2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南海口571101
2. Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology, CATAS, Haikou, Hainan 571101
干旱胁迫是目前对作物生产力最具普遍影响的 环境胁迫,所造成的产量损失超过其它各种胁迫因 素造成损失的总和[1]。植物受到水分胁迫时会产生 活性氧,对细胞造成损伤。大量的研究实验表明, 植物体内广泛存在的抗氧化酶系统(超氧化物歧化 酶SOD、过氧化物酶POD、过氧化氢酶CAT 等) 能有效清除活性氧,保证细胞正常的生理功能,维 持其对干旱胁迫的抗性。有研究表明,耐旱植物在 逆境条件下能使保护酶活力维持在一个较高水平, 有利于清除自由基,降低膜脂过氧化水平,从而减 轻膜伤害程度[2]。
干旱条件下甘蔗的生理响应和抗旱性评价以及 甘蔗种质资源的抗旱性评价等方面已经有了大量的 研究[3, 4, 5, 6],但对从海南收集的甘蔗野生资源割手密 和斑茅的SOD、POD、CAT 活性的变化趋势及与 甘蔗的相关酶活性变化的比较等干旱胁迫研究还未 见报道。本研究通过测定分析水分胁迫不同时间割 手密、斑茅及对照甘蔗的SOD、POD、CAT 活性 的变化趋势,旨在讨论其膜伤害机理。 1 材料与方法 1.1 试验材料
供试材料为割手密和斑茅,2011 年8 月采自 海南省,均为本课题组收集保存的资源。 1.2 实验方法
供试材料于2012 年2 月在中国热带农业科学 院湛江实验站温室大棚内种植。将盆内装入质量均 匀的沙土,每盆种植3 个茎种(每个茎种至少含有1 个有效芽),每个材料种6 盆,正常供水。2012 年 6 月开始干旱胁迫,分别在干旱胁迫后的1、2、3、 4、5、6、7 天取样,测定SOD、POD、CAT 活性。 1.3 测定方法
SOD 活性测定采用氮蓝四唑法测定,POD 活 性采用愈创木酚法测定,CAT 活性采用紫外分光光 度法测定[7]。 1.4 数据分析
用EXCEL、SAS 等软件对数据进行分析。 2 结果与分析 2.1 干旱胁迫对割手密和斑茅SOD活性的影响
图1 为不同材料在干旱胁迫不同时间的SOD 变化趋势。割手密在干旱胁迫条件下,SOD 活性 表现为先升后降的变化趋势。在干旱胁迫6 天时, SOD 活性达到最大,为211.4 u/(gFW·min),之后 略有下降,说明,在干旱胁迫条件下,割手密有一 个自身适应调节阶段。随着胁迫时间的延长,膜脂 过氧化作用加强,膜透性增大,细胞受损伤。斑茅 的SOD 活性表现为升降升的变化趋势,即在干旱 胁迫初期(1~2 天),SOD 活性呈增加趋势,2~5 天期间,SOD 活性下降到66.0 U/(gFW·min)左右保 持稳定,5~7 天期间SOD 活性迅速提高。ROC22 在干旱胁迫条件下,SOD 活性的变化趋势与割手 密的刚好相反,表现为先将后升的变化趋势,即在 干旱胁迫1~6 天,SOD 活性表现为缓慢的下降趋 势,干旱胁迫6 天时,SOD 活性最小,为64.9 U/(gFW·min),随后SOD 活性迅速提高,达到117.4 U/(gFW·min)。其机理还有待于进一步的研究。综 合分析可知,割手密和斑茅的SOD 活性均高于 ROC22。
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图1 甘蔗、割手密和斑茅不同胁迫时间SOD 活性变化 |
POD 能催化过氧化氢及某些酚类的分解,有 助于缓解因干旱胁迫而造成的负氧离子和过氧化物 对细胞膜的伤害。图2 为干旱胁迫不同时间割手 密、斑茅和甘蔗ROC22 的POD 活性变化趋势。整 体来看,干旱胁迫条件下,割手密和斑茅的POD 活性显著高于ROC22,其中以斑茅的POD 活性最 高。由图2 还可以看出,随着干旱胁迫时间的延长, 割手密与ROC22 的POD 活性基本保持稳定。割手 密POD 活性整体趋势表现为上升,ROC22 的POD 活性整体趋势表现为下降,但变化幅度较小。干旱 胁迫条件下,斑茅的POD 活性波动幅度较大。
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图2 甘蔗、割手密和斑茅不同胁迫时间POD 活性变化 |
图3 反映了干旱胁迫条件下割手密和斑茅与对 照CAT 活性的变化趋势。割手密随着干旱胁迫 时间的延长,CAT 活性呈缓慢增加的趋势。斑茅 的CAT 活性则表现为先升高后降低的变化趋势, 即在干旱胁迫第3 天,CAT 活性达到最大,为57.5 0.01⊿OD/(gFW·min)。ROC22 的CAT 活性随着干 旱胁迫时间的延长表现为下降的变化趋势。干旱胁 迫1~6 天。ROC22 的CAT 活性明显高于割手密和 斑茅2 个材料,干旱胁迫7 天,2 材料的CAT 活性 均高于ROC22。
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图3 甘蔗、割手密和斑茅不同胁迫时间CAT 活性变化 |
甘蔗抗旱育种中,亲本选配很重要,亲本是否 带有抗旱性的优良基因,是成败的关键。因此,在 抗旱育种过程中要重视对亲本尤其是还未开发的野 生资源的抗旱性的评价,积极研究探索这些资源的 抗旱性,从而为今后利用优良抗旱亲本及亲本间的 配合力,选育抗旱性强的甘蔗品种提供依据。本研 究通过测定干旱胁迫下甘蔗、割手密和斑茅的抗氧 化系统相关酶活性,对这些材料的抗旱性进行了初 步的分析,从而提出了一些今后抗旱育种的策略。
水分胁迫下植物体内活性氧的积累是导致干旱 胁迫的主要原因之一。在正常生长情况下,植物细 胞内活性氧的产生和清除处于动态平衡,不会伤害 细胞,而多种逆境胁迫都引发细胞内活性氧的过量 生产、积累而打破平衡,活性氧导致膜过氧化和脱 脂化从而使细胞结构和功能都受到破坏[8]。植物对 胁迫的响应之一就是这些保护酶活性的变化,如小 麦[9]、玉米[10]、花生[11]、甜橙[12]等在干旱胁迫下均 表现出保护酶活性不同程度的增加。本实验结果表 明,干旱胁迫下割手密和斑茅的SOD 和POD 上升 的幅度比较大,表明此时的质膜相对透性上升的幅 度最小,细胞内容物外渗较少,细胞膜所受的损伤 较轻,表明在轻度、中度干旱胁迫下,较高活性的 保护酶系统能够有效地清除体内过多的活性氧,维 持活性氧产生与清除之间的动态平衡。由于试验结 束时仍处于中度胁迫,所以尚需进一步的试验来确 认这3 种材料的SOD、POD 活性在重度干旱胁迫 下的变化趋势。割手密和斑茅的CAT 活性低于甘 蔗CAT 活性,这是因为在生物体内O2-是通过SOD 歧化分解的,H2O2 是通过POD 和CAT 分解的,3 者协同作用,才能使自由基维持在一个低水平。割 手密和斑茅的POD 活性高了,所以CAT 活性相对 地低一些。进一步说明,在甘蔗中H2O2 分解CAT 起主要作用,而割手密和斑茅的H2O2 分解POD 起 主要作用。综合分析可知,割手密和斑茅的抗旱性 高于甘蔗ROC22。
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2013

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