银叶椴(Tilia tomentosa)又名银毛椴、绒毛椴等，为椴树科椴树属植物。银叶椴主产巴尔干半岛，向北可达匈牙利及乌克兰西部，向东经土耳其延伸至叙利亚西北部(北纬约36°30′)(唐亚等，1996)。银叶椴是优良的城市绿化树种，树冠塔形，枝叶浓密，叶色暗绿，叶背面银白色，在阳光下熠熠生辉；初夏淡黄色小花馥郁芬芳，沁人心脾，秋季叶色金黄，赏心悦目，非常适合做城市行道树及公园、庭院栽植；耐修剪，适于做绿篱(Wandell，1989)。银叶椴适应能力强，是优良的水土保持、防风固沙和水源涵养等防护林树种(Burgess，1991)。银叶椴经济价值高，木材可做胶合板和家具；树皮纤维用途广泛；花香浓郁，是重要的蜜源植物；嫩叶和花制作茶等饮料；嫩叶和花茶具有止痉挛、促发汗及止痛等药效(Burgess，1991)。

一般认为椴树(Tilia spp.)种子休眠属综合性休眠，但休眠原因，没有统一观点(史锋厚等，2006)。Spaeth(1934)认为种皮是导致椴树种子休眠的重要原因；心叶椴(Tilia cordata)种子休眠是由种皮和胚休眠造成的(Heit，1977); 美洲椴(T. americana)种子休眠的原因在于胚乳中含有发芽抑制物质(Vanstone，1982)和珠心膜限制气体出入(美国农业部林务局，1984); 银叶椴是由物理休眠(physical dormancy)和生理休眠形成的复合休眠类型(Baskin et al., 2001)。

针对椴树种子休眠问题，许多学者提出了不少破眠方法。如欧洲椴(T.europaea)去掉果皮；心叶椴种子酸蚀(或暖层积)和低温层积处理；紫椴(T.amurensis)种子混沙变温处理；美洲椴种子酸蚀、擦伤或热水浸泡，激动素(kinetin)和GA3溶液浸种而后低温层积等，皆可促进种子发芽(美国农业部林务局，1984；Heit，1977；邹学忠等，1991；杨顺等，1992；Pitel et al., 1989)。不过，这些破眠方法大多需要5个月以上时间(史锋厚等，2006)。而银叶椴在种皮具有透水性后，也需要低温层积一个冬季，第2年春天才能发芽(Heit, 1969)。

为了缩短发芽时间，提高发芽率，幼苗生长整齐、健壮，为银叶椴这一具有生态、经济、社会效益的优良植物资源在我国引种驯化成功提供苗木保障，笔者针对其种子具有的复合休眠、繁殖困难的特点，在对休眠原因进行前期探讨的基础上，深入研究快速解除种子休眠、促进萌发的苗木繁殖技术。

1 材料与方法 1.1 试验材料

银叶椴种子2003年11月采于匈牙利，净度98.8%，千粒质量为43.8 g，出仁率为99.2%。

1.2 试验方法

1) 种子的处理  银叶椴核果果皮厚度0.7~0.8 mm，表面有角质层，中果皮为致密木栓层，严重阻碍种子吸水膨胀。种皮表面角质化，中层致密的厚壁栅状(柱状)石细胞阻碍胚与外界的水、气交换；同时，在果皮、种皮和胚乳内积累了大量的ABA等抑制物质，使幼胚进入深度休眠状态(有祥亮，2006)。

针对银叶椴种子休眠的原因，笔者曾对快速解除种子休眠做过一些前期研究，包括保留果皮和机械去果皮的种子吸涨率对比；为增加种皮透性采用高温水烫种或浓硫酸腐蚀(分别设不同的时间梯度)进行比较研究；为解除ABA等抑制物质，分别进行不同浓度赤霉素(GA₃)和细胞分裂素(6-BA)浸种试验和层积试验等(有祥亮，2006)。参考试验结果和前人研究(杨孝汉，1989；程广有等，2004)，设计以下正交组合。

① 热水浸种处理：银叶椴果实机械去果皮，然后风选得无果皮的纯净种子。对纯净种子取出3组，每组重300 g，分别做如下处理：100℃开水速烫2、10 s，然后迅速放入室温水中浸泡24 h；80℃热水自然冷却后浸泡24 h。

② 赤霉素(GA₃)处理：上述各组中取出已经吸胀的种子，按正交试验设计要求分别用100、200、300 mg·L^-1赤霉素溶液，在室温下浸泡24 h。

③ 细胞分裂素(6-BA)处理：种子经赤霉素浸种处理后，按正交试验设计要求分别用100、200、300 mg·L^-1细胞分裂素溶液，在室温下浸泡24 h。

④ 层积处理：种子经细胞分裂素浸种处理后，按正交试验设计要求分别进行：a种子与湿沙按1:3(体积比)的比例混匀后，装入搪瓷盘中，上覆湿纱布以保持水分，定期定量洒水和翻动，在0~5℃冰箱中放置20 d; b种子与湿沙按1:3(体积比)的比例混匀后，装入搪瓷盘中，上覆湿纱布以保持水分，定期定量洒水和翻动，在室内(15~20℃)放置20 d; c种子与湿沙按1:3(体积比)的比例混匀后，装入搪瓷盘中，上覆湿纱布以保持水分，定期定量洒水和翻动，先在室内(15~20℃)放置5 d，然后在0~5 ℃冰箱中放置15 d。

2) 试验设计  以上各组种子处理，均按正交试验设计选用正交表L₂₇(3¹³)(贾乃光，1993)安排试验组合。各因素和水平情况见表 1。

3) 发芽率计算、播种及出苗前后的抚育管理  层积结束后，计算各组处理的发芽率(发芽标准：长出正常胚根，幼根长为该种粒长度的一半以上)。对正交试验结果进行方差分析，找出打破休眠、促进萌发的最优方案。根据最优方案，重新取一批种子进行催芽处理，待种子有超过1/3露白时，于2004年5月28—29日播在摆放于低床上的塑料容器中，在大棚内进行育苗，60 d后调查场圃出苗率。容器基质为草炭:土=1:1(体积比)，每个容器播1粒种子，播后覆盖草帘，并在大棚上覆盖遮阳网。出苗前经常洒水保持床面湿润，幼苗出土后，分次撤除草帘。

试验重复3次，以大棚内南北向低床(6 m×1 m)按长度等分为3部分，每小区2 m²，在小区内整齐排放塑料容器。

2 结果与分析 2.1 影响种子发芽率的主导因子

银叶椴种子发芽正交试验结果见表 2、3。方差分析结果表明(表 3)，对发芽率有极显著或显著影响的因素是赤霉素处理、细胞分裂素处理、浸种处理和层积处理，其中赤霉素处理、细胞分裂素处理的不同水平之间有极显著差异，其他2种处理的不同水平之间有显著差异。而赤霉素处理和其他3个处理的交互作用对发芽率没有显著影响。

从表 2可以看出，在不考虑交互作用的情况下，发芽率最高的最佳试验因素、水平组合(优方案)应取各因素最大K值所对应的水平，即为A₁B₁C₂D₃。从方差分析的结果可以看出，MS_B×D＜MS_e，这说明交互作用B×D对发芽率的影响较小，可以将其归入误差，交互作用A×B、B×C亦对发芽率无显著影响，所以在确定因素A、B、C、D优水平时可以不考虑交互作用，即优方案为A₁B₁C₂D₃。也就是说，浸种处理以去果皮+100℃水烫2 s，换室温水浸泡24 h(水平1)发芽率最高，赤霉素处理以200 mg·L^-1溶液浸泡24 h(水平1)效果最佳，细胞分裂素处理以200 mg·L^-1溶液浸泡24 h(水平2)效果最好，层积处理以先15~20℃、后0~5℃混沙层积各10 d(水平3)效果最好。当这些水平配合适当时，就为解除休眠创造有利的条件。

2.2 不同浸种处理对发芽率的影响

从前面方差分析中已经知道，各种浸种处理对发芽率有显著影响。去掉果皮、100℃水烫2 s，换室温水浸泡24 h处理后，平均发芽率为57.6%，去果皮+80℃水自然冷却24 h，平均发芽率为49.1%，而去掉果皮、100℃水烫10 s，换室温水浸泡24 h处理后，平均发芽率最低，为41.1%。

2.3 不同浓度赤霉素和细胞分裂素浸种处理对发芽率的影响

表 3方差分析结果表明，赤霉素浸种对发芽率有极显著的影响。赤霉素溶液浓度为100、200、300 mg·L^-1各自浸泡24 h，平均发芽率分别为56.2%、58%、33%。可见不同浓度赤霉素溶液对发芽率的影响不同，较低浓度有利于种子萌发，高浓度则使发芽率下降。适宜浓度为200 mg·L^-1。

同样，细胞分裂素浸种对发芽率也有极显著的影响。细胞分裂素溶液浓度为100、200、300 mg·L^-1各自浸泡24 h，平均发芽率分别为50.8%、57%、39.9%。可见不同浓度细胞分裂素溶液对发芽率的影响也不同，较低浓度有利于种子萌发，高浓度则使发芽率下降。适宜浓度为200 mg·L^-1。

2.4 层积处理对发芽率的影响

方差分析表明，层积处理对种子发芽率有显著影响。0~5℃混沙层积20 d，15~20 ℃混沙层积20 d，先15~20℃混沙层积5 d、后0~5℃混沙层积10 d平均发芽率分别为46.3%、44.7%、56.8%。可见，不同层积方法，发芽率不同，其中以先暖温、后低温的变温层积效果最好，其最大值达到了83.6%。

2.5 场圃出苗率

在获得较高种子发芽率之后，其苗木长势及保存率如何，是至关重要的问题，它决定了技术措施的生产适用性及其推广价值。

试验表明，正交试验种子催芽最优方案的田间育苗获得了较高的场圃出苗率。5月29日播种，6月11日，不到半月时间平均发芽率达到23.5%，6月21日，不到1月时间平均发芽率达到44.7%，播种2个月后的7月29日调查场圃出苗率，平均达到71.2%。可见，正交试验所确定的种子催芽最优方案出苗早，场圃出苗率高，出苗迅速而整齐。

2.6 苗木质量

2004年10月19日对上述试验进行苗木质量调查，得到苗高、地径、根长、干重平均值分别为42.3、0.85、25.6和11.6 g·株^-1。获得了健壮苗木。

3 结论与讨论

通过以上的试验结果，经过综合分析，得到快速解除银叶椴种子休眠的综合技术为：脱去果皮、用高温水烫种增加种皮透水性、用赤霉素和细胞分裂素混合处理、先暖温后低温的变温层积。具体的催芽处理程序流程图见图 1。

椴树种子被坚硬果皮包裹，去掉果壳成为解除种子休眠的第一步。Heit(1977)认为心叶椴和大叶椴果壳可以利用机械擦伤去除，欧洲椴果壳可以手工去除，美洲椴的坚硬外壳则需要用磨咖啡机处理或者酸蚀处理。由于银叶椴果皮坚韧，用手无法搓掉，可用机械擦伤果皮，再用手剥去；也可以用浓硫酸处理果皮，随着处理时间的加长，果皮逐层脱落，大约经过2 h处理，轻搓种子，果皮既与种子相分离，达到脱去果皮的目的(有祥亮，2006)。

去掉果皮的种子，可以通过酸蚀或开水烫种增加种皮的透性，浓硫酸处理以浸种30 min比较好，种子吸胀率达89%，而生活力达到87%，其他浸种时间相对差些。热水浸种，以2 s比较适宜，吸胀率达到81%，而生活力达到94%。不过，经过酸蚀后的银叶椴种子在层积过程中发芽率低且易腐烂，尤其是在暖温层积期间(有祥亮，2006)，罗丽芬等(1990)处理紫椴种子，也存在这一问题。而热水烫种则很少有腐烂现象。具体原因有待深入研究。基于此，本次正交试验设计的浸种处理都采用开水浸种，而不用酸蚀。

赤霉素和细胞分裂素对尽快打破休眠、促进种子萌发有重要作用。在种子层积处理之前，利用GA₃或GA₃与6-BA混合浸泡东北红豆杉种子，可以使种子萌发时间提前，同时发芽率也有所提高(程广有等，2004)。本研究用GA₃与6-BA先后浸泡银叶椴种子，也得出相似结果。郑光华等(1990)认为：GA₃可代替需要的低温层积，解除休眠促进发芽。激素调节3因子学说认为，GA₃、ABA与CK在种子萌发中起着抑制及允许萌发的作用，GA₃为萌发最初所需，CK的存在归因于GA₃，其作用是减缓ABA的抑制，促使GA₃的作用得以实现，进而启动萌发。

在本次正交试验中，采用综合处理方法，银叶椴种子层积比单一低温层积催芽(Heit, 1969)所需发芽时间大大缩短，这是一个很突出的特点。国外随种子寄来的银叶椴催芽方法是“袋装层积法”：种子用室温水浸泡48 h，然后将种子与等量的基质进行混合，装入塑料袋，然后放入0~2℃的冷库中保存52周，最后将其放入18~20℃保存2周，种子就会发芽多且整齐。该方法实际效果不清楚，仅就其需要52周的时间才能打破休眠进行萌发，则耗时太长。而通过正交试验，能在20 d左右即能达到理想的发芽率。

综合处理方法能快速解除银叶椴种子休眠，大大缩短发芽时间，这是因为：1)去掉果皮，消除了果皮的透水障碍、内源抑制物质可能的不利影响和坚硬果皮的机械束缚。2)浸种处理，尤其是100℃开水烫2 s，再转入室温水浸泡24 h，既有较高的吸胀率(81%)，又保持较高的生活力(94%)。迅速吸胀和高生活力为外源激素发挥作用打下良好基础，室温水浸泡24 h也有利于萌发抑制物质的溶解。3)外源赤霉素(GA₃)和细胞分裂素(6-BA)的使用是萌发时间大为缩短的关键。外源GA₃和6-BA的使用，使种子内部激素比例发生改变，由原来抑制萌发转变为有利于种胚发育。赤霉素能诱导酶的合成，促进RNA合成的同时促进酶分泌，使贮藏物质水解成可供胚生长的小分子化合物，促进萌发。因此，赤霉素可代替所需要的低温层积，尽快解除休眠促进发芽。外源细胞分裂素(CK)的使用也很重要，CK减缓ABA的抑制，促使GA₃的作用得以实现，进而启动萌发。4)先暖温、后低温的变温层积为种子快速萌发创造了良好的环境条件。前期暖温有利于种子萌发所需各种酶的活化和合成，后期低温有利于贮藏物质水解伴随而来的能量或热量的释放。