2. 中国医科大学附属第一医院 神经外科, 辽宁 沈阳 110001
2. Department of neurosurgery, The First Hospital, China Medical University, Shenyang 110001, China
右美托咪定(dexmedetomidine，Dex)是一种高选择性的α2肾上腺素能受体激动剂，具有镇静、镇痛、抑制交感、抗焦虑、抑制呼吸轻、减轻炎症反应等作用。目前关于Dex抗炎作用成为研究热点之一。Jiang等[1]就关于Dex对脑缺血损伤的保护作用做了一个Meta分析发现其可以减轻炎性介质的释放。近期发现，Dex通过TLR4/NF-κB途径降低NOD样受体NLRP3(NOD-like receptor protein 3，NLRP3)以及炎症因子的表达，对大鼠急性胰腺炎起到保护作用[2]。本研究拟探讨Dex对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)后的保护作用及对海马神经元的炎症反应的影响。
1 材料与方法 1.1 试剂、仪器及分组 1.1.1 试剂盐酸右美托咪定(中国江苏恒瑞医药股份有限公司，180130BP)，兔抗鼠NLRP3(美国NOVUS公司，MAB7578-SP)，兔抗鼠IL-1β(ab205924)、兔抗鼠IL-18(ab191860)(均购自美国Abcam公司)。
1.1.2 仪器电泳仪电源(DYY-6C, 中国北京市六一仪器厂)，发光仪成像系统(ChemiDoc MP, 美国Bio-Rad公司)。
1.1.3 分组♂ SD大鼠45只，体质量(280~320) g，由中国医科大学实验动物中心提供。随机分3组：假手术+生理盐水(Sham+saline)组、蛛网膜下腔出血+右美托咪定(SAH+Dex)组和蛛网膜下腔出血+生理盐水(SAH+saline)组。行神经功能、SAH评分、脑水含量及Western blot检测。
1.2 SAH大鼠模型建立采用枕大池二次注血法[3]制作SAH大鼠模型。
1.3 评价指标采用Garcia神经功能评价标准评估大鼠神经功能[4]; 黄巍[5] SAH评分方法对大鼠进行SAH评分; 脑组织含水量/%=(湿重-干重)/湿重×100%[6]; Western blot检测大鼠海马组织中NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白的表达[5]。
1.4 统计学处理所有数据均用均数±标准差(x±s)表示，采用GraphPad Prism 7统计软件分析，组间均值差异使用T检验及One-way ANOVA进行统计学比较。
2 结果 2.1 神经功能和SAH评分比较神经功能评分：SAH+Dex、Sham+saline与SAH+saline组比较行为学明显改变，推测腹腔注射25 μg·kg-1的Dex后改善大鼠的神经功能，差异有统计学意义(P < 0.05);SAH评分：SAH+Dex组与SAH+saline组比较没有差异，无统计学意义(P >0.05)。见Tab 1。
| Group | Neurological score | SAH score |
| Sham+saline | 17.50±0.50 | 0.33±0.47 |
| SAH+Dex | 16.83±0.69 | 13.33±0.47* |
| SAH+saline | 7.33±0.75*# | 13.17±0.69* |
| *P < 0.05 vs Sham+saline group; #P < 0.05 vs SAH+Dex group | ||
Sham+saline、SAH+Dex和SAH+saline组脑组织含水量分别为(47.29±2.39)%、(48.28±3.96)%、(82.55±1.99)%。可以看出Dex能明显减少大鼠蛛网膜下腔出血后脑水含量，缓解脑水肿。
2.3 大鼠海马神经元中NLRP3、IL-1β和IL-18蛋白表达水平比较SAH+Dex组与SAH+saline组比较，炎性细胞因子明显减少，差异有统计学意义(P < 0.05)，见Tab 2。
| Group | NLRP3 | IL-1β | IL-18 |
| Sham+saline | 0.51±0.02 | 0.42±0.02 | 0.82±0.03 |
| SAH+Dex | 0.52±0.02 | 0.48±0.02 | 0.84±0.03 |
| SAH+saline | 0.65±0.03*# | 0.80±0.03*# | 1.04±0.04*# |
| *P < 0.05 vs Sham+saline group; #P < 0.05 vs SAH+Dex group | |||
Dex主要作用于蓝斑核α2受体，产生镇静作用，成为临床中常用的药物。基础研究中Dex通过减轻炎症反应减轻脑损伤[7]。肝再生中，腹腔注射25 μg·kg-1的Dex可有效抑制TLR4/NF-κB信号通路中NLRP3炎性小体的活化, 从而进一步减少炎性细胞因子IL-1β和IL-18[8-9]，虽然这个剂量高于人的用量(1 μg·kg-1)，但对大鼠起到良好的镇静效果。本实验通过腹腔注射Dex(25 μg·kg-1)可以有效减少炎性因子的表达，并能改善大鼠神经功能以及缓解脑水肿。
SAH后的患者在早期脑损伤期间干预治疗成为一个主要目标，早期治疗能有效降低患者的死亡率和对海马神经元的损害[10]。大多数学者关注的是自噬、细胞凋亡等，并无NLRP3的相关报道，而我们的实验正好弥补了空缺。但是我们只是验证了炎性体对海马神经元的损伤，并未进一步研究细胞凋亡及对以后认知功能的影响。
Dex可以改善SAH早期脑损伤对海马神经元的损害，降低脑水肿，并能降低海马神经元中炎性体的表达。本实验为Dex的抗炎作用提供了依据，为以后临床研究提供良好的理论基础，为临床应用提供了一定的经验。
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