lncRNA SNHG1靶向miR-145-5p/PDCD4轴对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响

http://dx.doi.org/10.12007/j.issn.0258-4646.2023.10.007

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李红英, 张会军, 王军, 穆秀娥, 李红方

LI Hongying, ZHANG Huijun, WANG Jun, MU Xiu'e, LI Hongfang

Effect of lncRNA SNHG1 targeting miR-145-5p/PDCD4 axis on hypoxia/reoxygenation-induced cardiomyocyte apoptosis

中国医科大学学报, 2023, 52(10): 904-909, 916

Journal of China Medical University, 2023, 52(10): 904-909, 916

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收稿日期：2022-11-17

网络出版时间：2023-10-16 19:46:59

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李红英, 张会军, 王军, 穆秀娥, 李红方. lncRNA SNHG1靶向miR-145-5p/PDCD4轴对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响[J]. 中国医科大学学报, 2023, 52(10): 904-909, 916.

LI Hongying, ZHANG Huijun, WANG Jun, MU Xiu'e, LI Hongfang. Effect of lncRNA SNHG1 targeting miR-145-5p/PDCD4 axis on hypoxia/reoxygenation-induced cardiomyocyte apoptosis[J]. Journal of China Medical University, 2023, 52(10): 904-909, 916.

lncRNA SNHG1靶向miR-145-5p/PDCD4轴对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响

李红英 , 张会军 , 王军 , 穆秀娥 , 李红方

河北医科大学第一医院心脏外科, 石家庄 050031

收稿日期：2022-11-17；网络出版时间：2023-10-16 19:46:59

基金项目：河北省医学科学研究课题计划项目(20221399); 河北省医学适用技术跟踪项目(GZ2022052)

作者简介：李红英(1979-), 女, 副主任医师, 硕士.

通信作者：李红方, E-mail: winered_789@yeah.net.

摘要：目的探讨长链非编码RNA (lncRNA)核内小RNA宿主基因1(SNHG1)靶向miR-145-5p/程序性细胞死亡因子4(PDCD4)轴对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法将H9c2细胞分为对照组(NC组)、H/R组、si-NC组、si-SNHG1组、mimicNC组、miR-145-5p mimic组、si-SNHG1+inhibitor NC组、si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组。除NC组外，其他组H9c2细胞均需转染对应物质后构建H/R模型。实时定量PCR (qRT-PCR)检测H9c2细胞中SNHG1、miR-145-5p表达；CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡；试剂盒检测H9c2细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量；Western blotting检测H9c2细胞中PDCD4、caspase 3、Bcl-2、Bax蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验验证SNHG1与miR-145-5p、miR-145-5p与PDCD4的关系。结果沉默SNHG1或过表达miR-145-5p可促进H/R诱导的H9c2细胞中miR-145-5p表达和细胞增殖，抑制PDCD4蛋白表达、细胞凋亡和氧化应激。miR-145-5p inhibitor减弱了沉默SNHG1对H/R诱导的H9c2细胞中miR-145-5p表达和细胞增殖的促进作用，以及对PDCD4蛋白表达、细胞凋亡、氧化应激的抑制作用。SNHG1靶向调控miR-145-5p/PDCD4轴。结论沉默SNHG1可能通过调控miR-145-5p/PDCD4轴抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡。

关键词：核内小RNA宿主基因1 miR-145-5p 程序性细胞死亡因子4 凋亡心肌细胞

Effect of lncRNA SNHG1 targeting miR-145-5p/PDCD4 axis on hypoxia/reoxygenation-induced cardiomyocyte apoptosis

LI Hongying , ZHANG Huijun , WANG Jun , MU Xiu'e , LI Hongfang

Department of Cardiac Surgery, The First Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050031, China

Abstract: Objective To explore the effect of long noncoding RNA (lncRNA) small nucleolar RNA host gene 1 (SNHG1) targeting of the miR-145-5p/programmed cell death 4 (PDCD4) axis on hypoxia/reoxygenation (H/R) -induced cardiomyocyte apoptosis. Methods H9c2 cells were divided into normal control (NC), H/R, si-NC, si-SNHG1, mimic NC, miR-145-5p mimic, si-SNHG1+inhibitor NC, and si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor groups. H9c2 cells in all but the NC group were transfected with corresponding substances to construct the H/R model. Real-time quantitative polymerase chain reaction was used to detect SNHG1 and miR-145-5p expressions in H9c2 cells. A cell counting kit-8 assay and flow cytometry were used to detect cell proliferation and apoptosis, respectively. Superoxide dismutase activity and malondialdehyde content of H9c2 cells were detected using kits. Western blotting was used to detect the expressions of PDCD4, caspase 3, Bcl-2, and Bax protein in H9c2 cells. The relationship between the SNHG1 and miR-145-5p and between miR-145-5p and PDCD4 was verified in a double luciferase reporter gene experiment. Results SNHG1 silencing or miR-145-5p overexpression promoted H/R-induced miR-145-5p expression and proliferation in H9c2 cells and inhibited PDCD4 protein expression, apoptosis, and oxidative stress. An miR-145-5p inhibitor attenuated the promotive effect of SNHG1 silencing on H/R-induced miR-145-5p expression and proliferation in H9c2 cells and the inhibitory effect on PDCD4 protein expression, apoptosis, and oxidative stress. Thus, SNHG1 silencing targeted and regulated the miR-145-5p/PDCD4 axis. Conclusion SNHG1 gene silencing may inhibit H/R-induced H9c2 cell apoptosis by regulating the miR-145-5p/PDCD4 axis.

Keywords: small nucleolar RNA host gene 1 miR-145-5p programmed cell death 4 apoptosis cardiomyocyte

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是一种常见的心血管疾病，死亡率高，及时、有效的再灌注是减少AMI后心肌损伤的重要治疗选择^[1]。研究^[2]报道，心肌细胞凋亡、氧化应激参与了AMI的发病机制。心肌缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R) 损伤与心血管外科手术高度相关^[3]，预防H/R诱导的心肌细胞凋亡可能为AMI提供新的治疗策略。越来越多的研究表明，长链非编码RNA (long noncoding RNA，lncRNA) 在包括AMI在内的心血管疾病的生理和病理过程中发挥重要作用。核内小RNA宿主基因1 (small nucleolar RNA host gene 1，SNHG1) 作为一种lncRNA，已有研究^[4]显示，下调SNHG1可以抑制心肌缺血/再灌注损伤小鼠的心肌细胞凋亡。但其具体分子机制尚不完全明确。研究^[5]显示，过表达miR-145通过靶向下调程序性细胞死亡因子4 (programmed cell death 4，PDCD4) 抑制H/R诱导心肌细胞凋亡。生物信息学分析显示，SNHG1与miR-145-5p存在靶向关系。而SNHG1能否通过调控miR-145-5p/PDCD4轴影响H/R诱导的心肌细胞凋亡尚不明确。因此，本研究主要探讨了SNHG1对H/R诱导的心肌细胞凋亡的影响及其作用的分子机制。

1 材料与方法 1.1 材料

1.1.1 细胞

大鼠心肌细胞H9c2购自浙江美森细胞科技有限公司。

1.1.2 主要试剂

SNHG1小干扰RNA (si-SNHG1) 及其阴性对照(si-NC)、miR-145-5p模拟物(miR-145-5p mimic) 及其阴性对照(mimic NC)、miR-145-5p抑制物(miR-145-5p inhibitor) 及其阴性对照(inhibitor NC)，均购自赛默飞世尔科技(中国) 有限公司；CCK-8试剂盒，购自上海继和生物科技有限公司；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒，购自无锡云萃生物科技有限公司；大鼠超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA) 试剂盒，购自上海广锐生物科技有限公司；兔源一抗PDCD4、caspase 3、Bcl-2、Bax、GAPDH及过氧化物酶标记的羊抗兔IgG二抗，均购自英国Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养、H/R细胞模型的构建及实验分组

将H9c2细胞在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中培养，培养条件为37 ℃和5%CO₂。

H/R细胞模型的构建^[6]: 将H9c2细胞在缺氧培养箱(37 ℃、94%N₂、1%O₂、5%CO₂) 中培养24 h，再在复氧培养箱(37 ℃、95%空气、5%CO₂) 中复氧1 h。

将H9c2细胞分为H/R组、si-NC组、si-SNHG1组、mimic NC组、miR-145-5p mimic组、si-SNHG1+inhibitor NC组、si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组。上述各组细胞进行相应的转染处理48 h后，再进行缺氧24 h、复氧1 h。si-NC组、si-SNHG1组、mimic NC组、miR-145-5p mimic组H9c2细胞分别转染si-NC、si-SNHG1、mimic NC、miR-145-5p mimic，si-SNHG1+inhibitor NC组H9c2细胞同时转染si-SNHG1和inhibitor NC，si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组H9c2细胞同时转染si-SNHG1和miR-145-5p inhibitor。同时取正常培养的H9c2细胞作为对照组(NC组)。上述处理结束后，收集各组细胞用于后续实验。

1.2.2 实时定量PCR (real-time quantitative PCR，qRT- PCR) 检测细胞中SNHG1、miR-145-5p表达

使用TRIzol试剂提取H9c2细胞中的总RNA，将总RNA逆转录为cDNA，以cDNA为模板进行定量PCR。GAPDH、U6分别作为SNHG1、miR-145-5p内参。采用2^-ΔΔCt法计算SNHG1、miR-145-5p相对表达量。引物序列: GAPDH，正向5’-CACCATTGGCAATGAGCGGTTC-3’，反向5’-CACCATTGGCAATGAGCGGTTC-3’；SNHG1，正向5’-AACTTCCCATAACTCCACTTC-3’，反向5’-ACAACCAACACAGCAACAC-3’；miR-145-5p，正向5’-TCGGCAGGGTCCAGTTTTCCCA-3’，反向5’-CTCAAC TGGTGTCGTGGA-3’；U6，正向5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，反向5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’。

1.2.3 CCK-8检测细胞增殖

将各组H9c2细胞以1×10⁴/孔的密度接种到96孔板中，培养48 h后，将10 μL CCK-8试剂添加到96孔板的每个孔中，将96孔板在37 ℃下孵育1.5 h，使用酶标仪在450 nm处读取光密度值(optical density，OD)。

1.2.4 流式细胞术检测H9c2细胞凋亡

将各组H9c2细胞用预冷的PBS洗涤2次，重悬于1×结合缓冲液中，然后在室温下依次与5 μL Annexin V-FITC、5 μL碘化丙啶在黑暗条件下孵育5 min。使用流式细胞仪检测细胞凋亡。

1.2.5 试剂盒检测H9c2细胞中SOD活性、MDA含量

按照试剂盒说明书检测H9c2细胞中SOD活性、MDA含量。

1.2.6 Western blotting检测H9c2细胞中PDCD4、Bcl-2、caspase 3、Bax蛋白表达

RIPA裂解缓冲液裂解H9c2细胞并提取蛋白质，蛋白质经定量、电泳、转膜、封闭后，将膜与一抗PDCD4 (1∶2 000)、Bcl-2 (1∶2 000)、caspase 3 (1∶2 000)、Bax (1∶1 000)、GAPDH (1∶2 000) 在4 ℃下孵育过夜。随后，将膜与辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗(1∶1 000) 在室温下孵育1 h，再次用TBST缓冲液洗涤膜3次，加入ECL试剂，观察蛋白质条带，使用ImageJ分析蛋白灰度值。

1.2.7 双荧光素酶报告基因实验

分别构建SNHG1野生型质粒(SNHG1-WT) 和突变型质粒(SNHG1- MUT)，将SNHG1-WT和SNHG1-MUT分别与mimic NC或miR-145-5pmimic共转染于H9c2细胞，48 h后观察荧光素酶活性变化。

分别构建PDCD4野生型质粒(PDCD4-WT) 和突变型质粒(PDCD4-MUT)，将PDCD4-WT和PDCD4-MUT分别与mimic NC或miR-145-5pmimic共转染于H9c2细胞，48 h后观察荧光素酶活性变化。

1.3 统计学分析

采用SPSS 22.0软件处理数据。计量资料以x±s表示，多组数据的比较采用单因素方差分析，进一步2组数据的比较采用SNK-q检验。P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 各组H9c2细胞中SNHG1、miR-145-5p、PDCD4蛋白表达比较

与NC组比较，H/R组H9c2细胞中SNHG1、PDCD4蛋白表达升高，miR-145-5p表达降低(P < 0.05)。与H/R组、si-NC组比较，si-SNHG1组H9c2细胞中SNHG1、PDCD4蛋白表达降低，miR-145-5p表达升高(P < 0.05)。与H/R组、mimic NC组比较，miR-145-5p mimic组H9c2细胞中SNHG1表达变化的差异无统计学意义(P > 0.05)，miR-145-5p表达升高，PDCD4蛋白表达降低(P < 0.05)。与si-SNHG1组、si-SNHG1+inhibitor NC组比较，si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组H9c2细胞中SNHG1表达变化的差异无统计学意义(P > 0.05)，miR-145-5p表达降低，PDCD4蛋白表达升高(P < 0.05)。见图 1、表 1。

1, NC group; 2, H/R group; 3, si-NC group; 4, si-SNHG1 group; 5, mimic NC group; 6, miR-145-5p mimic group; 7, si-SNHG1+inhibitor NC group; 8, si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor group. 图 1 Western blotting检测各组细胞中PDCD4蛋白的表达 Fig.1 PDCD4 protein expression detected by Western blotting in each study group

图选项

表 1 各组细胞中SNHG1、miR-145-5p、PDCD4蛋白表达比较(n = 6) Tab.1 Cellular expressions of SNHG1, miR-145-5p, and PDCD4 protein by study group (n = 6)

Group	SNHG1	miR-145-5p	PDCD4
NC	1.00 ±0.00	1.00 ±0.00	0.35 ±0.03
H/R	2.32 ±0.16¹⁾	0.21 ±0.02¹⁾	1.54 ±0.13¹⁾
si-NC	2.30 ±0.14	0.22 ±0.01	1.56 ±0.14
si-SNHG1	1.26 ±0.13^2)，3)	0.83 ±0.07^2)，3)	0.62 ±0.05^2)，3)
mimic NC	2.31 ±0.15	0.20 ±0.01	1.53 ±0.11
miR-145-5p mimic	2.29 ±0.13	0.96 ±0.08^2)，5)	0.51 ±0.04^2)，5)
si-SNHG1+inhibitor NC	1.24 ±0.12	0.85 ±0.08	0.60 ±0.04
si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor	1.23 ±0.11	0.33 ±0.03^4)，6)	1.12 ±0.08^4)，6)
1) P < 0.05 vs NC group；2) P < 0.05 vs H/R group；3) P < 0.05 vs si-NC group；4) P < 0.05 vs si-SNHG1 group；5) P < 0.05 vs mimic NC group；6) P < 0.05 vs si-SNHG1+inhibitor NC group.

表选项

2.2 各组H9c2细胞增殖能力比较

NC组、H/R组、si-NC组、si-SNHG1组、mimic NC组、miR-145-5p mimic组、si-SNHG1+inhibitor NC组、si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组H9c2细胞OD₄₅₀值分别为0.87±0.07、0.31±0.02、0.29±0.01、0.69±0.05、0.30±0.03、0.72±0.06、0.70±0.06、0.38±0.03。与NC组比较，H/R组H9c2细胞OD₄₅₀值降低(P < 0.05)；与H/R组、si-NC组比较，si-SNHG1组H9c2细胞OD₄₅₀值升高(P < 0.05)；与H/R组、mimic NC组比较，miR-145-5p mimic组H9c2细胞OD₄₅₀值升高(P < 0.05)；与si-SNHG1组、si-SNHG1+inhibitor NC组比较，si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组H9c2细胞OD₄₅₀值降低(P < 0.05)。

2.3 各组H9c2细胞凋亡能力比较

NC组、H/R组、si-NC组、si-SNHG1组、mimic NC组、miR-145-5p mimic组、si-SNHG1+inhibitor NC组、si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组H9c2细胞凋亡率分别为(3.79±0.14) %、(18.86±1.15) %、(18.72±1.12) %、(6.78±0.34) %、(18.80±1.07) %、(5.49±0.26) %、(6.69±0.29) %、(13.34±1.17) %。与NC组比较，H/R组H9c2细胞凋亡率升高(P < 0.05)；与H/R组、si-NC组比较，si-SNHG1组H9c2细胞凋亡率降低(P < 0.05)；与H/R组、mimic NC组比较，miR-145-5p mimic组H9c2细胞凋亡率降低(P < 0.05)；与si-SNHG1组、si-SNHG1+inhibitor NC组比较，si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组H9c2细胞凋亡率升高(P < 0.05)。见图 2。

A, NC group; B, H/R group; C, si-NC group; D, si-SNHG1 group; E, mimic NC group; F, miR-145-5p mimic group; G, si-SNHG1+inhibitor NC group; H, si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor group. 图 2 流式细胞术检测H9c2细胞凋亡 Fig.2 H9c2 cell apoptosis detected by flow cytometry

图选项

2.4 各组H9c2细胞中SOD活性、MDA含量比较

与NC组比较，H/R组H9c2细胞中SOD活性降低，MDA含量升高(P < 0.05)；与H/R组、si-NC组比较，si-SNHG1组H9c2细胞中SOD活性升高，MDA含量降低(P < 0.05)；与H/R组、mimic NC组比较，miR-145-5pmimic组H9c2细胞中SOD活性升高，MDA含量降低(P < 0.05)；与si-SNHG1组、si-SNHG1+inhibitor NC组比较，si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组H9c2细胞中SOD活性降低，MDA含量升高(P < 0.05)。见表 2。

表 2 各组H9c2细胞中SOD活性、MDA含量比较(n = 6) Tab.2 SOD activity and MDA content of H9c2 cells by study group (n = 6)

Group	SOD (U/mL)	MDA (mmol/mL)
NC	68.83 ±2.34	322.27 ±14.42
H/R	17.74 ±0.86¹⁾	754.66 ±32.24¹⁾
si-NC	17.65 ±0.82	758.81 ±31.77
si-SNHG1	49.66 ±2.55^2)，3)	382.24 ±16.64^2)，3)
mimic NC	17.42 ±0.73	760.63 ±33.44
miR-145-5p mimic	53.36 ±2.75^2)，5)	359.91 ±14.43^2)，5)
si-SNHG1+inhibitor NC	50.51 ±2.48	380.33 ±15.59
si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor	30.22 ±1.51^4)，6)	576.34 ±27.72^4)，6)
1) P < 0.05 vs NC group；2) P < 0.05 vs H/R group；3) P < 0.05 vs si-NC group；4) P < 0.05 vs si-SNHG1 group；5) P < 0.05 vs mimic NC group；6) P < 0.05 vs si-SNHG1+inhibitor NC group.

表选项

2.5 各组H9c2细胞中Bax、Bcl-2、caspase 3蛋白表达比较

与NC组比较，H/R组H9c2细胞中Bax、caspase 3蛋白表达升高，Bcl-2蛋白表达降低(P < 0.05)；与H/R组、si-NC组比较，si-SNHG1组H9c2细胞中Bax、caspase 3蛋白表达降低，Bcl-2蛋白表达升高(P < 0.05)；与H/R组、mimic NC组比较，miR-145-5p mimic组H9c2细胞中Bax、caspase 3蛋白表达降低，Bcl-2蛋白表达升高(P < 0.05)；与si-SNHG1组、si-SNHG1+inhibitor NC组比较，si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor组H9c2细胞中Bax、caspase 3蛋白表达升高，Bcl-2蛋白表达降低(P < 0.05)。见图 3、表 3。

1, NC group; 2, H/R group; 3, si-NC group; 4, si-SNHG1 group; 5, mimic NC group; 6, miR-145-5p mimic group; 7, si-SNHG1+inhibitor NC group; 8, si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor group. 图 3 Western blotting检测各组细胞中Bax、Bcl-2、caspase 3蛋白的表达 Fig.3 Bax, Bcl-2, and caspase 3 protein expression detected by Western blotting by study group

图选项

表 3 各组H9c2细胞中Bax、Bcl-2、caspase 3蛋白表达比较(n = 6) Tab.3 Bax, Bcl-2, and caspase 3 protein expression of H9c2 cells by study group (n = 6)

Group	Bax/GAPDH	Bcl-2/GAPDH	caspase 3/GAPDH
NC	0.27 ±0.02	1.32 ±0.11	0.32 ±0.03
H/R	0.95 ±0.08¹⁾	0.42 ±0.04¹⁾	1.43 ±0.12¹⁾
si-NC	0.97 ±0.09	0.44 ±0.03	1.45 ±0.11
si-SNHG1	0.38 ±0.03^2)，3)	0.97 ±0.08^2)，3)	0.59 ±0.04^2)，3)
mimic NC	0.96 ±0.07	0.43 ±0.03	1.44 ±0.10
miR-145-5p mimic	0.35 ±0.02^2)，5)	1.13 ±0.10^2)，5)	0.67 ±0.05^2)，5)
si-SNHG1+inhibitor NC	0.39 ±0.02	0.99 ±0.08	0.60 ±0.05
si-SNHG1+miR-145-5p inhibitor	0.65 ±0.05^4)，6)	0.68 ±0.05^4)，6)	0.96 ±0.08^4)，6)
1) P < 0.05 vs NC group；2) P < 0.05 vs H/R group；3) P < 0.05 vs si-NC group；4) P < 0.05 vs si-SNHG1 group；5) P < 0.05 vs mimic NC group；6) P < 0.05 vs si-SNHG1+inhibitor NC group.

表选项

2.6 SNHG1靶向调控miR-145-5p/PDCD4轴

在Starbase (http://starbase.sysu.edu.cn/)、Target Scan (https://www.targetscan.org/vert_72/) 网站分别预测lncRNA SNHG1与miR-145-5p、miR-145-5p与PDCD4的结合位点，见图 4。与mimic NC和SNHG1-WT共转染组比较，miR-145-5p mimic和SNHG1-WT共转染组的荧光素酶活性降低(分别为1.05±0.12和0.23±0.01，P < 0.05)；与mimic NC和SNHG1-MUT共转染组比较，miR-145-5p mimic和SNHG1-MUT共转染组荧光素酶活性无显著变化(分别为1.03±0.11和1.02±0.10，P > 0.05)；与mimic NC和PDCD4-WT共转染组比较，miR-145-5p mimic和PDCD4-WT共转染组的荧光素酶活性降低(分别为1.03±0.10和0.29±0.02，P < 0.05)；与mimic NC和PDCD4-MUT共转染组比较，miR-145-5p mimic和PDCD4-MUT共转染组荧光素酶活性无显著变化(分别为0.97±0.08和1.01±0.09，P > 0.05)。

图 4 Starbase、TargetScan网站分别预测lncRNA SNHG1与miR-145-5p、miR-145-5p与PDCD4的结合位点 Fig.4 Binding sites of lncRNA SNHG1 and miR-145-5p as well as of miR-145-5p and PDCD4 predicted at Starbase and TargetScan websites

图选项

3 讨论

AMI是冠状动脉急性闭塞引起的心肌损伤，严重威胁人类生命健康。尽管AMI的诊断和治疗在过去几十年中有所进展，但全世界其发病率和死亡率仍在上升^[7]。因此，早期发现和干预对于减少心肌损伤和改善患者预后是必要的。

SNHG1是一种新发现的lncRNA，研究^[8]报道，沉默SNHG1可抑制脓毒症小鼠心肌损伤；敲低SNHG1可抑制脂多糖诱导的PC12细胞凋亡^[9]。以上研究表明，SNHG1在调控细胞凋亡和心肌损伤方面具有重要作用。SOD和MDA是氧化应激的标志物；Bax、Bcl-2、caspase 3是常用于评估细胞凋亡的蛋白，Bcl-2是一种抗凋亡蛋白，而Bax、caspase 3是促凋亡效应蛋白。本研究显示，SNHG1在H/R诱导的H9c2细胞中高表达，沉默SNHG1可抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡和氧化应激，提示SNHG1可能是治疗AMI的潜在有效靶点。

lncRNA可通过海绵化微RNA (microRNA，miRNA) 发挥作用。本研究通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验，证实SNHG1与miR-145-5p存在靶向关系。miR-145-5p作为一种miRNA，已有研究报道，下调miR-145-5p可加重心肌梗死小鼠心肌损伤^[10]，过表达miR-145-5p可减轻心肌缺血/再灌注损伤中的细胞凋亡^[11]。以上研究表明，miR-145-5p在AMI进展中发挥重要调控作用。本研究结果与上述研究结果一致，本研究显示，miR-145-5p在H/R诱导的H9c2细胞中低表达，过表达miR-145-5p可抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡和氧化应激。此外，本研究还发现沉默SNHG1可上调H/R诱导的H9c2细胞中miR-145-5p表达，推测沉默SNHG1可能通过上调miR-145-5p抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡和氧化应激。为了验证这一推测，本研究在沉默SNHG1的基础上应用miR-145-5p inhibitor干预H/R诱导的H9c2细胞，结果显示，miR-145-5p inhibitor减弱了沉默SNHG1对H/R诱导的H9c2细胞凋亡和氧化应激的影响。本研究证实了这一推测，即沉默SNHG1可能通过上调miR-145-5p抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡和氧化应激。

miRNA是一类非编码RNA，通过与其靶基因mRNA的3’非翻译区结合，在转录后水平负调控基因表达。本研究证实了PDCD4为miR-145-5p的靶基因。PDCD4基因定位于染色体10q24上^[12]。研究显示，沉默PDCD4能够减弱H/R诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤^[13]，抑制PDCD4可抑制阿霉素诱导的大鼠心肌细胞凋亡^[14]。以上研究表明，PDCD4在调控心肌细胞凋亡和氧化应激方面发挥重要作用。本研究显示，PDCD4蛋白在H/R诱导的H9c2细胞中高表达，沉默SNHG1后，H/R诱导的H9c2细胞中miR-145-5p表达升高，而PDCD4蛋白表达降低，双荧光素酶报告基因实验证实了SNHG1与miR-145-5p、miR-145-5p与PDCD4存在靶向关系。证实了沉默SNHG1可能通过调控miR-145-5p/PDCD4轴，抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡和氧化应激。

综上所述，沉默SNHG1可能通过上调miR-145-5p来抑制PDCD4表达，进而抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡和氧化应激。本研究尚存在不足之处，仅进行了体外实验，未进行体内实验探究SNHG1对H/R诱导的H9c2细胞凋亡的影响，后期将进行进一步体内研究。

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