甘蔗糖业  2011 Issue (6): 57-66   PDF    
甘蔗的生物炼制——蔗糖业生物工程的新技术和新产品
保国裕, 蓝艳华    
广州甘蔗糖业研究所广东省甘蔗改良与生物炼制重点实验室, 广东, 广州, 510316
摘要:制糖工业面临糖料种植面积增长困难、工农业生产成本增高和环境需求日益严格等趋势.同仁们已意识到光靠传统方法已不能满足人民生活发展的要求.生物技术则是解决资源短缺、环境污染的高效发展模式,成为人类持续发展的主要途径.本文从提高甘蔗资源生产高附加值产品和治理糖厂废液、废气变废为宝,减少污染出发,介绍生物工程的新技术可生产的产品如蔗多酚、活性蛋白肽、β-葡聚糖、右旋糖苷等并介绍酒精蒸馏废液培养固氮菌及低压回收CO2的利用.
关键词蔗多酚     麦角固醇     活性蛋白肽     β-葡聚糖     右旋糖苷     甘露醇     蔗糖多酯     固氨菌    
Sugarcane Biorefinery—New Products and New Technologies of Bio-engineering in Sugar Industry
BAO Guo-yu, LAN Yan-hua    
Guangzhou Sugarcane Industry Research Institute/Guangdong Key Lab of Sugarcane Improvement & Biorefinery, Guangzhou 510316
Abstract: Sugar industry is facing growing difficulties in increasing cultivation area,higher costs in agriculture,industrial production,and environmental requirements are increasingly stringent.People have gradually realized that traditional methods alone can't meet the requirements of the development of people's living.Biotechnology is an efficient development model to solve the shortage of resources and environmental pollution.It has become the main way to sustainable development of mankind.In this paper,through improving sugarcane production of high value-added products and waste management,turning waste into gas,reducing pollution,it introduces a new technology to produce bio-engineering products,such as sugarcane polyphenols,active peptides,β-gulcan,dextran,etc.,and describes the waste of alcohol distilling slop,and the application of CO2 from fermentation.
Key words: Cane polyphenols     Eigosterol     Active peptide     β-gulcan     Dextian     Mannitol     Sucrose polytoter     Nitrogen-fixing bacteria    

生物工程是解决资源短缺、环境污染的高效发 展模式。当前世界面临可耕土地减少,环境污染日 趋严重势态。同样,制糖业也面临着糖料种植面积 增长困难,农业、工业生产成本高,产品附加值和 利润率低,环境要求日益严格,劳动力缺乏等趋势, 人们意识到:光靠传统的方法已不能满足发展的要 求,生物技术已日渐成为人类持续发展的主要途径。

生物工程包括遗传工程、化学工程、基因工程、 微生物工程、酶工程、计算机信息和自动控制等学 术专业领域(内容主要包括生物能源、生物食品、 生物材料、生物环保、生物作物技术等)。生物工程 应用于农业、食品、化工、医药、保健和环境保护 等多个行业,是多个行业解决资源短缺,节能减排、 高效率、低成本能持续发展的先进和有效途径。在 医学方面的贡献,我国是世界第一个成功合成胰岛 素和核糖核酸的国家。近年生物工程技术已越来越 为科技界重视,成为21 世纪的前沿技术。甘蔗糖业 过去在生物技术方面已作出多项贡献[1,2]

在甘蔗种植方面正在进行甘蔗品种多样化,不 同地区的育种不断追求的共同目标是高产、高糖、 抗病性强,适应性广和宿根性好的品种,通过生物 技术不断改良现有品种和栽培技术,将使农民和企 业获更好的经济效益,使蔗糖产量居世界第三位[3]。 在微生物与发酵工程方面:广州甘蔗糖业研究 所与厦门大学合作通过基因重组和诱变选育出高活 性α-葡聚糖酶及高活性β-葡聚糖酶的菌种[4],以及 用葡聚糖单克隆抗体制备及其检测盒研制,能准确、 便捷、快速检测制糖过程滋生的葡聚糖(蔗饭)(一 种降低蔗糖产率和增加制糖工艺难度的不良杂菌), 为制糖业及食品工业带来显著的经济效益。如固定 化细胞的生物技术也已为白酒和酒精企业带来可观 的经济效益。据业内人士评价为酿酒业的一项技术 革命。

过去蔗糖只作为甜味和营养剂,现在通过转位 酶把蔗糖分子移位,生产出具调整胃肠功能的低聚 果糖和低聚半乳糖;把蔗渣生产出木糖和低聚木糖。 低聚糖是培养人体健康的益生菌的培养基,是当前 各国微生物领域中的研究热点。又如蛋白质与肽的 生物技术,使糖业界的糖蜜生产酵母产品,大有用 武之地,不但生产出多种核苷酸衍生物产品,为医 药作贡献,更为食品创新了第二、三代呈肉鲜味的 高档调味产品,提高了食品质量为人类提供了更可 口的食品享受。又如在一些酵母或真菌细胞壁中含 有降胆固醇提高免疫力的天然抗氧化剂——β-葡 聚糖,它在酵母细胞壁中约含30%。我国2008 年 产酵母4300 万t,则取出抽提物后有酵母细胞壁渣 45~50 t(约占酵母8%~10%),如把它利用上, 则是一大批食品与保健品资源,它在肠道对益生菌 有增殖作用,代谢后产生低碳脂肪酸,促进钙吸收。 在食品用途:可作脂肪代用品,肉类制品(如午餐 肉、香肠等)作添加剂;在化妆品中作护肤用品配 料。

传统蔗糖业的生物炼制(综合利用)多注意利 用蔗渣造纸和糖蜜生产酒精,但仅此也比单一产白 糖带来更多产值与利润。近代更通过先进的检测手 段,已发现甘蔗含更多的有利用价值的成分,加上 近代在微生物、生化工程等的新技术出现,有可能 把这些有用成分加以炼制,成为高附加值和社会需 要的产品。除了已在“蔗渣的生物炼制”文章介绍 的产品外,下面还分别介绍用蔗糖、糖蜜、酒精废 液通过生物工程技术生产的较高附加值产品。

1 甘蔗色素的保健功能

甘蔗色素主要成分有4 种[5]:即叶绿素、叶黄 素、胡萝卜素及花色素。蔗汁中的色素物虽不多, 约为蔗汁1%的,为有机非糖份的17%。但甘蔗集 中榨量大,每榨1000 t 甘蔗约有1 t 多的色素物,如 提取率只30%的话,也有0.3 t。一间日榨万吨蔗的 糖厂,可提取3 t。为此,可试探讨一下,这些对制 糖澄清不利的色素,如何加以利用,使它资源化, 以提高经济效益。

叶绿素、叶黄素、胡萝卜素通常存在于蔗叶、 蔗茎体细胞中的小原形质(PLASTICLE),蔗叶一 般含4%~6%。蔗茎的上述小原形质除部分残留于 蔗渣外,在蔗汁中绝大部分与蛋白一齐被凝固,而 集中在滤泥中,所以可以在滤泥中提取。叶绿素的 用途除了是理想的天然食用色素外,尚有医药与保 健功能,只医药就有20 多种成药用它或它的衍生物 作原料。胡萝卜素是众所周知维生素A 的前身。花 色素与前者不同,是可溶于水的色素,它属多酚类 化合物。澄清后尚有残留于蔗汁,影响糖浆以至糖 产品色泽。

甘蔗与一些食用植物如茶叶、竹叶、菊花叶、 莲藕等除了传统食物功能外,尚含有多酚类化合物, 甘蔗经压榨[6]、加热多酚类物质与铁形成绿褐色存 于蔗汁中,使糖液色泽加深,所以在制糖过程需要 除去这些多酚化合物。然而这些成份尚有部分随生 产流程存在于糖浆以至糖蜜,而以用糖蜜发酵酒精 后的粗蒸馏废液更为集中,可用大孔脱色树脂从糖 蜜或废液中吸附、收集这些多酚化合物。蔗多酚除 与茶多酚、类多酚化合物具有抗氧化、抗氧自由基、 增强免疫力和消除食物中丙烯酰胺毒性外,还具有 除臭功能。据最近报道:日本新三井制糖公司已开 发出蔗多酚作食品除臭剂,它不但具有抗氧化功能, 尚可使食品中不理想的味道消除,如生产蔬菜汁 (泥)时萝卜、芹菜等产生一股怪味,但添加蔗多 酚后即消除,成为清香菜汁;又如炒猪肝、煎鱼、 肉饼时有畜肉鱼肉的腥膻味,制骨胶原的动物材料 的腥味等添加蔗多酚后,可消除。还可改善柠檬香 精香料产生的苦味。在上述用途中仅添加很少量就 起作用,所以它为食品加工业提高质量、创造新风 味做出很大贡献。香料公司也利用它提高香料的质 量。蔗多酚还与从糖蜜中提取出来的“糖蜜风味剂 ——MSX——IMF”等相似,具有增香、除臭和保 鲜等功能。蔗多酚在全条甘蔗中,尤其在蔗梢生产 点部位,高于其余蔗茎。

蔗多酚的提取可采用色层分离法吸附。应用一 条活性AL2O3 柱,在柱的上层显出一条紫色带。此 带之下生成一条光亮的蓝带,洗涤吸附物,洗脱液 为多酚类物。笔者曾有专门文章介绍多酚类抗氧化 活性的保健功能,在这里也不用再介绍,剩下的叶 黄素在这里简单介绍。

叶黄素原名lutein 又名Xanthophylls,通常与叶 绿素紧密结合在一起,它的分子式为C40H56O2,叶 黄素同叶绿素一样不溶于水。

叶黄素的生理活性物特别引起世人重视的是: 预防老年性眼球视网膜黄斑退化引起的视力下降与 失明的特效药;另一个功能抗氧化活力,对预防结 肠癌、预防肌肉退化症,预防细胞衰老和机体器官 衰老有一定的作用。由于它无毒、无害、有预防衰 老的好效果,近年在美国市场十分畅销。美国南北 各地大量种植金盏花来提取叶黄素。由凯明公司首 先采用,随后有罗氏药物公司、德国一些药物公司 生产。并且一些外国公司还到我国东北、华北、西 北地区投资种植万寿菊和建厂生产叶黄素。甘肃省 武威筹建年产400 t 生产装置,青岛大学天然产物研 究所、青岛赛特香料公司、农业大学、北京大学、 上海交通大学等均分别以不同原料提取工艺研制系 列产品。如果能从甘蔗叶或滤泥中提取,则比专门 种植成本更低。

叶黄素的提取方法用甘蔗副料提取尚未见发 表。用万寿菊花粉提取叶黄素工艺为:用复合试剂 乙烷:丙酮:甲醇混合溶剂,浸取时间25 h。提取 率6.21 mg/g。天津科技大学以茶叶为原料用6 号溶 剂油,微波功率680 W,萃取时间30 s,液固比 (mL/g)=25:1,微波浸提2 次,此条件下的叶黄 素提取率为65.45%,叶黄素溶液的最大吸收波长是 447 μm。

叶黄素测定方法;1、薄层层析法,用石油醚; 丙酮=50:4 作为展开剂进行点样展开。2、紫外光 谱法:石油醚溶解叶黄素后,在400~500μm 范围 内用紫外可见分光光度仪扫描。3、红外光谱法:在 压片机上将KB1 固体颗粒压成小圆片,叶黄素纯化 液涂在小圆片上,放入红外光谱扫描。

2 糖蜜发酵高麦角固醇酵母生产麦角固醇及 维生素D2

麦角固醇英文ergosterol 是28 碳甾族化合物, 是生产维生素D2 的前体,也是生产甾体激素药物 的重要原料,如用于“可的松”,“激素黄体酮”的 生产。而维生素是人和动物生命活动中不可缺少的 重要物质之一;维生素D2(以下简写为VD2)在调 节生命代谢功能上有重要作用,能促进肠内钙磷的 吸收、促进骨质钙化;在临床上用于预防及治疗佝 偻病,骨软化症及甲状腺功能减低等。同时它亦是 营养保健食品(特别是儿童的食品添加剂)和强化 饲料的添加剂生产禽畜的复合饲料和全价饲料都需 添加,在国内外市场一直是紧缺畅销产品,故有广 阔市场。

维生素D2 又名麦角钙化固醇英文Calciferol 中 文又称骨化醇(C28H44O)分子量396.66,为无色针 状结晶,遇光或空气容易变质,在水中不溶,溶于 氯仿、乙醇、丙酮、乙醚,熔点115~118℃同时分 解。麦角固醇存在于酵母、青霉、黑曲霉等真菌的 菌丝体中,而以酵母含量为高;因此,目前麦角固 醇的生产主要采用微生物发醇,所用菌种大多为酵 母菌。由于麦角固醇为胞内产物,其含量随菌种和 培养条件的不同而不同,因而生产过程控制应当以 高生物量和高含量相统一为目标。用糖蜜或纯度稍 高的糖液为原料发酵含高麦角固醇酵母,关键技术 一是选用高含量麦角固醇的酵母菌株,如中科院北 京微生物研究所的YG605、云南勐永药业公司保存 的Y-7,属啤酒酵母;二是生产工艺除了培养基与 发酵温度、通气量等工艺外,注意的是培养基(发 酵醪液)的生物量(主要如糖浓度)与转化为麦角 固醇虽然是成正比例的关系,但糖浓度过高时,发 酵过程又会生成乙醇过高而抑制酵母的生长繁殖, 故需要既产乙醇少又产麦角固醇高的适宜浓度与通 风量。其余工艺操作与药用酵母大致相同。陕西长 安大学研究的发酵适宜条件为温度28℃ pH6;接种 量8%,麦角固醇产率为19.95 mg/100mL。在发酵 工序要求获得含麦角固醇超过2%的干酵母粉提供 下工序提取和光照、开环、精制才有好的经济效益。

以糖蜜为原料出发可以产出2 种产品,一是高 含麦角固醇的酵母粉,产品质量标准为:水分≤7%; 粉细度:80 目筛95%以上通过;色泽:淡黄色或淡 黄棕色;总固醇含量≥3%;麦角固醇含量≥2%。 二是从酵母提取麦角固醇再生产维生素D2。按四川 茂市糖厂采用的方法如下:流程分两步:每一步由 于酵母粉用液碱和食盐皂化,再用甲苯抽提,过滤, 滤渣再用甲苯多次洗涤,滤液减压浓缩,加乙醇絮 凝、过滤,再用甲苯,乙醇洗涤精制,真空干燥为 麦角固醇中间制品,要求熔点为157~164℃才符合 下工序要求。第二步从麦角固醇制维生素D2;用乙 醇溶解麦角固醇,用1000 kW 紫外光灯照射,波长 约260~310μm,使麦角固醇开环,再用苯层析, 加3,5-二硝基苯甲酰氯酯化变成粗酯,经过过滤、 精制、活性炭脱色、过滤、真空干燥后为成品维生 素D2。产品包装要注意能避光和真空、冷冻贮存, 否则效价降低。

产率和主要原材料消耗,一般第一步麦角固醇 的提取率为酵母含总固醇的50~55%,而第二步维 生素D2 的产率为麦角固醇的25%左右,如以酵母 含总固醇2%计,每千克麦角固醇耗酵母100 kg, 每千克维生素D2 耗酵母400 kg。每千克维生素D2 耗其他材料:甲苯600 kg,乙醇400~500 kg,丙酮 40~60 kg,苯100~150 kg,食盐150~200 kg。四 川茂市糖厂1983 年正式批量定点生产维生素D2, 当时规模为日产1 kg 左右,产品有2 种麦角固醇和 VD2,麦角固醇销给制药厂作药物原料。维生素D2 价格1985 年国家定价为每千克1 万元,近年已升价 多倍,属高附加值产品。又据长安大学环科学院对 从酵母提取麦角固醇的研究结果;采用乙酸酐显色 法进行萃取时对萃取溶剂的优选认为以丙酮为优选 萃取剂,最佳固液比(菌体重量与丙酮容积比)为 1:25。

鉴于从酵母提取麦角固醇需经皂化,溶剂抽提、 洗滤等多道工序,耗溶剂较多,影响生产成本,故 关键技术是提高酵母产品的麦角固醇,途径一是通 过基因改造。构建高麦角固醇含量的酵母菌株;二 是从工艺上更进一步优化提高麦角固醇产率。近年 我国江苏江安制药厂,云南晶莹糖业公司勐永药业 公司、湛江五洲药厂等均在生产工艺上作了深入研 究,期望今后在菌株筛选方面下功夫,获取麦角固 醇含量高于2%的酵母菌株,便可取得更好的经济 效益。

3 酵母酶解衍生的生物活性蛋白肽[7]

蛋白肽是什么?蛋白肽是蛋白质的水解中间产 物;即蛋白质经化学剂或酶降解成蛋白质结构的片 段;由于蛋白质降解物为氨基酸,而未完全降解蛋 白质片段也是氨基酸的低聚物,故又称低聚氨基酸 或多肽,相似于碳水化合物不完全降解称为低聚糖 或寡糖的命名。

活性蛋白肽及其功能——蛋白质大部分是由 20 多种氨基酸组成, 科学家定义“ 多肽” (polypeptide)为由50 个上下的氨基酸组成的短链 片段称为多肽。现代营养学研究发现:蛋白质经消 化道酶的作用后,并不是完全以游离氨基酸的形式 被吸收,而是主要以短链的形式被吸收,并且以短 链的吸收比游离氨基酸的吸收更迅速;研究发现蛋 白质与“多肽”虽化学成份区别不大,但蛋白质肽 的分子小得多,而那些结构相对简单的小分子多肽 物质却在生物活性方面能发挥非常重要的生理作 用;并发现不同氨基酸,不同组成结构,不同分子 量(链的长短)的多肽,起着对生理不同的活性功 能。而通过应用不同功能的蛋白酶控制一定酶解条 件进行一定的水解度于动物、植物、微生物蛋白, 便可获得品种繁多不同功能的活性功能肽。例如目 前从种种食物蛋白的不同酶解产物中,已分离鉴定 出阿糖肽、免疾调节肽、抗菌肽、抗血栓肽、矿物 元素吸收促进肽和降胆固醇肽、胸腺肽、镇痛肽等。 从酵母蛋白降解分离提取的功能活性肽,目前已开 发了具有抑制血管紧张转化酶(ACE)而降血压功 能的活性肽(ACE 抑制肽)和具生理抗氧化保护细 胞膜免遭氧自由基破坏和稳定细胞膜作用防衰老的 谷胱甘肽;以及酵母采用“加酶限定水解法”生产, 具营养吸收性良好及呈鲜味功能的高肽酵母精等。

生产活性肽的关键技术之一是选用适宜的蛋白 分解酶,大体分为末端型和外围型两大型,根据所 需氨基酸链结构而选用;末端型酶可切断构成蛋白 质任意位置上氨基酸的链接;外围型只能由末端位 开始切断链接,末端型蛋白质酶又根据基反应最适 pH 不同形式和活性中心氨基酸残基不同再分为碱 性、中性、酸性蛋白酶和异蛋白酶。下面介绍用碱 性蛋白酶(Alcalase)酶解酵母制备酵母蛋白肽的工 艺条件:pH8.7、温度50.8℃、酶用量0.17%(以酵 母质量计)、酶解时间24 h。在此条件作用下,总氮 得率为50.17%,氨基态氮得率为32.80%。

多肽物质相对分子量的检测技术目前采用的主 要有如下3 法:

(1)凝胶过滤层析技术,也称分子排阻析或凝 胶渗透技术。原理是利用凝胶过滤可以把蛋白质多 肽类混合物按分子量的大小层析分离出来,一般采 用交联葡聚糖为基质。

(2)SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术。在聚丙烯 酰胺凝胶电泳系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺 酸钠(SDS)和少量疏基乙醇,蛋白质多肽类混合 物的电泳迁移率将主要取决于它们的分子量。

(3)高效凝胶排阻色谱(HPSEC)技术,原 理是基于分子筛与高速流动的流动相的层析分离方 法。该技术快速、灵敏、高效。

4 从酵母可提取增强免疫的β(1,3)— 萄 聚糖

最近在北京召开的“第三层中国营养产业高层 论坛”上,英国Biothera 公司介绍该公司出品的一 种生物制剂,全称是WGP3-6 酵母葡聚糖,是从面 包酵母菌株中提取的产品。据称,这个产品是经过 临床试验证明能增强免疫和免疫反应调节,已经在 全球30 余个国家应用,于80 多种食品里添加,每 天吃一颗250 mg 的β-葡聚糖胶囊能使人体免疫系 统保持较高水平,受病菌或病毒侵袭的机会降低。 该产品从面包酵母菌株为出发原料,将酵母外面的 细胞壁多糖与细胞内容物分离后,经过纯化后为葡 聚糖。含β-葡聚糖80%以上。

葡聚糖是由许多葡萄糖分子去掉水分子缩聚的 构成物,统称葡萄糖的聚合物,简称葡聚糖。在自 然界存在的物种很多,因为缩聚的分子结构,连接 的甙键位置不同、糖甙键不同的羟基间形成,又可 能是直链或支链等,不同缩聚方式其功能亦各异, 例如常见的淀粉、纤维素、黄原胶、右旋糖酐、蔗 饭等。就缩少范围至β-葡聚糖这个名称。不同来源 提取的β-葡聚糖,其分子结构也不一样,功能从而 也有异。如从磨菇、燕麦提取的β-葡聚糖其结构是 线状没侧链;功能是调整肠胃低热量的膳食纤维, 但自酵母提取的β-葡聚糖则是中空球状,圆形颗粒 直径2~4μm,功能是增强免疫和调节免疫反应; 具刺激先天和后天免疫。例如口服的酵母葡聚糖进 入人体通过小肠被淋巴结的巨噬细胞吸收、消化、 分解,与嗜中性粒细胞上的受体结合后就具有去除 内毒素污染,能有效治疗炭疽热病、流行性感冒; 与抗菌素药物同服可增加抵抗细菌的感染;可加强 造血功能;缩短放疗病人骨髓复原时间,激活人体 自身的免疫力等。

低含量的酵母β-葡聚糖又是食品添加剂,具高 度的持水性和低热值,在食品中制香肠、午餐肉、 火腿等的脂肪和淀粉代替品,作用是可减少脂肪而 又能保持肉制品的柔软和脂肪的“肥”口感;代替 淀粉可解决淀粉渗入后会失去肉质的弹性使肉制品 质地增硬,口感黏糊,从而提高其爽度、弹性、胶 黏性、咀嚼性等,添加量约为4%,故是一种理想 的肉制品填充剂。

从酵母提取物的β-葡聚糖还可制成β-葡聚糖 纤维降胆固醇保健品。美国科学家做动物试验结果 表明:用酵母提取物比燕麦麸提取的β-葡聚糖降低 总胆固醇效果显著。

从酵母提取物的β-葡聚糖过程,分离出来的蛋 白质可衍生“肽”的系列产品;又分离出来的核酸 可进一步降解衍生系列单核苷酸呈鲜味剂和抗病毒 药品,还有分离出来的脂类可衍生维生素D、辅酶 Q、卵磷脂等高附加值产品。

5 无活性的酵母(死酵母)是重金属污染废 水的良好吸附剂

在工业废水治理专业中,重金属污染的工业废 水已成为威胁全球生态系统的严重问题,例如铅、 镍、铬、镉、汞等重金属离子毒性大对人体健康产 生极大危害。传统治理方法用化学沉淀、离子交换、 膜分离、蒸发和电化学等方法处理,但这些方法耗 能高、效率低、带来成本高的存在问题。近年来国 内外学者致力于生物方法,选用不同的生物吸附剂, 吸附废水中重金属离子,研究结果认为灭活(死体) 的微生物菌体具有较好的吸附效果。在制糖业中糖 蜜发酵酒精大量酵母繁殖,粗蒸馏塔下排出的酒精 废液含酵母死体,把它回收便是良好的重金属污水 吸附剂。由西南科技大学最近发表的研究报告表明: 用灭活的面包酵母(125℃,20 s)在pH 4~5.5 酵 母菌浓度4 g/L,酵母吸附铅溶液的吸附量见表1。

表1 酵母吸附铅溶液的吸附量

用LED S440 型扫描电子显微镜/X 射线能谱联 用仪分析发现P62+被吸附在酵母菌表面,与细胞壁 上有机物结合后,以颗粒物形成附在细胞表面,并 随着溶液中P62+初始浓度的增加而增多。研究结果 表明:灭活酵母是一种快速、高效的Pb 生物吸附剂。

制糖工业用糖蜜为原料生产的食用酵母及酒精 废液分离的酵母以及用酒精废液又可以生产的饲料 酵母经干燥后均属灭活酵母,其酵母表皮的细胞壁 带负电荷,正好是重金属带正电荷的吸附剂。利用 此原理可代替高成本又耗能高的离子交换、膜分离法等方法除重金属污染。值得在制糖业进行研发。

6 蔗糖微生物转化生产人造血浆——右旋糖 苷[8]

蔗糖产品纯度高达99%以上,用它为碳源作微 生物转化的高精药用、食用产品的原料,具有杂质 少、易于提纯等优点,通常右旋糖苷、葡萄糖酸、 黄原胶、苹果酸、衣康酸等高值产品采用它为原料。

6.1 右旋糖苷简介

以蔗糖为原料的生化产品中,以生产医药用的 代血浆-右旋糖苷(Dextran)和黄原胶(又称汉生胶 Xantham Gum)较著名。右旋糖苷是右旋葡萄糖聚 合物,又称葡聚糖或右旋糖酐,其反应式如下:

右旋糖苷主要用于医药,故是高附加值产品。 不同相对分子量的右旋糖苷在医药上的治疗作用也 不同,药品级分低、中、小分子右旋糖苷。低分子 右旋糖苷主要作用是改善血管微循环,有一定的扩 充血容量作用,可预防血栓形成,可降低血液中胆 固醇并具有一定解毒作用。中分子右旋糖苷又称代 血浆,它主要作用是治疗失血性休克、增加血容量, 代替部分血液。医药常用的低分子右旋糖苷平均相 对分子质量约为4 万(商品名Dextran 40);中分子 右旋糖苷平均相对分子质量约为7 万(商品名 Dextran 70);小分子右旋糖苷平均相对分子质量约 为1 万(商品名Dextran 10)。右旋糖苷注射液供静 脉输注射,在体内会降解变为葡萄糖而进行正常代 谢,使用上是十分安全可靠。

6.2 制造方法
6.2.1 菌种和发酵

菌种采用肠膜状明串珠菌L,例如LM-1226 号, 经试管、小口瓶、大口瓶、种母罐无菌纯粹逐级扩 大培养。培养基配比为蔗糖100 g、蛋白胨或酵母浸 羔2.5 g、K2HPO4 5 g、M8SO4·7H2O 0.2 g, (NH4)2 SO4 0.6 g,培养温度20~25℃,pH7~7.2。 发酵是在12.5%蔗糖液中,加上述营养物和维生素 类物质,在连续杀菌器灭菌后进发酵罐冷却至23℃, 放入菌种,在23~24℃、pH7 的条件下培养,发酵 期间pH 值会逐渐下降,pH 降至5.2 时葡萄糖聚合 酶最活跃,pH 值降至4 时即成熟。

6.2.2 提取
6.2.2.1 沉淀法

发酵成熟的右旋糖苷液,是粘稠状,放置沉淀 槽,在搅拌情况下加入浓酒精,酒精与右旋糖苷反 应凝结生成絮状沉淀,分离出醪液,剩下沉淀为右 旋糖苷,用酒精洗涤多次,过滤、固体物为右旋糖 苷。从醪液及洗液中可回收酒精及果糖。

6.2.2.2 膜和色层分离法

鉴于沉淀法耗用酒精量较多(吨产品耗5 t 左 右),增加生产成本,且需添加酒精回收蒸馏塔及操 作;现代膜及色层分离技术正适合于高附加值产品 应用,优点除了能减少酒精消耗并提高回收率外, 还可以在膜选择和层析过程较准确地控制产品所需 要的相对分子量,减少后工序“水解划分”,使用酸、 碱的工序,不同膜孔径分离出来的溶液便可分别直 接干燥,分别制成中、低分子的产品。

6.2.3 高分子右旋糖苷的降解划分方法
6.2.3.1 化学法

沉淀法得出的固体右旋糖苷可用相当固体含量 0.1%盐酸,加热水解至粘度为3 左右,达到低分子 右旋糖苷要求的分子量,然后加碱中和,过滤,清 液用离子交换树脂净化、干燥、包装即为粉剂产品。 沉淀法除用水解法划分相对分子质量外,还可用不 同浓度的酒精分别沉淀,来划分不同相对分子质量 的右旋糖苷沉淀物。

6.2.3.2 酶法水解

酸碱或膜、色层法分别为化学、物理方法水解 划分需要的相对分子质量,前者需用酸、碱、酒精 耗费原材料,且要废水治理;后者操作及投资稍多。 采用酶法优点是利用专一酶有针对性的降解,可调 整酶量或酶解时间,温度等工艺条件来准确地控制 其降解程度,达到不用添加化学品获得需要的产品, 废水污染减少。广州甘蔗糖业研究所已成功用自行 诱变选育的α-葡聚糖酶菌株产生的酶,进行酶法降 解划分相对分子量,比化学法提高质量和产率。

葡聚糖的结构有多种用肠膜状明串珠菌聚合的 葡聚糖,它的结构主要是α-1,6 键联,α-1,4 或 α-1,3 等链联的异构物,故降解时选用α型的葡聚 糖酶,就可以顺利降解,α-葡聚糖与甘蔗汁常遇到 的“蔗饭”同属类型,可与甘蔗糖厂共用。广州甘 蔗糖业研究所生物炼制中心已研发了这类酶种。

测定划分的不同相对分子质量的方法,有用粘 度法或在一个分析色谱仪利用凝胶渗透装置中操作 的2 根PW 5000 和1 根PW 3000 TSK 柱子(日本 TOYA SOCLA)完成。

7 蔗糖生产维生素C 和甘露醇

维生素C(vitamin C),别名:抗坏血酸、Aseorbie aeid;分子式:C6H8O6;分子量:176.13。是一种水 溶性维生素。无色晶体,无臭有酸味。存在于新鲜 蔬菜和某些水果中。熔点190~192℃(分解)。溶 于水和乙醇。

维生素C 能参加人体的某些代谢作用,对生物 氧化有重要作用,可增强机体抗病力和解毒作用等。 用于治疗维生素C 缺乏引起的病症如坏血病等。维 生素C 的主要来源是新鲜水果和蔬菜。当人体需要 的剂量无法靠天然食品补充时,就需要补充人工生 产的维生素C。

用蔗糖为原料生产维生素C 的优点是原料纯度 高、价廉、来源广,并且可以同时生产系列产品如 甘露糖醇、果糖、山梨醇。企业可以依市场需求调 整产品品种和产量。

蔗糖生产维生素C 的流程与原理如下:

蔗糖是由葡萄糖与果糖组合的双糖,经用酶或 者酸转化生成葡萄糖与果糖。在近代分离技术发展 的条件下可以用结晶法或色层分离法把葡萄糖与果 糖分开,其中,色层法可以分离到纯度97%以上的 两种单糖。果糖加氢氧化、净化后为甘露醇;葡萄 糖氢化、净化后为山梨醇, 反应式为: C12H22O11+H2O=C6H12O6+C6H12O6

甘露醇为高值产品,它在医学上用于治疗肾功 能衰竭、脑积水、降低颅内压等。在食品工业上可 用于糖尿病人、肥胖人群的甜味剂。

山梨醇除广泛用于食品、日用品、纺织、烟草、 造纸等多个行业外,还较多地用于在化工上替代甘 油作高档油漆醇酸清漆及维生素C 原料。

用纯度97%的山梨醇为原料,经第一步用黑醋 菌发酵,第二步用巨大芽孢杆菌和葡萄糖杆菌混合 菌发酵,边发酵边加碱,转化为古龙酸钠,后经提 取转化为α-酮基古龙酸再转化为维生素C。

维生素C 的用途早已超出医药,扩展到保健食 品、饮料、饲料及化妆品等领域。世界产量10 万t/ 年以上。据资料统计,美国人均消费量为90 g/ 人·年,全世界人均消费量为35 g/人·年,我国只 有1.5 g/人·年。随着人民生活水平的提高、医疗卫 生事业的发展,国内潜在着巨大的市场,同时国际 市场的潜力也非常巨大。

8 蔗糖多酯(SPE)——零热量零脂肪但能保 持食品风味的脂肪替代品[8]

最近由中国营养学会营养与保健食品分会主办 一个专业的“蔗糖聚(多)酯功能与应用研讨会” 获悉,中国卫生部已于2010 年11 月批准蔗糖聚酯 (以下简写SPE)为我国“新资源食品”,成为我国 唯一批准零脂肪零热量的天然脂肪替代品。上海丰 益生物技术研发中心有限公司已在应用上研究,用 25%的普通食用植物油与70%的SPE 调和制成起酥 油,制蛋糕、饼干及其他烘焙食品与传统纯用植物 油的质量一样,如直接用于煎炸油则表现更优于普 通煎炸油。为此,被广大食品和营养保健人士认为: SPE 的推广应用解决了当今生活水平提高后人们担 心“三高”(血压、血脂、血糖)快速增长的形势下, 在降低脂肪和热量的同时又能保持食品的风味口感 和饱腹感等的难题;预计市场的需要量随生活提高 而增长,前景乐观。

SPE 全称Sucrose Poly Ester 蔗糖多酯,商品 名Olester,是用蔗糖与中长链脂肪酸反应生成的, 蔗糖分子有8个可被置换的羟基,若有6~8个羟 基被脂肪酸酯化(即酯化度为Ω=6~8)便称为 SPE。当蔗糖与不饱和脂肪酯化时,产品为液体油 状;当蔗糖与饱和脂肪酯化时,产品则为半固体状 像人造黄油一样,口感与植物油、人造黄油一样无 异味,日本三菱化成公司广泛用SPE 于制巧克力, 配汤料、肉汁、酱料、牛奶、糕饼等,用其作面包 涂布料代替人造黄油。SPE 除用于代油脂外,还用 于保健品,据1978 年美国第51 届心脏病学会已提 出用SPE 降低总胆固醇的临床报告,证实SPE 是一 种高效率的降胆固醇药品,原来在消化道中胆固醇 的吸收过程需要脂肪的参与,形成乳化的分子聚集 体,附着于肠道表面,与脂肪分子一道被吸收,但 SPE 并非脂肪,在代谢过程不易被肠道中的酶分解, 使溶于其中的胆固醇没有进行上述过程而不会被吸 收,反而更被SPE 携带出体外。临床报告并表明SPE 可使血液中引起动脉硬化的低密度胆固醇和甘油三 酯含量降低20%,而使有益的高密度胆固醇含量略 微提高,从而减少心脏病危险。

SPE 的制造方法和检验方法参考“甘蔗糖厂综 合利用”[8]

9 蔗糖作复配果蔬保鲜剂

浓度高的蔗糖是好的防腐剂,我国自古已用于 对水果、肉类防腐。下面介绍用蔗糖为主的复配防 腐剂。

9.1 蔗糖全能保鲜剂

这是美国专利,是功能齐全的保鲜液,其配制 方法是:蔗糖配成30%~40%,加入0.3%以下苯 甲酸钠或抗坏血酸,加入0.03%的磷酸氢钙,充分 混和后,用浓度3%的柠檬酸或浓度75%~80%的 食用级磷酸将混和液调节至pH 3.5。该保鲜液不但 能防止水果褪色、抑制细菌繁殖,且能防止水果皱 缩、破裂、保持果肉质地不变。

9.2 可食保鲜剂

这是美国食品协会研制成的一种可以食用的水 果保鲜剂。它是由蔗糖、淀粉、脂肪酸和聚酯物(如 蔗糖酯等)调配成的半透明的胶状生化液。这种液 要用喷雾或涂刷等方法涂于柑橘、苹果、西瓜、香 蕉、番茄等果蔬表面使形成一种半渗透膜。半渗透 膜可起到阻断氧气进入又防止二氧化碳排出,从而 延长水果的熟化过程,据称可使果蔬保鲜200 天以 上。

10 糖蜜酒精蒸馏废液厌氧发酵产氢[9]

能源危机和环境污染是目前人类正面临的两个 巨大挑战。利用酒精蒸馏废液为原料发酵生产清洁、 高效、可再生的氢氧新能源,正是针对能源开发、 治理污染等一举多得的举措。

氢是一种能源载体,自然界没有可作为燃料存 在的氢气,必须用某种一次能源生产。传统制氢方 法有:水电解法、水煤气转化法、甲烷裂解法等, 这些物理化学方法均需要消耗大量的能量、消耗大 量化石能源或水电的同时,还会带来严重的环境污 染,因此是与可持续发展相违背的,然而用生物法 制氢可以在常温常压下进行,消耗能量大幅减少, 同时原料是取之不尽的再生能源。因此是近代研究 的方向。

生物法制氢气在近20 年研究过程也进行过两 种方法:一种是利用藻类、光合细菌等具有光合系 统PSI 和PSII 含光合色素,需要在光照下的光生物 产氢。另一种为厌氧发酵细菌,不需要光照,可以 直接利用有机废液中的糖、蛋白质等有机物,并且 如以碳水化合物为主的底物发酵,产氢速度快,产 率高。因此,若以酒精蒸馏废液作为原料发酵产氢, 宜选用厌氧发酵细菌法。

发酵细菌法与光合微生物法比较,发酵细菌产 氢的主要优点有:

(1)不需要光照,可以在白天和夜晚连续进行 发酵(光合微生物法因存在蓝绿藻对太阳能的转化 率尚低,产氢代谢过程的稳定性差,成本高等问题)。

(2)发酵细菌能利用的底物较多,除通常的糖 类化合物外,甚至固体有机废弃物和高浓度有机废 水和各种含糖的酒精或酵母废液均可作原料,既获 得氢能源又治理了废液,降低BOD 和COD 值。

(3)发酵速度比光合微生物快几倍,甚至几十 倍。

(4)发酵细菌大多数属于异养型的兼性厌氧菌 群,产氢过程对pH、温度、氧气等环境条件适应性 较强。

(5)反应器(装置)类型比较多和简单、投资 较省。

基于上述优点,近10 年来采用发酵细菌法的酸 化过程产氢逐渐成为生物制氢研究的热点。

能利用有机物在厌氧发酵过程产生氢的细菌, 大约有18 个属,50 多种。据文献报道,研究得比 较多的几大类细菌主要有梭状芽孢杆菌(丁酸发酵 菌)、大肠肝菌和产气肠杆菌等。发酵细菌可以利用 的废物(原料)主要是碳水化合物是氢气最主要的 来源,而蛋白质和脂肪产氢率较低,较难被细菌利 用。以糖类为原料其发酵过程产氢步骤如下:①葡 萄糖经过糖酵解途径生成丙酮酸、ATP 和NAD 氢; ②丙酮酸通过丙酮酸铁氧化还原蛋白酶被氧化成乙 酰辅酶A、CO2 和还原性铁氧化还原蛋白;③还原 性铁氧化还原蛋白在氢化酶和质子的作用下生成氢 气。在产氢过程中氢化酶起着关键作用。

据文献报道:以葡萄糖为原料,用经驯化的混 合产氢细菌,当pH6、温度35℃、氢RT8.5,有机 负荷27.02 g/(L.d)时,发酵1 mol 葡萄糖可产生 0.85 mol 氢气,其中氢气含量为53.4%。又当通入 氮气(通氮量为氢气产量的15 倍)发酵,则发酵1 mol 葡萄糖可产生1.44 mol 氢气,试验表明液相中 氢气的分压是影响氢气产率的一个重要因素,并说 明糖蜜等含糖原料可通过产氢细菌厌气发酵获得, 不需要光照等复杂装置。产氢细菌的获得,有学者 以经105℃热处理的土壤,能耐热生存的细菌经分 离驯化,用糖蜜为原料在pH6.4,温度26℃发酵, 结果1 g COD 的蔗糖产氢气131 mL,1 g COD,糖 蜜产氢气134 mL。

11 酒精发酵废气用低压法回收CO2 的发展趋 势[10]

酒精发酵每投入100 份糖,理论计算产酒精51 份,同时排出49 份CO2。按此标准每产1 t 酒精, 排放CO2 956 kg,而按国内工厂报道实际最高回收 量为485 kg(1988 上海)。CO2 是温室气体中对全球 变暖影响最大的气休(其他温室气体为甲烷、一氧 化二氮、氢氟碳化物、全氟化碳和六氟化硫),所以 全球签订的“限制或减少温室气体(GHG)的排放 量以CO2 计算,“E”是表示全球变暖可能性的变量。 并以“低碳”名词代表减排的含义。哥本哈根会议 后,提出“碳汇这个名词是提出减排的措施之一, 即企业排出的CO2 量用金额计算缴交费用把算出应 缴金额汇到指定种植森林地区,作发展森林减排的 投资。按此我国今后以排放CO2 收费的可能性势在 必行。据报道河南省一家企业已与瑞典公司签订减 排技术合同,其中承诺企业为每减排1 t CO2 就付 10 美元 。可见减排CO2 的资源化治理的迫切性。

CO2 的用途很广,以前已有文章介绍,在我国 其用量多为饮料、冷冻、焊接、消防、化工等,然 而由于以上用途的贮存、运输都采用高压法,需经 三级或四级压缩,终压6~8MPa,产品需用钢瓶贮 运,钢瓶沉重搬运出回收进厂的高强度劳动以及钢 瓶的投资等,使生产成本增大,成为限制了CO2 大 生产、大消费的因素。

上世纪70 年代德国的Linde 公司已开发了低压 法回收CO2,只需两级压缩,终压只1.6 MPa,然后 用F-12 冷冻机使CO2 在低温下液化。据报道高压与 低压二法耗能基本相同。低压法虽一次性投资较高 些,但压缩机易损件寿命比高压法长,产品的冷量 大,可用大罐贮存,用槽车运输,在回收生产时可 免去频繁的换瓶笨重劳动,在搬运时可大幅减少运 费,因此,如果将制冷和贮运所消耗的能量也考虑 在内,则低压法能耗低的结论就成立了。显然,从 生产到消费的全过程中低压法具有明显的优势。 自1993 年后山东、河南、北京等酒精厂已改用 了低压法回收生产CO2,并加强了对气体的净化, 采用保温大罐贮运等取得了显著收益,一台重约10 t 的保温槽车可贮运CO2 20 t,倘使用钢瓶时就要600 个,其重约40 t。因此同业者已认为低压法是大量 生产CO2 的发展趋势。

随着低压液体CO2 生产发展,建设大棚CO2 气 肥利用装置,使作物增产,在我国已逐步扩大。植 物生长的光合作用将CO2 转化为生物质能碳水化合 物等,增加农作物环境中CO2 的含量。据实践结果, CO2 的存量从万分之三体积增加到万分之八时;可 使植物叶子和茎的生长速度提高50%~300%;水 果的开花和成熟时间可提前10%~25%;鲜花提前 一至两周开放,番茄产量增加近300%。又据中国 科学院北京植物研究所立项《CO2 施肥初步研究》 表明,施CO2 气肥后四川榨菜增产15%,芹菜增产 56%,黄瓜增产46.6%,平均增产幅度达30%以上。 另一试验黄瓜,从定植(从苗床移至大田)后的15 天内进行CO2 施肥0.1%,结果提早开花5 天,提早 上市10 天,增产87.4%。该研究项目总结认为增产 主要原因有三:①是CO2 浓度增加,缓解了“最小 因子”的限制作用,从而加快了光合作用,为有机 物质的积累奠定了基础;②是叶片增厚,干物质多 了;③是有机物质积累增快,故单位面积生产效率 提高。为此把CO2 称为“气肥”。

随着采用低压加收生产液体CO2,为农作物增 产和减排提供有利条件。近年已有企业生产回收及 建大棚设备,上海浦东CO2 成套设备公司报价:建 设3~5 kt/ CO2 气肥装置,设备投资在20 万元左右, 并称年利润可达百万元。气肥在欧美工业发达国家 已较多应用,是增产减排的好措施。

12 糖厂废水用固氮菌既减污又增氮肥

台湾糖业公司从蔗田土壤中分离出一种非共生 异养固定大气氮的菌株Azoto bacter sp。可以利用废 水中的BOD5(生化需氧量即有机物)物质作为碳 源和能源菌体边繁殖边固定大气中的氮,不但使废 水及污泥氮含量增加,用处理后的废水到土壤中因 含大量固氮菌还继续为作物起固氮作用而节约氮 肥;由于废水的有机物被固氮菌利用而减少了污染 的有机物,据报道在230 m3 规模的曝气池用该固氮 菌处理糖厂废水,BOD5 除去率为83.32%,85%和 95%。

参考文献
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[10]沈之申.酒精厂二氧化碳增产途径//酒精生产技术的回顾与探讨[M]. 北京:轻工业出版社,2000:238. (1)
(本篇责任编校:朱涤荃)
甘蔗的生物炼制——蔗糖业生物工程的新技术和新产品
保国裕, 蓝艳华