


基于地黄和葛根在中医临床治疗中风疾病的广泛应用[1]及其现代药理学作用[2, 3],课题组前期将其药效成分梓醇和葛根素配伍,研制成治疗脑缺血中风的新药——梓葛冻干粉针(lyophilized powder of catapol and puerarin,C-P)。研究显示,C-P对中风模型小鼠具有神经保护作用[4]。但是,C-P是否也具有抗血栓的作用尚不清楚。本实验研究C-P的体内外抗血栓作用,为将C-P研制成兼具抗血栓作用的、治疗缺血性中风疾病的神经保护剂提供实验依据。
1 材料与方法 1.1 动物与试剂新西兰大白兔、昆明种小鼠购于广州中医药大学实验动物中心;梓醇和葛根素购自石家庄流波白鸟生物科技有限公司,纯度均≥98%;C-P由本实验室研制(批号:20120518);尿激酶、戊巴比妥钠、I型胶原蛋白均购自Sigma;盐酸肾上腺素注射液、二磷酸腺苷、阿司匹林均购自广州白云山制药。
1.2 家兔体外血凝块溶解实验实验分为5组:生理盐水对照组、阳性药(尿激酶100 kU·L-1)组、3个C-P药物浓度(49、24.5、12.25 mg·L-1)组。取♂新西兰兔,麻醉,参照文献[5]制得血凝块。称取各组给药前后血栓重量,计算血栓溶解率。
1.3 抗胶原蛋白-肾上腺素(collagen-adrenal,CA)诱发小鼠体内血栓形成实验60只小鼠随机分成6组,每组10只。正常对照组和模型组灌胃蒸馏水0.2 mL·(10 g)-1,阳性药阿司匹林0.2 mL·(10 g)-1,其他3组灌胃相应容积药物,连续5 d,每天1次。末次给药 45 min 后,除正常组注射生理盐水外,其余每组尾静脉注射CA。观察并计算5 min内小鼠死亡数和15 min内小鼠偏瘫数[5]。
1.4 二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱导兔血血小板聚集抑制实验血浆的制备参照文献[6],♂新西兰家兔麻醉,制备富血小板血浆(PRP);再以3 000 r·min-1离心20 min,吸取上清液得贫血小板血浆(PPP)。
操作步骤:以上述PRP为血小板供体,并用PPP调零。实验分5组:阿司匹林组、空白对照组和C-P 3个剂量组(49、24.5、12.25 mg·L-1),每组8个平行样。用血小板聚集测试仪测定各组血小板最大聚集率。
1.5 数据分析采用SPSS 17.0统计软件对各组数据进行t检验,数值用±s表示。质反应数据用Monte Carlo确切概率法进行组间比较。
2 结果 2.1 C-P可明显溶解家兔体外血凝块与生理盐水组相比,49 mg·L-1的C-P对家兔体外血凝块有明显的溶解作用(P<0.01)。
2.2 C-P可明显抑制CA诱发的小鼠体内血栓形成小鼠在尾静脉注射CA后,均出现不同程度死亡或偏瘫现象。49、24.5、12.25 mg·L-1 C-P对CA诱发的小鼠体内血栓形成具有明显的抑制作用(P<0.05)。
2.3 C-P可明显抑制ADP诱导的兔血血小板聚集与生理盐水组比较,24.5 mg·L-1 C-P对ADP诱导的离体家兔血小板聚集具有明显抑制作用(P<0.01)。
3 讨论理想的缺血中风疾病治疗药物除应及早溶解血栓、恢复血供外,还应具有较好的神经保护作用。我们前期研究发现,C-P对中风模型小鼠具有明显的神经保护效果[4]。本研究的体内、体外实验结果显示,C-P可通过抑制血小板聚集、促进血凝块溶解,从而达到抗血栓的作用。该研究结果为将C-P研发成兼具溶栓作用的神经保护剂带来了希望。当然,其在血栓所致缺血性中风疾病中的抗血栓作用有待于在动物模型中进一步验证。
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| [3] | Zhou Y X,Zhang H,Peng C.Puerarin: a review of pharmacological effects[J]. Phytother Res,2014,28(7):961-75. |
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| [5] | 陈元元,熊天琴,赵玉民,等. 毛冬青总提取物的抗血栓作用及基于ADP的机制研究[J]. 中华中医药学刊,2015,5(33):1092-6. Chen Y Y,Xiong T Q,Zhao Y M,et al. Antithrombotic activity of llexpubescens total extract and the action of mechanism based on ADP[J]. Chin Arch Tradit Chin Med,2015,5(33):1092-6. |
| [6] | 郭月芳,谢 炜,王玉梅,等. 聚乙二醇化降纤酶对血小板聚集和凝血功能的影响[J].中国药理学通报,2011,27(4):512-5. Guo Y F,Xie W,Wang Y M,et al. Effects of PEGylated defibrase on platelet aggregation and coagulability activity[J]. Chin Pharmacol Bull,2011,27(4):512-5. |
