2017, Vol. 44文章信息
- Ubiquilin1蛋白在乳腺癌组织中的表达与预后意义
- Expression of Ubiquilin1 Protein in Breast Cancer Tissues and Its Prognostic Significance
- 肿瘤防治研究, 2017, 44(8): 535-539
- Cancer Research on Prevention and Treatment, 2017, 44(8): 535-539
- http://www.zlfzyj.com/CN/10.3971/j.issn.1000-8578.2017.17.0153
- 收稿日期: 2017-02-16
- 修回日期: 2017-05-08
引用本文 |
2. 100050 北京，首都医科大学友谊医院干部医疗科
2. Department of Senior Official Ward, Beijing Friendship Hospital, Capital University of Medical Sciences, Beijing 100050, China
乳腺癌是全球女性中最常见的恶性肿瘤，在女性癌症相关死亡中居第二，严重威胁着女性的健康[1-2]。但目前对其发生、发展的精确分子机制尚不完全清楚。因此，探索可用于预测乳腺癌复发风险、评估预后的分子生物学标志极其重要。UBQLN1是一种泛素样蛋白质，在调节蛋白酶体降解过程中发挥核心作用[3]。近些年来研究发现其通过促进错误折叠蛋白质降解、参与内质网应激相关降解（ERAD）[4]、自噬[5-6]、细胞凋亡[7]和受体转运[8]等多种机制对肿瘤的迁移和侵袭等生物学特性产生重要影响。国内有关UBQLN1与乳腺癌方面的研究罕见报道。本研究通过检测UBQLN1在乳腺癌中的表达，探讨其与临床病理特征及预后的相关性，分析UBQLN1在乳腺癌浸润、转移中的重要作用，以期为判定乳腺癌预后及指导临床治疗提供新的思路。
1 资料与方法 1.1 临床资料收集首都医科大学附属北京世纪坛医院2009年1月—2012年9月间存档的石蜡包埋乳腺癌标本108例进行回顾性分析，并取得医学伦理学相关部门同意。患者均为女性，术前均未接受治疗（包括放疗、化疗及内分泌治疗）、无远处转移。平均年龄58岁（32~88岁）。另设对照组：对应癌旁正常乳腺组织108例（距癌缘 > 2.0 cm）。
1.2 乳腺癌病理学指标及诊断标准乳腺癌病理学指标包括：年龄、绝经状态、病理类型、组织学分级、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移个数、ER、PR、HER2/neu表达、基因分型、淋巴浆细胞浸润、脉管浸润、神经侵犯、Ki-67及P53等，数据收集自存档病例的病理报告中。病理组织学诊断依据2003年《WHO乳腺及女性生殖器官肿瘤病理学和遗传学》中乳腺癌的诊断标准，由两位高级病理医生进行诊断、分级及分期。肿瘤分期根据AJCC TNM分期（第7版）分为Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期。基因分型的划分标准为[8]：Luminal A型（ER/PR+、HER2-、Ki-67低表达）；Luminal B型（HER2阴性型：ER+/PR+、HER2-、Ki-67高表达；HER2阳性型：ER+/PR+、HER2 +、任何状态的Ki-67）；ERBB2+型（HER2+、ER-/PR-）；基底样型/三阴性：（HER2-、ER-/PR-）。Ki-67表达的划分标准为[9]：≥14%为高表达，< 14%为低表达。
1.3 方法 1.3.1 免疫组织化学法鼠抗人单克隆抗体UBQLN1购自英国Abcam公司（ab128011，稀释度1:50），免疫组织化学试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。用已知肺腺癌肿瘤组织阳性切片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。DAB显色，苏木精对比染色，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，明胶封片后镜检。
1.3.2 结果判定采用双盲法，由两位病理医生独立观察。实验结果判断参照Remmele和Stegner[10]提出的免疫反应积分打分法，综合考虑阳性细胞的染色强度和所占比例。染色强度分为：无着色为0分，浅着色为1分，中等着色为2分，强着色为3分。阳性细胞所占比例分为：< 1%为0分，1%~ < 10%为1分，10%~ < 50%为2分，50%~ < 80%为3分，80%~100%为4分。阳性强度和阳性细胞所占比例得分相乘为最后得分：< 4分为阴性，≥4为阳性。
1.4 随访采用电话咨询结合临床病例资料查询方式，随访所有病例的生存时间、复发、转移、死亡等情况，随访截至2016年6月30日。
1.5 统计学方法统计数据采用SPSS17.0软件进行分析，P < 0.05为差异有统计学意义。采用χ2检验和Fisher’s精确检验分析UBQLN1表达和各临床病理指标之间的相关性。UBQLN1与P53及Ki-67间的相关性采用非参数Spearman检验；单因素生存分析采用Kaplan-Meier检验；乳腺癌的预后采用Cox多因素回归分析。
2 结果 2.1 免疫组织化学检测结果非特殊型浸润性导管癌90例，浸润性小叶癌18例，UBQLN1在两种类型的乳腺癌中表达方式差异无统计学意义。在乳腺癌组织中，UBQLN1的阳性染色定位于细胞质和（或）细胞核中，呈棕黄色或棕褐色，表达具有异质性；在癌旁正常乳腺组织中未见明显阳性表达，见图 1。UBQLN1在108例乳腺癌标本中有55例中高表达，阳性率为50.9%（55/108）。
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| Strongly positive expression of UBQLN1 in invasive ductal(A) and invasive lobular breast cancer tissues(C) and weakly positive expression of UBQLN1 in invasive ductal(B) and invasive lobular breast cancer tissues(D) 图 1 乳腺癌组织中UBQLN1的染色结果(IHC ×400) Figure 1 Expression of UBQLN1 in breast cancer tissues (IHC ×400) |
UBQLN1表达与肿瘤大小、临床TNM分期、淋巴结转移个数、脉管浸润、神经侵犯、Ki-67、P53及远处转移均呈正相关（P < 0.05），与患者年龄、绝经状态、病理类型、组织学分级、ER、PR、HER2/neu表达、基因分型、淋巴浆细胞浸润等无相关性（P > 0.05），见表 1。
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经Spearman秩相关检验得出UBQLN1的表达与P53的表达呈正相关（r=0.262，P=0.006）；与Ki-67的表达不相关（r=-0.022，P=0.819），见表 2。
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UBQLN1在淋巴结阳性组中阳性表达率为64%（32/50），在淋巴结阴性组中阳性表达率为39.7%（23/58），差异有统计学意义（χ2=6.368, P=0.012）；UBQLN1在有远处转移组中阳性表达率为71.7%（27/38），在无远处转移组为40%（28/70），差异有统计学意义（χ2=9.503, P=0.002）。进一步行生存分析，在淋巴结阳性组，UBQLN1阳性组与阴性对照组间预后差异无统计学意义（DFS: P=0.056; OS: P=0.140）。然而，在淋巴结阴性组，UBQLN1阳性组与阴性对照组相比，DFS和OS显著降低（DFS: P=0.000; OS: P=0.000），见图 2。
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| A: Kaplan-Meier curves of 108 breast cancer patients stratified by UBQLN1 (n=108); B: Kaplan-Meier curves of 58 breast cancer patients without lymph node metastasis stratified by UBQLN1 (n=58); C: Kaplan-Meier curves of 50 breast cancer patients with lymph node metastasis stratified by UBQLN1 (n=50) 图 2 UBQLN1表达与乳腺癌生存期的关系 Figure 2 Correlation of UBQLN1 expression with survival of breast cancer patients |
随访时间13~89月（平均60月）。108例乳腺癌患者中12例局部复发，38例远处转移，死亡31例，失访6例。Kaplan-Meier生存曲线分析显示，UBQLN1表达、肿瘤大小、临床TNM分期、淋巴结转移个数、脉管浸润、神经侵犯、P53与乳腺癌患者的DFS显著相关（P < 0.05）。UBQLN1表达、肿瘤大小、临床TNM分期、淋巴结转移、脉管浸润、P53与患者的OS显著相关（P < 0.05），见表 3。Cox回归模型进行多因素分析结果显示，UBQLN1是影响患者DFS和OS的独立不良预后因素（P < 0.05），UBQLN1表达阳性的患者复发转移风险比阴性患者增加2.551倍，死亡风险比阴性患者增加2.994倍。此外，P53也是乳腺癌患者独立的预后因素，见图 2、表 4。
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UBQLN1是一种核小体表面蛋白，属于高度保守的泛素样蛋白家族（UBQLN1、UBQLN2、UBQLN3、UBQLN4和UBQLNL）中的一员，其编码基因位于人类9号染色体（9q22），编码589氨基酸序列或561氨基酸序列，在组织中广泛表达[11]。UBQLN1全长由11个外显子组成，具有3个功能结构域：N-末端泛素样区域（UBL），C-末端泛素相关的区域（UBA）和中间的STI伴侣样区域[12-13]。这些区域的存在表明，UBQLN1的功能类似于一个传递蛋白，它可将多泛素化目标提供给特定的蛋白，促进蛋白酶体降解。Beverly等[14]发现UBQLN1在肺癌中高表达，且与患者的生存期降低相关。Shah等[4]研究显示UBQLN1能诱导肺腺癌细胞的迁移、侵袭和上皮间质化。Guidi等[15]研究发现卵巢癌细胞系对顺铂的耐药性与UBQLN1的高表达有关。
自噬是一种进化上保守的溶酶体降解途径，对于维持细胞完整性至关重要[16]。作为维持内环境稳定的机制，自噬调节的失调与许多病理生理过程有关，包括神经退行性疾病、心血管疾病和癌症[17]。其可能会破坏细胞的完整性，并促进肿瘤的发生。作为一种促生存机制，乳腺癌细胞受到射线辐射后会增加自噬从而保护癌细胞免受损伤[18]。2015年由Sun等[19]发表的首篇关于UBQLN1与乳腺癌的研究显示，在乳腺癌组织中，miR-200c通过靶向抑制UBQLN1的表达抑制了辐射诱导的自噬反应，从而提高乳腺癌的放射敏感度。进一步研究发现UBQLN1的过表达可逆转miR-200c对乳腺癌细胞的放疗增敏及对放疗诱导自噬抑制的效果。另外2014年Bai等[20]研究中也发现，miR-200c表达降低与HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗耐药相关。
本研究中UBQLN1阳性表达与乳腺癌肿瘤大小、临床TNM分期、淋巴结转移个数等临床病理学指标明显正相关，这也进一步证实UBQLN1的表达与乳腺癌的侵袭和转移密切相关。乳腺癌中UBQLN1与P53的表达呈正相关，提示P53与UBQLN1基因的异常共同参与了乳腺癌的发生，两者在乳腺癌发展过程中可能起协同作用。这与Guidi等[15]发现在卵巢癌细胞系中，UBQLN1蛋白可抑制P53蛋白降解，可能与介导卵巢癌的顺铂耐药一致。但两者在乳腺癌中的具体作用机制尚未见报道，有待于进一步的实验研究证实。此外UBQLN1表达与淋巴结转移和远处转移具有更密切的关系，免疫组织化学及单因素生存分析等结果也证实了这一点。Kaplan-Meier单因素生存分析和Cox多因素回归分析均表明，UBQLN1阳性表达患者较阴性表达者的DFS和OS明显下降，UBQLN1是乳腺癌独立的预后因素。
综上所述，本研究提示UBQLN1蛋白表达与乳腺癌密切相关，且其阳性表达与乳腺癌预后不良有关，可作为乳腺癌的独立预后因子，对评估乳腺癌生物学行为及进展程度可能具有一定的临床价值。
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