糖是具有旋光活性的化合物,旋光分析(简 称旋光法)是利用直线偏振光,通过含有光学活 性化合物的液体或溶液时引起旋光现象,使通过 的偏振光平面向左或向右旋转。因此,在一定条 件下,检测偏振光旋转的方向和度数,可以区别 某些化合物的旋光性,或检测化合物的杂质、纯 度和含量。用于测量旋光度的仪器,被称为旋光 仪或偏振仪。旋光仪多用于糖类的含量测定,故 也有称作糖量计。严格的区别是旋光仪的读数, 多以旋光度表示;而糖量计的读数,则以国际糖 度表示。
糖厂生产过程的中间产品(在制品)及部分深 颜色成品,用旋光法测定其转光度(糖度)时,均 需使用醋酸铅作澄清剂进行样品处理。由于铅对 人体健康和环境的影响,引起了各国环境卫生组 织的极大关注,国际上已禁止使用铅试剂。研究 铅澄清的替代方法已成为当务之急。为解决这一 难题,人们对几种替代的方法作了评估,发现近 红外旋光法更具有实用性,并做了广泛的研究。 应用近红外技术,因其工作波长远远超过糖色素 的吸光范围,因此可避免使用有毒的铅试剂除色 预处理,直接进行测试。国际糖品统一分析方法 委员会(ICUMSA)第22届会议(1998年)和国际甘 蔗糖学会(ISSCT)第23届会议(1999年),均决 定和公布“近红外旋光法”成为一种新的法定方法。法定分析方法更替的关键在近红外旋光仪。
“近红外旋光仪”的研制,是基于对人体健康和 环境的保护、与国际标准的接轨、国家的经济利 益和需要。本项目目的是研制出带有近红外波长, 能直接测量深色糖液旋光度的近红外旋光仪。
物质的旋光度大小与下列因素有关:一是物 质的旋光度与温度有关。有的物质随着温度升高 旋光度增加,如石英等,有的物质随着温度升高 而旋光度减少,如蔗糖等,因此在测试时,必须 准确掌握温度,然后进行修正。二是物质的旋光 度与平面偏振光的波长λ有关,波长不同,旋光 度也不同。三是物质的旋光度与旋光物质有关, 不同的旋光物质有不同的旋光度。
旋光质的旋光度α(即旋光质将光波振动平 面旋转的角度)与旋光质溶液体积百分比浓度C 及偏振光所通过的溶液厚度1成正比。即:
当旋光质的溶液C为g/100mL, 1为mm时, 测得的旋光度称为比旋度(用[α]表示)。比旋度 与光的波长及测定时的温度等有关。通常规定用 黄光(λ=589. 4400nm)在20℃时测定,在这些条 件下,比旋度用[α]D20表示。
比旋度的大小表示旋光性的强弱。一定的旋 光质,其[α]D20为一定值。蔗糖的[α]D20=66.536°。
目前旋光法是测定蔗糖分最简便、最快速的 一种方法。
国际糖度(&$176;Z)尺是国际通用的。规定量为 26. 000 g(在大气中用黄铜法码称重)的纯蔗糖, 在20℃时配成100 mλ=589.4400 nm测得的旋 光度为:
以此值作为100°Z的基础。
在1974年ICUMSA(国际糖品统一分析方法委员会)第16届会议上,提出以λ=546. 2271 nm 的198Hg(汞的同位素)汞光°Z的基 础。此时
近红外波长880nm的α880nm20.00℃
根据ICUMSA22届年会(1998年)规定,石英 片的[α]值,在波长546~900 nm范围内的公式 是:
α:角旋光度°/mm石英片;λ:波长,单位是μm。
所以,在近红外波长λ=880nm时,
在规定条件下,国际糖度100°Z时
如图1,近红外波长880 nm,远远超出了糖 色素的吸光范围。
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图1 ①λ=880nm, T=3. 80%,废糖蜜,滤纸过滤,C=100mm, Bx更正=76. 0S, Sx°≈412.878(13.286g/100mL);②λ=880nm,T=0.38%,赤砂糖,未λ=880nm, T=5. 50%,赤砂糖,纸过滤,C=100mm,赤砂糖65g/100mL。 |
本旋光仪主要由光源(卤素钨灯)、聚光镜, 起偏器、法拉第磁光调制器、样品室、检偏器、 干涉滤光片(589 nm和8 8 0 nm)、光阑和光电倍 增管及讯号电路组成(见图2) 。
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图2 近红外旋光仪结构与原理图 |
卤素钨灯发出的光,经聚光镜、小孔光阑、 场镜、起偏器、法拉第磁光调制器、准直镜,形 成一束推动平面随法拉第线圈中交变电压而变化 的准直的平面偏振光,经过装有待测溶液的观测管后射入检偏器,再经过接受物镜、干涉滤光片 (根据待测样液的需要,选择589 nm或8 8 0 nm) , 小孔光阑进人光电倍增管,光电倍增管将光强信 号转换成电信号,并经前置放大器放大。
本自动数字显示旋光仪的测量原理是基于光 学零位原理,即自然光依次经过起偏和检偏器的 通光方向正交时作为零位,检偏器偏离正交位置 的角度α与人射检偏器的光强I之间的关系按马 吕斯定律为:
起偏器和检偏器是同样的偏振器,起偏器在 试样室前,将光源射来的平行自然光形成偏振光 (偏振光的振动方向与传播方向构成的平面称为 偏振面),检偏器在试样室后,当2块偏振器的 偏振面相一致时,通过的偏振光最强,亮度最亮, 当2块偏振器的偏振面垂直时,(正交90°)检 偏器对第一块起偏器形成的偏振光几乎完全被消 除掉(如图3)。
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图3 |
AA'为起偏镜的偏振面,BB'为检偏器的偏振面,从检偏器后观察可知,两个偏振面相互垂 直时,通过的光亮度最小(接近全黑)。当向左或 向右转动起偏器,使之离开与检偏器的偏振面垂 直位置,亮度都会增大,在90°范围内,偏离 垂直位置的角度越大,亮度也越大,偏离的角度 相等,亮度也相等,如图3中A1A1'与A2A2'。
本仪器于装校中已把起偏器和检偏器的偏振 面放置在垂直的位置上,即平衡位置(即上述所 提的零位光学原理),不管什么原因,使起偏器 和检偏器的偏振面不是垂直位置,电气控制部分 自动的使电机带动蜗轮使检偏器恢复到原来相互 垂直的平衡位置上。此时如显示部分不是全零, 可通过置零按扭使电路全部置零,作为测试前的 准备工作。
在放入不同(有旋光性)试样后,试样会使起 偏器形成的偏振光的偏振面旋转不同的角度,经 过检偏器变成不同的亮度,但直接测量亮度的精 度不高,误差大,而且还无法判断左旋或右旋, 为此还必须用法拉第调制器对偏振光进行调制。 法拉第线圈两端通过电容接在电源220 v/50 Hz 的交流电器,在线圈的轴孔里放有磁旋玻璃棒, 随着通电线圈磁场的变化,通过玻璃棒的偏振光 的偏振面也随着变化,50 Hz交流电每秒变化正 负50次,偏振面也相应左右摆动50次,摆动的 最大位置为±0.5°,在平衡位置时,如图4, 每摆动一次先从AA'位置摆动到A1A1',再摆动 到AA'又摆动到A2A2'位置,最后再回到AA' 位置。从检偏器后观察,在亮度变化上,在位置 AA'最暗在A1A1'与A2A2'时最亮,出现亮暗 2次变化即每秒变化l00次。即法拉第线圈两端 加以频度为f的正强交变电压μ=USin2πft时, 按照法拉第磁光效应,通过平面偏振光振动平面 将迭加一个附加转动。α=βSin2πft。也就 是亮度变化频率为100Hz,l00Hz就是平衡信号。 若放进一个旋光度+10°的试样试样使偏 振面从A0A0'到AA',旋转+10°如图5。这时法 拉第调制器调制偏振面由AA'摆动到A1A1', 再摆到A2A2'回到AA',从检偏镜观察,它的亮度变化在A2A2'时较暗,在A1A1'时较亮,即偏 振面每摆动一次,也就是每秒钟亮度变化一次, 也即亮度变化频率是50 Hz,50 Hz是电机的动 作信号,伺服电机带动检偏器旋转,使偏振面回 到A0A0'位置,这时亮度每秒摆动100次,即100Hz 平衡信号,电机停止转动,这时转过的角度从显 示器上显示+10°因此有了调制器,大大提高 测试精度。
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图4 |
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图5 |
若有一个右旋10°和一个左旋10°的物质分 别放入试样室,它们使偏振面旋转+10°和-10°,
如图6。
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图6 |
如果调制器使偏振面的摆动都是从AA'到 A1A1'再到A2A2'它们在同一时间里亮度的变 化正好是相反的,即相位差是180°一种是和电源同相的,一种是和电源反相的,这两种正反 相亮度变化信号,控制了电机的正反转,从而指 示出左旋或右旋光度。
由前面的图1可知近红外光远远超出糖色素 的吸光范围,要避免使用有毒的铅试剂作为深颜 色糖液的除色剂,直接测量深颜色糖液的旋光 度,就必须应用近红外旋光仪。现有国产自动旋 光仪仅有589 nm波长或546 nm的可见光工作 波长。本研究项目就是在可见光工作波长(589nm) 的基础上增加一个近红外光(880 nm)的工作波 长。看似简单,实际上多了一个近红外工作波长, 近红外是不可见光区,由此,从光源、光学器件、 检偏器等及光电信号转换系统——光电倍增管、 模数转换系统等,原理虽一样,但性能和配件材 料差异较大。
为选择合适的近红外光源,对激光器、近红 外半导体发射二极管,及各种特种光源等做了大 量比较实验,并参考“近红外傅立叶分光仪”, 及图7某,些连续光源的典型功率输出,确定以 卤素钨灯加干涉滤光片(一片为589 nm波长,一 片为880 nm波长)作为钠光589 nm工作波长和 近红外光880 nm工作波长。
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图7 某些连续光源的典型功率输出 |
根据法拉第磁光效应
Ψ=ρ1H
式中:ρ——物质特有的并决定于波长及温 度的费尔德常数;
l——物质中的光程度;
H——磁场强度。
在本仪器中所采用的法拉第磁光调制器中光 程长1是一定值,磁旋玻璃的T%扫描谱图,如 图8,②、③及④,从550~900 nm有良好均衡 的透光性,适合于可见光及近红外区作法拉第磁 光调制。
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图8 |
起、检偏器即偏振器,是整台仪器中最为重 要的光学器件,现有流行的自动旋光仪(尤其是 国产的)的偏振器,多数是采用聚乙烯醇薄膜。 聚乙烯醇类的偏振器,在可见光区,起、检偏器 处于0°状态时,其偏振光透过率T%约15%~ 20%,90°状态时仍有约4%的透过率,在840~ 900 nm处0°与90°状态的透过率几乎相等, 即不起偏,故不适合作近红外波段旋光仪的起、 检偏器。
经实验筛选,尼科尔棱镜作起、检偏器,在 正交状态90°时,于可见光及近红外光区,几 近完全屏蔽,0°状态时,于可见光及近红外光 区,均能起偏,尼科尔棱镜的起、检偏器其光学 性能优于聚乙烯醇材料的起、检偏器。由此选择 尼科尔棱镜作为本研究项目的起、检偏器。以提 高样机的检测精度。
本仪器光电信号转换器件、最关键是光电倍 增管。国产自动旋光仪具有钠光工作波长,其选 用的光电倍增管多为GDB一142型,光谱响应曲 线是R35B,截止波长是700 nm,无法用于近红 外光区工作。经反复试验筛选出性能、价格较为 合适的光电倍增管,其波长适应范围为450 900nm,光谱响应曲线较为合适。加上对电路的 改造,使样机的测量精度和准确度均优于研究项 目技术指标要求。
在模数转换系统中,以单板机作为计数控 制,实现589 nm和880 nm测量时的计数转换。 并为今后仪器的人机界面的改造和完善提供了必 要的软、硬件支持。
(1)旋光标准石英管:采用经中国计量科学 研究院测试、校准的旋光标准石英管(证书编号: CDtd2000-0064)来校准近红外旋光仪。 旋光标准石英管:λvac=589.44 nm测试 温度20℃;
编号616:旋光度17.324°;糖度50.03°Z
编号615:旋光度34.665°;糖度:100.11°Z
(2)将旋光标准石英管置放于近红外旋光仪 的测试室中。根据测试室温度,由标准石英管的 温度校正公式,求出在该温度下,标准石英管应 有的数值,使近红外旋光仪在波长为589 nm和 880 nm时的显示读数与标准管在该温度下应有 的数值一致。如不一致,可通过调节干涉滤光片 使其一致。
(3)在一定的温度条件下校准近红外旋光 仪。
测试温度16.5℃,湿度55%,读数为糖度 单位°Z。
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表1 |
(1)仪器岛律UV一260紫外——可见分光光 度计(用于检测透光率T%值)。
(2)样品。取最终糖蜜任意量稀释作为样品。 用快速滤纸过滤。
(3)观测管。观察管长度100 mm。用观测管 装样液,直接用于观测透光率T%值和转光度。
(4)波长。工作波长取880 nm的近红外波长, 观测透光率TK及转光度: 试验结果如表2。
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表2 |
在T%=0.24~0.08之间稀释过量,无法细 分,但本近红外旋光仪,在880nm工作波长测量 样品的透光率T%值定为≥0.50%是留有余地的。
所采用的最终糖蜜的色值按常规方法分 析波长在560 nm、比色皿长度1.0 cm, A560nm=0.893,观测锤度(Bx)1.67,样品温度是 14℃,经计算更正锤度(Bx)1.43;浓度为:1.43× 1.00278/100=0.01434 g/mL以国际色值单位表示:
(1)近红外旋光仪开机后,测量样品前均以 旋光标准石英管校正。
(2)在甘蔗糖厂生产过程中,取混合汁和澄 清汁样,在炼糖期取回溶糖浆。
分别采用加铅盐澄清过滤,用波长589 nm 测转光度;不加铅盐澄清,只用滤纸过滤,用波 长880 nm测转光度,观测管均为100 mm。
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表3 在糖厂中的部分试验结果 |
本项目经过对光源、起、检偏器、法拉第磁 光调制器及光电转换系统的试验筛选,应用CPU 作为模数转换及电路优化,将近红外新技术应用 于旋光检测,研制出光机电一体化的,带有 可见光(589 nm)和近红外光(880 nm)的双波长的 近红外旋光仪填补了国内近红外旋光仪的空 白。本近红外旋光仪,在880 nm波长处精度0.05°;Z 的前提下,可测样品的透光率T%达到0.25%; 在589 nm波长处精度达到0.02°Z的前提下,可 测样品的透光率T%达到0.01%。本近红外旋光 仪于2003年1月已取得国家专利(专利号: 01255794.3),并已通过由国家轻工业局组织的 专家组鉴定,达到国内领先水平。解决了深颜色 糖液无需使用铅试剂作为澄清剂而直接测量的难 题,可避免受铅的毒害及污染,有利于人体健康 及环境保护。近红外旋光仪在甘蔗糖厂的实际应 用将另文介绍。
[1] | ICUMSA,Specification and standard SPS-1(1998) |
[2] | A.EMMERICH,some remarks about NIRPOLARIMETRY,Sugar Journal July 1992,12~14 |
[3] | Bob Trott,Polarisation measurements at near infrared wavelengths,INT.SUGAR JNL.,1994,Vol.96,No.1149,343-344 |
[4] | Dr.Jennifer Horn,Prof.Chris Buuckeand Dr.Max Adlard,A NEW POLARIMETRIC METHOD FOR THE ANALYSIS OF DEXIRAN |
[5] | A NEW POLARIMETRIC METHOD FOR THE ANALYSIS OF DEXTRAN AND SUCROSE,Victoria Singleton,Optical Activity Ltd.Cambridgeshire,England |
[6] | W.Altenburg and C.C.Chou,An alternative method of raw sugar polarization Eine alternative Methode der polarimetrischen Rohzuckerbestimmng,Zuckerind.116(1991)Nr.12,1041~1046 |