2025, Vol. 36扩展功能
文章信息
- 张军玉, 李丽华, 陈润, 袁丽容, 杨文志, 詹红梅, 曾芬, 杨淑娟, 彭燕, 陈小娟, 周红宁, 高国一
- ZHANG Jun-yu, LI Li-hua, CHEN Run, YUAN Li-rong, YANG Wen-zhi, ZHAN Hong-mei, ZENG Fen, YANG Shu-juan, PENG Yan, CHEN Xiao-juan, ZHOU Hong-ning, GAO Guo-yi
- 云南省景洪市2023年登革病毒基因型分析
- Analysis of genotypic characteristics of dengue viruses in Jinghong, Yunnan Province, China, 2023
- 中国媒介生物学及控制杂志, 2025, 36(2): 148-152
- Chin J Vector Biol & Control, 2025, 36(2): 148-152
- 10.11853/j.issn.1003.8280.2025.02.002
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文章历史
- 收稿日期: 2024-10-17
2 西双版纳傣族自治州人民医院感染性疾病科, 云南 景洪 666100;
3 昆明理工大学生命科学与技术学院, 云南 昆明 650500;
4 昆明医科大学公共卫生学院, 云南 昆明 650500;
5 云南省热带传染病国际联合实验室, 云南省虫媒传染病防控研究重点实验室, 云南省寄生虫病防治所, 云南 普洱 665000
2 Department of Infectious Diseases, Xishuangbanna Dai Autonomous Prefecture People's Hospital, Jinghong, Yunnan 666100, China;
3 Faculty of Life Science and Technology, Kunming University of Science and Technology, Kunming, Yunnan 650500, China;
4 College of Public Health, Kunming Medical University, Kunming, Yunnan 650500, China;
5 Yunnan International Joint Laboratory of Tropical Infectious Diseases, Yunnan Provincial Key Laboratory of Vector-borne Diseases Control and Research, Yunnan Institute of Parasitic Diseases, Pu'er, Yunnan 665000, China
登革热是一种由携带有登革病毒（Dengue virus，DENV）的伊蚊（Aedes）叮咬人群传播的虫媒传染病，DENV分为4个血清型（DENV 1－4）。感染DENV后，患者可出现发热、头痛、眼眶后疼痛、关节肌肉疼痛、乏力、皮疹、出血等非特异性临床症状，严重者出现登革出血热（dengue hemorrhagic fever，DHF）和登革热休克综合征（dengue shock syndrome，DSS），甚至死亡[1]。登革热目前已在全球128个国家流行，39亿人面临感染DENV的风险，已成为全球重要的公共卫生问题之一[2]。在我国，自1978年广东省佛山市首次暴发登革热疫情以来，登革热流行范围逐渐扩散，目前主要分布在广东、云南、浙江、福建省等地区[3]。云南省景洪市位于西南边境地区，气候温暖、空气湿度高和降雨丰富，适合登革热媒介埃及伊蚊（Ae. aegypti）和白纹伊蚊（Ae. albopictus）孳生繁殖，属云南省登革热暴发疫情的重点地区[4]。据报道，2013－2020年景洪市登革病例数高达7 234例，特别是2019年，该市共报道3 355例[4-5]。新型冠状病毒感染疫情（新冠疫情）期间，通过严格的陆地边境跨境人群管控，该市仅有少许登革热输入病例报道，但随着2023年新冠疫情乙类乙管，边境口岸开放，跨境人群大量涌入，出现了历史上较大的登革热暴发疫情，为了解当地DENV基因特征，本研究对2023年景洪市登革热患者进行DENV核酸检测和E基因序列测定及分析，为当地登革热防控提供参考。
1 材料与方法 1.1 样本采集对来自2023年西双版纳傣族自治州（西双版纳）人民医院收治的134例登革热疑似病例的血清进行登革病毒非结构蛋白1（nonstructral 1，NS1）抗原检测，试剂为广州万孚生物技术股份有限公司（中国）生产，20人份/盒，批号：W041311002。阳性患者采集血清1.5 ml，保存在-70 ℃低温冰箱，待实验室核酸检测与病毒分离。该样本釆集均按照云南省寄生虫病防治所伦理委员会要求和与西双版纳人民医院合作协议开展，所有患者均知情同意。
1.2 DENV血清型检测使用苏州优逸兰迪生物科技有限公司（中国）生产的体液病毒DNA/RNA小量制备试剂盒（250反应/盒，批号：231010KC5）对NS1阳性血清样本提取DENV核酸，使用北京卓诚惠生生物科技股份有限公司（中国）生产的登革病毒（DENV 1－4）四重核酸实时荧光PCR检测试剂盒（50反应/盒，批号：T202312020）确定DENV血清型。
1.3 病毒分离培养参照中国疾病预防控制中心《登革热实验室检测指南》[6]的方法，将DENV核酸阳性样本接种于非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）进行培养，盲传3代，收集具有细胞病变的上清液。
1.4 登革病毒E基因检测将收集到的上清液分离和提取DENV核酸。按照Lin等[7]设计的E基因特异性引物：D1-EF（5′-GATTCACGGTGATAGCCCTT-3′）和D1-ER（5′-GCTCTGTCCAGGTGTGGACT-3′），由生工生物工程（上海）股份有限公司合成；采用宝生物工程（大连）有限公司（日本）生产的一步法反转录-聚合酶链式反应试剂（50反应/袋，批号：AN70421A）扩增出DENV E基因，然后吸取PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳。
1.5 登革病毒E基因测序与分析将PCR阳性扩增产物送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序，将测序结果采用DNAStar 7.0软件进行剪切、拼接和比对，使用MEGA 11.0软件进行分析。
2 结果 2.1 NS1抗原检测及核酸检测对2023年7月13日－2023年8月4日入院的患者进行血清样本采集，临床资料显示此次样本采集对象均无外出旅居史，属本地感染病例。共采集134份疑似登革热血清样本，其中DENV核酸阳性127份，血清型均为DENV-1。
2.2 病毒分离及基因型鉴定经细胞培养盲传3代获得13株DENV-1，见表 1。13株DENV-1的E基因序列与GenBank中不同时间、国家和地区的包含DENV-1中Ⅰ－Ⅴ基因型的27株代表株核苷酸序列构建系统发育树，此次获得的DENV-1株被划分在G-Ⅰ型，同时发现该13株DENV-1与2023年广州（PP563955.1）和瑞丽（RL23-83）流行株同属一个分支，亲缘关系最近，见图 1。13株DENV-1基因序列之间核苷酸相似性为99.90%~100%，与2023年广州市（PP563955.1）、云南省瑞丽市（RL23-83）和耿马傣族佤族自治县（耿马县）孟定镇（MD23-13）DENV-1株基因相似性分别为99.90%~100%、99.90%和99.30%~99.40%；与2017年和2018年西双版纳（MF681692.1、MN123810.1）和2019年景洪市（OP919578.1）DENV-1（G-Ⅰ）核苷酸相似性为96.80%~98.40%；与2019年柬埔寨（OQ678099.1）和印度尼西亚（ON584400.1）流行株核苷酸相似性为99.00%~99.10%，见表 2。本次获得的13株DENV-1 E基因序列均上传至GenBank，获得的GenBank号为PQ571785－PQ571797。
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| 注：●为本次研究毒株，▲为本次引用的2023年瑞丽市和耿马傣族佤族自治县孟定镇的登革病毒流行株。 图 1 云南省景洪市2023年13株登革病毒E基因进化树 Figure 1 Phylogenetic tree based on the envelope genes of 13 dengue virus strains in Jinghong, Yunnan Province, 2023 |
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在过去50年中，登革热的发病人数增长了30倍，每年约有3.9亿人感染登革热，给全球造成巨大的社会经济和疾病负担，2019年被世界卫生组织列为全球健康十大威胁之一，2024年8月又将其列入可能引发下一次大流行的最新病原体[8-11]。张荣兵等[11]报道2023年云南省登革热病例13 748例，其中景洪市报告病例3 045例，占全省登革热病例的16.71%，病例分布以城区和口岸为主、多点输入、多点暴发的态势呈现，当地疫情防控形势愈加严峻。
既往研究显示，云南省DENV4种血清型均有流行，景洪市2013、2015、2017－2019年暴发的登革热疫情主要血清型分别为DENV-3、DENV-2、DENV-1、DENV-1和DENV-1[4, 12-17]。全球DENV-1已发现5个基因型（G-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ），其中G-Ⅰ是东南亚DENV-1的主要流行优势基因型，也是2000年以来在我国华南地区DENV-1暴发疫情中较常见的基因型[18-19]。在云南省边境地区景洪市，2017年DENV-1首次出现暴发疫情，此后景洪市登革热暴发疫情也主要由DENV-1（G-Ⅰ）引起[15-17]。本次调查也发现，2023年景洪市登革热疫情DENV仍以DENV-1（G-Ⅰ）为主，与2017年西双版纳（MF681692.1）、2018年西双版纳（MN123810.1）和2019年景洪（OP919578.1）DENV-1（G-Ⅰ）核苷酸相似性仍有一定差异（相似性为96.80%~98.40%），提示景洪市DENV-1（G-Ⅰ）可能还未出现本地化的趋势，相关部门应进一步加强登革热病例监测及其处置，防止DENV-1本地化的发生。
在本研究中，13株DENV-1与2023年瑞丽市和广州市DENV-1株高度聚集成同一分支，亲缘关系最近，核苷酸高度相似（99.90%~100%），但与2023年耿马县孟定镇DENV-1亲缘关系相对较远（核苷酸相似性99.30%~99.40%），提示2023年景洪、瑞丽和广州市DENV-1可能为同一来源。建议景洪市相关部门应进一步加强对登革热输入病例的监测以及时发现病例，尽早隔离治疗和早期处置，防止疫情蔓延。
利益冲突 无
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