生产加工过程中包装容器的污染是食品中甲醛的来源之一。目前，食品包装材料中甲醛的分析方法有变色酸法^[1]、盐酸苯肼比色法^[2]、示波极谱电化学法^[3]等。这些成熟的方法分析时间长、方法稳定性差、灵敏度低；同时由于甲醛的分子量较小，造成气相色谱法不能直接检测甲醛。有文献报道采用2，4-二硝基苯肼(DNPH)柱前衍生、GC-ECD检测包装材料中甲醛，与用DNPH柱前衍生、液相色谱仪定量分析相比，后者具有灵敏度高、选择性好等优点^[4-6]。

1 实验部分 1.1 仪器与试剂

岛津LC-2010AHT液相色谱仪(具紫外检测器)；甲醛标准溶液(9.91 mg/mL, 国家标准物质中心)；DNPH(广州化学试剂厂经重晶纯化处理或按文献^[5]配制和提纯)乙腈溶液2.0 mg/mL；乙腈(天津科密欧化学有限公司，色谱纯)；环己烷(天津化学有限公司，色谱纯)；磷酸氢二钠溶液(180 g/L)；盐酸—氯化钠溶液(氯化钠2 g加少许纯水溶解，再加入37%盐酸6 mL，最后用纯水定容至100 mL)。

1.2 液相色谱条件

XDB C18不锈钢柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)流动相；乙腈：水=62：38；柱流量1.0 mL/min；波长365 nm；柱温40℃；进样量10 μL。

1.3 标准曲线的制备

吸取1.00 mL甲醛标准溶液于100 mL容量瓶中，纯水定容至刻度，作为甲醛标准储备溶液，临用前用纯水配制成20.00 μg/mL甲醛标准使用溶液。准确吸取0.00、0.10、0.20、0.40、0.80、1.50、2.00 mL甲醛标准使用溶液于50 mL比色管中，加纯水至5.00 mL，再加入盐酸—氯化钠溶液2.00 mL、磷酸氢二钠溶液1.00 mL、衍生物(DNPH乙腈溶液)0.50 mL，摇匀，于60℃水浴中衍生20 min，最后准确加入环乙烷5.00 mL，再用迷你振荡器(MS2 Mini Shaker)以2 000转/min振摇1 min，静止分层后将环乙烷层吸出，过滤，取0.01 mL滤液进样，每个浓度进样3次，以标准物质的峰面积对应标准浓度绘制标准曲线^[6]。

1.4 样品的处理及测定

样品的预处理按《食品罐头内壁环氧酚醛涂料卫生标准的分析方法》(GB/T 5009.69-2008)^[1]进行样品的预处理。按每平方厘米的样品用95℃的纯净水2.00 mL进行浸泡30 min，浸泡液再按《食品罐头内壁环氧酚醛涂料卫生标准的分析方法》(GB/T 5009.69-2008)^[1]之7.2.4.2处理后取蒸馏液或上清液5.00 mL于50 mL比色管中，衍生操作方法同标准曲线，最后进样0.01 mL，于液相色谱仪分析定量，以保留时间定性，峰面积定量。

1.5 空白测定

取空白蒸馏液或纯净水5.00 mL于10 mL离心管中，衍生操作方法同标准曲线，最后进样0.01 mL，于液相色谱仪分析定量，衍生化后样品、衍生化后标样必须扣除空白样品中衍生产物。

1.6 质量控制

本方法做了工作曲线、空白试验、平行样的测定及加标回收等试验，工作曲线的线性范围为0~8.00 μg/mL，相关系数r=0.9998，最低检出限0.01 μg，加标回收率为91.0%~101.5%, 精密度为0.9%~2.6%，质量控制均符合《全国疾病控制机构工作规范》(2001版)^[7]的要求。

2 结果与讨论 2.1 衍生化时间和温度的影响

分别在40℃、50℃、60℃的水浴条件下衍生20、40、60 min后测定标准曲线的峰面积(表 1)。40℃的水浴60 min内衍生化反应一直在进行，反应不完全；50℃的水浴40 min及在60℃水浴20 min的衍生化反应均已基本完全。本文采用在60℃的水浴衍生20 min的条件来加快检测速度、提高工作效率。

2.2 衍生物的稳定性

在衍生反应完成后，将各标准点衍生液和样品衍生液在25℃室温放置5 min、30 min、1 h、2 h、6 h，以评价衍生物的稳定性。实验结果表明，各标准点和样品的峰面积在6 h内的变异系数＜5%(表 2), 说明衍生物在室温下就能保持良好的稳定性。

2.3 提取液的选择

甲醛在酸性条件下与衍生剂在水浴中衍生成脂溶性苯腙类化合物^[8]。根据其化学特性，可以采用石油醚、正己烷、环己烷等非极性有机溶剂进行提取，其中环己烷是毒性相对较小的试剂，所以本文用环己烷作为提取液。

2.4 色谱条件的选择

实验证明，在采用XDB C18不锈钢柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm)作为固定相，乙腈：水=62：38作为流动相的条件下甲醛的衍生物能达到很好的基线分离，峰型良好，保留时间适中，标准色谱图见图 1。

2.5 线性范围与检出限

本实验甲醛在0~8.00 μg/mL浓度范围内，各标准点的进样浓度与衍生产物的峰面积显良好的线性关系，相关系数r=0.999 8。以噪声的3倍计算，甲醛最低检出限0.01 μg，取5.00 mL甲醛标准使用溶液(20.00 μg/mL)衍生后测定计算，最低检出浓度为0.002 mg/L, 最低检测浓度时0.006 mg/L。

2.6 精密度、准确度和回收率实验

按本文方法随机检测99份包装材料中的甲醛，每份浸泡液进行6次平行样品测定，计算RSD值，结果表明甲醛的RSD为0.9%~2.6%。另随机抽取有代表性样品各3份分别加入高浓度和低浓度的甲醛标准，将每份样品中加标量与本底值相近的数据统计并计算加标回收率，试验结果表明甲醛回收率为91.0%~101.5%(表 3)。

2.7 干扰试验

本实验将甲醛、乙醛配成混和的标准溶液，按本方法操作，未发现乙醛对甲醛有干扰(图 2)。

3 小结

本方法采用DNPH柱前衍生法，液相色谱仪分析定量，不但具有灵敏度高、选择性好、精密度和准确度好等优点，而且简便、快捷，适合分析大批量的检测工作。