ezuofen	0	75.77±6.55	83.07±4.08	5.10±0.49
	恶唑砜Ezuofen	2 000	76.43±10.37	87.47±4.22	5.47±0.56

表选项

3 讨论

前人研究赤眼蜂慢性毒性影响因评价指标和试验方法不统一,或同一个指标(如寄生率和存活时间)获取的途径不同,导致试验结果之间缺乏可比性。王德森等^[19]将羽化后6 h内的卷蛾分索赤眼蜂成蜂接触药剂后,逐日观察每头雌蜂的存活情况、逐日寄生卵数和逐日产雌数;王德森等^[15]还采用卵卡浸渍法处理卵期、幼虫期、预蛹期和蛹期的拟澳洲赤眼蜂,观察其羽化率和畸形率;朱九生等^[20]将卵期、幼虫期、预蛹期和蛹期广赤眼蜂采用喷雾法接触农药后,观察其各时期的羽化率、性比、雌蜂寿命和雌蜂翅畸形率;Preetha等^[21]采用喷雾法处理被螟黄赤眼蜂寄生3 d后的米蛾卵,观察羽化出蜂后的螟黄赤眼蜂羽化率和寄生率。为了制定农药对赤眼蜂慢性毒性影响试验准则,综合考虑目前慢性毒性研究中常用的考察指标并结合试验的可操作性和简便性原则,本研究采用羽化率、寄生率和存活时间计算赤眼蜂慢性毒性NOEC值,并对羽化率、寄生率和存活时间获得的试验方法进行了详细阐述,使其作为评价慢性毒性影响的综合指标具有更好的可行性。

Preetha 等^[21]研究发现,用吡虫啉喷雾处理被螟黄赤眼蜂寄生3 d后的米蛾卵,用药量为25 g• hm^-2,螟黄赤眼蜂羽化率与对照差异显著而寄生率与对照差异不显著;徐华强^[22]研究发现,用20 g• hm^-2吡虫啉浸药处理蛹期的稻螟赤眼蜂,其羽化率仅为32.26%。二者研究结果均与本研究中40 mg • L^-1(即30 g• hm^-2)吡虫啉对松毛虫赤眼蜂羽化率已产生影响而对寄生率无影响相一致。Hussain等^[23]研究发现,吡虫啉处理螟黄赤眼蜂不同时期后,卵期受影响程度要大于幼虫期、预蛹期和蛹期。而孙超等^[14]用吡虫啉处理稻螟赤眼蜂各时期后发现,预蛹期羽化率最低,其次是幼虫期、蛹期和卵期。本研究表明吡虫啉处理松毛虫赤眼蜂各时期后,预蛹期最敏感,其次是卵期和幼虫期,蛹期耐药性较强。产生差异的原因可能与寄生蜂种类不同有关。而乐果处理在预蛹期最敏感,其次是蛹期,卵期和幼虫期的耐药性较强,这与李开煌等^[24]的研究一致。

本研究表明5 000 mg • L^-1氟铃脲对松毛虫赤眼蜂没有观察到显著慢性毒性,而孙超等^[14]认为氟铃脲在供试浓度为50 mg • L^-1下对稻螟赤眼蜂卵期、幼虫期、预蛹期和蛹期的羽化率分别为(4.6±4.4)%、(0.7±1.0)%、(17.0±2.4)%和(86.4±3.2)%,对卵期和幼虫期的风险等级为极明显的不利影响,对预蛹期为比较明显的不利影响,而对蛹期基本没有不利影响。而Bastos等^[25]报道42.5 mg • L^-1氟啶脲对短管赤眼蜂的蛹和成虫是安全的,王德森等^[15]也研究发现5%氟啶脲乳油30 mg • L^-1对拟澳洲赤眼蜂卵期、幼虫期、预蛹期和蛹期是安全的。氟铃脲和氟啶脲同为昆虫生长调节剂类,均通过抑制昆虫几丁质合成而杀死害虫。造成该研究结果差异的原因可能与乳化剂种类及加入量的多少和米蛾卵厚度及赤眼蜂的种类等有关,具体原因有待进一步研究。

本试验结果表明,4 000 mg • L^-1毒氟磷(新型抗植物病毒剂)和2 000 mg • L^-1恶唑砜(绿色新杀菌剂)对稻螟赤眼蜂各虫态均没有直接或间接的不利影响。因为二者为新开发药剂,目前尚无对赤眼蜂影响相关报道。

慢性毒性试验以急性毒性试验为前提,结合了羽化率、寄生率及存活时间这3项考察指标,可以更全面地评价药剂对赤眼蜂的安全性。综上所述,NOEC作为一种综合指标可以比较全面评价赤眼蜂慢性毒性的影响。乐果和吡虫啉的NOEC 分别为200和20 mg • L^-1,高于二者防治水稻飞虱和螟虫的田间最高推荐剂量,在应用时应注意错过赤眼蜂生防时期。5 000 mg • L^-1氟铃脲对松毛虫赤眼蜂卵期至蛹期是安全的,4 000 mg • L^-1毒氟磷和2 000 mg • L^-1恶唑砜对稻螟赤眼蜂卵期至蛹期是安全的。

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