同属肠杆菌科的柠檬酸杆菌和志贺菌，柠檬酸杆菌属是人和动物肠道的正常菌群，也是条件致病菌^[1]。而志贺菌属是感染性极强的病原菌。2012年 3 月在公共场所从业人员检查中，检出一株在选择性平板上菌落形态与致病菌极为相似，并和志贺菌 4 种多价血清及痢疾志贺菌、鲍氏志贺菌分型血清型产生强凝集的无丙二酸柠檬酸杆菌。

1 材料与方法 1.1 标本来源

标本来源于 2012 年 3 月苏州工业园区公共场所从业人员肠道沙门菌、志贺菌带菌检查。

1.1.1

培养基SS琼脂、HE琼脂、GN增菌液、三糖铁琼脂(购于北京陆桥生物技术有限公司)。GN生化鉴定卡(法国梅里埃生物技术有限公司提供)。

1.1.2

诊断血清沙门菌诊断血清 30 种、志贺菌诊断血清 22 种(宁波天润生物药业有限公司)。(批号: 20101201，有效期至 2012 年 12 月 2 日)。

1.2 检验仪器

隔水式恒温培养箱、VITEK2 全自动微生物鉴定仪、生物安全柜。

1.3 方法

按照参照《食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验》(GB/T4789.5 － 2012)^[2]进行检验，肛试标本接种于GN增菌液，增菌培养后划线接种于HE和SS琼脂平板上进行分离培养，挑取可疑单个菌落接种三糖铁琼脂斜置 37℃培养 24 h，刮取可疑菌苔进行生化试验和血清学凝集试验。

2 结果 2.1 增菌培养

无丙二酸柠檬酸杆菌在GN增菌液中呈均匀混浊生长。

2.2 分离培养

无丙二酸柠檬酸杆菌在SS培养基上呈无色透明、中等大小、湿润、边缘整齐的菌落; 在HE琼脂上呈中等大小、绿色、圆形、边缘整齐的湿润菌落; 三糖铁培养基，斜面呈红色、底部黄色、不产硫化氢、产气不明显。

2.3 革兰氏染色

镜检为革兰阴性无芽孢短小杆菌。

2.4 试验结果。

血清学凝集试验结果见表 1。

2.5 生化试验结果

VITEK2 全自动微生物鉴定仪生化试验结果见表 2。

鉴定结果为: 无丙二酸柠檬酸杆菌，鉴定结果符合率为 99% ( excellent identification) 。

3 讨论

肠杆菌科包括埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属、柠檬酸杆菌属、变形杆菌属、肠杆菌属等。各属、种之间的菌株与诊断血清常呈交叉凝集反应，易导致对菌株的错误鉴定^[3]。近年来屡有志贺菌和阴沟肠杆菌产生交叉凝集的报导[4 － 6]，也有侵袭性大肠埃希菌和无丙二酸柠檬酸杆菌交叉凝集现象的报导^[7]，尚未查阅到志贺菌和无丙二酸柠檬酸杆菌交叉凝集的报导。

本次分离到的无丙二酸柠檬酸杆菌，在GN增菌液中的生长情况和志贺菌、沙门菌的生长情况相似，此菌和志贺菌、不产硫化氢的沙门菌在SS和HE培养基上的菌落形态也十分相似，三糖铁初步生化显示该菌不发酵乳糖。此菌和志贺菌属的O多价血清及痢疾志贺菌 5 ～ 8、鲍氏志贺菌 1 ～ 5、11 ～ 14血清型产生凝集反应，但与沙门菌A～F“O”多价血清不凝集，说明它和志贺菌属有共同的抗原。

按照标准要求应通过形态学和生化学鉴定，再进行血清学鉴定与分型，并作出最终判定，若单凭培养液生长状况、菌落形态、血清凝集试验而不做系统的生化反应就作出最终判断，本次分离到的无丙二酸柠檬酸杆菌其增菌培养、菌落与菌体形态、血清凝集反应，与志贺菌极其相似，如无生化反应的鉴定极易造成误判。公共场所卫生管理条例实施细则(卫生部令第 80 号)^[8]中第二章第十条中明确规定: 公共场所经营者应当组织从业人员每年进行健康检查，从业人员在取得有效健康合格证明后方可上岗。患有痢疾、伤寒等消化道传染病的人员，治愈前不得从事直接为顾客服务的工作。志贺菌属是病原菌，而柠檬酸菌属是人类和动物肠道的正常菌群。因此一定要结合形态染色、血清学试验和系统的生化反应作出最终的判断，尤其在从业人员带菌检查和饮用水等检验中要引起重视。