2011
杀虫剂的生物测定(Bioassay)是研究作用物(杀 虫剂)、靶标生物和反应强度三者关系的一项专门 技术，它是利用靶标生物(害虫)对农药的反应来鉴 别某种化合物生物活性的基本方法。生物测定是一 项很重要的实用技术，被广泛应用于农药的研制、 开发和应用等各方面，对于新农药筛选和开发具有 重要意义。生物测定也是农药抗药性研究及治理以 及杀虫剂混用联合作用机理研究的重要手段，该方 法有时甚至比其他测定方法更为灵敏和更专一。作 者通过生物测定手段，对涉及的16 种药剂进行了 室内毒力测定，试图通过测定提供的药剂对黑色蔗 龟的生物活性数据，寻找能够开发作为甘蔗地下害 虫防治的药剂或用作混配单体的药剂，为高毒农药 的替代研究提供理论依据。
75.1％甲基异柳磷原油，97.0％克百威原粉， 86.7％辛硫磷原油，92.3％甲拌磷原油，97.3％毒 死蜱原药晶体，97.1％乐果原粉，95.0％二嗪磷原 油，94.3％嘧啶磷原油，90.0％敌百虫晶体，97.5％ 特丁硫磷原油，98.3％地虫硫磷原油，95.3％丁硫 克百威原药，98.2％西维因原粉，98.0％杀虫单原 粉，97.5％氰戊菊酯原油，98.5％氯氰菊酯原粉。
黑色蔗龟Alissonotum impressicolle Arrow 幼 虫：采自广东省珠海市平沙农场蔗地。采回的幼虫 在室内2.6±1℃恒温条件下，用土培养稳定2～3 天，挑选生活力强，体重相近，生长一致的3 龄幼 虫作为生物测定的虫源。
采用微量点滴法，参照龚恒亮等(1992)方法[1]。 药剂用丙酮稀释，制成母液，再用母液稀释5～6 个系列浓度，未用完的母液置于冰箱中保存备用。
用丙酮将药剂分别稀释成高、中、低3 个浓度， 浓度跨度为10 倍左右，每个浓度用手动点滴器点 滴药液于幼虫的胸部背面，每一浓度处理试虫20 头，处理后的幼虫接入培养皿中，写好标签，并置 于26±1℃恒温黑暗条件下培养48 h 后检查试虫的 生存及死亡虫数，计算其死亡率。根据药剂浓度和 死亡率的相关现象，找出适合的稀释浓度，即其死 亡率在15％～90％之间的5～6 个不同剂量的等比 或等差系列浓度供下一步试验。
根据预备试验的结果，按等比或等差系列，用 丙酮将药剂稀释成5～6 个系列浓度，并按预备试 验时的方法进行点滴。每处理20 头幼虫，并设丙 酮液作空白对照。处理后的幼虫置于26±1℃恒温 黑暗条件下，培养48 h 后调查后，检查试虫的生 存及死亡虫数，计算其死亡率。
虫体僵直，用锐器触及虫体5～8 sec，虫体不 能作翻卷动作；或严重腹泻呕吐、虫体收缩变形。
将死亡率以死亡机率值，剂量以剂量对数进行 直线回归，计算LD50 值，作χ2 检验。如对照死亡 率大于10％时应对死亡率进行校正。
本试验选择了有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊 酯和沙蚕毒素等4 类共16 种药剂进行毒力测定， 测定的结果见表1 和图1。从毒力(LD50 值)的数据 分析和毒力回归直线(LD-P)可以看到，不同药剂对 突背蔗龟存在着较大的毒力差异。如二嗪磷与杀虫 单相比，毒力相差35 倍。在被测定的16 种药剂中， 特丁硫磷、甲基异柳磷、克百威、辛硫磷、二嗪磷 和嘧啶磷等药剂对突背蔗龟活性相对较高，LD50 值 处于1.0065～2.1876 μg/头；乐果、毒死蜱、丁硫 克百威、西维因、氯氰菊酯、甲拌磷、地虫硫磷和 敌百虫等的LD50 值处于3.0652～10.7687 μg/头； 氰戊菊酯和杀虫单对突背蔗龟的活性相对较低， LD50 值为29.3417～42.3740 μg/头。按毒力大小，16 种药剂的排列顺次为特丁硫磷＞二嗪磷＞克百威＞ 甲基异柳磷＞辛硫磷＞嘧啶磷＞乐果＞氯氰菊酯＞ 丁硫克百威＞毒死蜱＞西维因＞甲拌磷＞地虫硫磷 ＞敌百虫＞氰戊菊酯＞杀虫单。
 | 表1 药剂对突背蔗龟的毒力测定结果 |
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图1 16 种药剂的LD-p 线 |
在本次被测试的16 种药剂中，有属于高毒、 中毒和低毒的药剂。其中特丁硫磷、甲基异柳磷、 地虫硫磷、甲拌磷和克百威等5 种属于高毒药剂， 这些药剂中除特丁硫磷已被禁止在甘蔗上使用外， 其余药剂仍属于目前甘蔗常用药剂。另外11 种属 于中、低毒药剂，这类药剂中有些药剂如辛硫磷、 毒死蜱、二嗪磷等虽在甘蔗上有一定的推广应用， 但其用量远不及高毒药剂。通过生物测定，可以看 到，在中低毒药剂中也不泛有对黑色蔗龟高活性的 药剂，如二嗪磷、辛硫磷等与作为参照物的高毒药 剂特丁硫磷、甲基异柳磷等相比，其活性不相上下。 另外乐果、嘧啶磷、氯氰菊酯等药剂的活性甚至高 于地虫硫磷和甲拌磷等高毒药剂。这些药剂可通过 进一步的深入研究，如大田试验筛选和药效试验， 或通过混用剂联合作用测定筛选出具有增效作用的 配方，有针对性地开发出高效、低毒的地下害虫杀 虫剂。
当然，一种在室内对害虫具有生物活性的化合 物，能否成功开发为生产上应用的杀虫剂产品，特 别是用于土壤处理杀虫剂，还需要该化合物具备一 些重要的化学性质，如药剂的渗透性，在土壤中的 流动性和半衰期以及药剂的蒸气压等。表2 列举了 本实验中所涉及的16 种药剂的蒸汽压与在土壤中 的半衰期相关数据。一般说来，药剂在土壤中的半 衰期较长，说明药剂在土壤中比较稳定，对地下害 虫的效果好；蒸气压高时，药剂在土壤中起到一定 的薰蒸作用，亦有利于发挥药剂对地下害虫的效 果。
| 表2 16 种药剂的毒性、蒸汽压与半衰期 |
| [1] | 龚恒亮, 李金玉. 甘蔗黑色蔗龟Alissonotum impresssicolle Arrow 抗药性研究初报. 甘蔗糖业,1992(2):7-13. ( 1)
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