2024, Vol. 35扩展功能
文章信息
- 高翔, 田纪景, 张伟伟, 张龙飞, 赵红庆
- GAO Xiang, TIAN Ji-jing, ZHANG Wei-wei, ZHANG Long-fei, ZHAO Hong-qing
- 北京市某区家庭饲养的猫、犬伴侣动物中动物源病原体调查
- Survey of animal-borne pathogens among companion animals of cats and dogs kept in households in a district of Beijing, China
- 中国媒介生物学及控制杂志, 2024, 35(6): 740-743
- Chin J Vector Biol & Control, 2024, 35(6): 740-743
- 10.11853/j.issn.1003.8280.2024.06.021
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文章历史
- 收稿日期: 2024-05-14
2 中国农业大学动物医学院, 兽医公共卫生安全全国重点实验室, 北京 100193;
3 美联众合京西动物医院, 北京 100071;
4 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所, 北京, 102206
2 College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, National Key Laboratory of Veterinary Public Health and Safety, Beijing 100193, China;
3 Meilian Zhonghe Jingxi Animal Hospital, Beijing 100071, China;
4 Institute of Communicable Disease Prevention and Control, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China
随着经济的发展和城市人口生活水平的提高，猫、犬等伴侣动物已成为人们家庭中的重要成员。据《2023－2024年中国宠物行业白皮书》[1]显示，2023年我国宠物犬数量为5 175万只，宠物猫数量为6 980万只。这些数目庞大的伴侣动物随之也带来了一定的公共卫生风险。一方面，猫、犬等伴侣动物是蜱、蚤、螨等吸血节肢动物的宿主，从而可感染多种虫媒病原体并成为其宿主，如立克次体（Rickettsia）、无形体（Anaplasma）、大别班达病毒（Dabie bandavirus）等[2-3]。另一方面，猫、犬自身也可感染和携带多种动物源病原体，如狂犬病毒（Rabies virus）、巴尔通体（Bartonella）、布鲁氏菌（Brucella）、巴贝虫（Babesia）等[4-6]。如2016年Malheiros等[7]用染色血涂片、酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、PCR等手段在巴西南部的猫、犬等动物中检测到了犬埃里克体（Ehrlichia canis）、韦氏巴贝虫（Bab. vogeli）、无形体、肝簇虫（Hepatozoon spp.）等病原体；Bessas等[8]在阿尔及利亚的猫、犬中检出了贝纳柯克斯体（Coxiella burnetii）、汉赛巴尔通体（Bar. henselae）、犬埃里克体等。在我国，Shao等[9]在宠物犬中检测到了劳氏立克次体（R. raoultii）、塔拉塞维奇立克次体（Candidatus Rickettsia tarasevichiae）和猫立克次体（R. felis）这3种可感染人的立克次体。这些虫媒和动物源病原体在感染伴侣动物的同时，也可能通过动物与人的密切接触导致人感染。
北京是我国的政治、文化和国际交往中心，人口稠密。同时，北京也是我国伴侣动物数量最多的城市。为了解北京市丰台区伴侣动物中可能携带的虫媒和动物源病原体，发现其公共卫生风险并采取预防控制措施，本研究在北京市丰台区采集了家养猫、犬类伴侣动物血液样本，并用分子生物学方法对其中的部分病原体进行了检测。
1 材料与方法 1.1 样本采集2022年3－7月，在北京市丰台区宠物医院收集家养宠物猫和犬的血液全血样本并记录相关流行病学信息。血样用EDTA抗凝管保存，置于-20 oC冻存备用。
1.2 血液DNA提取使用医脉赛科技公司的磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒，用Thermo Scientific KingFisher Flex全自动核酸提取仪进行血液DNA提取。提取完成后用Thermo Fisher Scientific公司的Nanodrop微量分光光度计进行DNA浓度测定。
1.3 立克次体检测选择16S rRNA基因序列为目标基因进行半巢式PCR[10]，目标片段长900 bp左右。第1轮PCR反应参数为：94 ℃预变性3 min；94 ℃变性40 s，50 ℃退火40 s，72 ℃延伸70 s，35个循环；72 ℃延伸5 min。第2轮PCR以2 μl第1轮PCR产物为模板，反应参数为：94 ℃预变性3 min；94 ℃变性40 s，50 ℃退火40 s，72 ℃延伸60 s，35个循环；72 ℃延伸5 min。用劳氏立克次体DNA作为阳性对照，用蒸馏水作为阴性对照。1.0%凝胶电泳观察，将符合预期条带大小的阳性样本送生工生物工程（上海）股份有限公司进行双向测序。
1.4 无形体科细菌检测选择16S rRNA基因序列为目标基因进行巢式PCR[10]检测无形体、埃立克体等，目标片段长500 bp左右。PCR反应参数和电泳、测序见立克次体检测，第1轮和第2轮延伸时间分别调整为60 s和40 s，用牛无形体（A. bovis）DNA作为阳性对照，用蒸馏水作为阴性对照。
1.5 巴尔通体检测以柠檬酸合成酶基因（gltA）为目标基因进行巢式PCR[11]，目标片段长340 bp左右。PCR反应参数和电泳、测序见立克次体检测，第1轮PCR退火温度调整为48 oC，72 ℃延伸60 s，第2轮PCR退火温度调整为48 oC，72 oC延伸40 s。用巴尔通体DNA作为阳性对照，用蒸馏水作为阴性对照。
1.6 柯克斯体检测选择16S rRNA基因序列为目标基因进行巢式PCR[11]，目标片段长550 bp左右。PCR反应参数和电泳、测序见立克次体检测，第1轮PCR退火温度调整为45 oC，72 ℃延伸60 s；第2轮PCR退火温度调整为45 oC，72 oC延伸40 s。用长角血蜱（Haemaphysalis longicornis）中的柯克斯体内共生体（Coxiella-like endosymbionts）DNA作为阳性对照，用蒸馏水作为阴性对照。
1.7 巴贝虫与泰勒虫（Theileria）检测选择18S rRNA基因序列为目标基因进行巢式PCR[12]，目标片段长650 bp左右。第1轮和第2轮延伸时间分别调整为60 s和50 s，用弩巴贝虫（Bab. microti）和东方泰勒虫（T. orientalis）DNA作为阳性对照，用蒸馏水作为阴性对照。
2 结果 2.1 样本采集与DNA提取共收集猫、犬血液样本95份，其中猫33份（包括雌性猫7份，雄性24份，2份无记录），犬62份（包括雌性犬29份，雄性31份，2份无记录）。其中体检/绝育/外伤/牙结石/糖尿病等无感染性症状者40份，有呼吸道、消化道、体表等疑似感染性症状者54份，无症状记录1份。
经Nanodrop微量分光光度计测定，所提取DNA浓度在10~20 ng/μl，A260 nm/A280 nm比值均在1.8~2.0，提取核酸质量和纯度均合格。
2.2 立克次体与无形体科细菌检测凝胶电泳结果显示，劳氏立克次体阳性对照、牛无形体阳性对照分别在900 bp、500 bp左右出现明亮单一条带，而95份血液DNA均无符合预期大小的条带，样本中立克次体与无形体科细菌均为阴性。见表 1。
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凝胶电泳结果显示，巴尔通体阳性对照、柯克斯体阳性对照分别在340、550 bp左右出现明亮单一条带，而95份血液DNA均无符合预期大小的条带，样本中巴尔通体与柯克斯体均为阴性。见表 1。
2.4 巴贝虫与泰勒虫检测凝胶电泳结果显示，弩巴贝虫阳性对照、东方泰勒虫阳性对照分别在650 bp左右出现明亮单一条带，而95份血液DNA均无符合预期大小的条带，样本中巴贝虫与泰勒虫均为阴性。见表 1。
3 讨论在既往研究中，我国各大城市的猫、犬等伴侣动物均有感染和携带多种虫媒和动物源病原体的记录。2019年Hussain等[13]在中国香港地区的猫、犬中检测到了嗜吞噬细胞无形体（A. phagocytophilum）、犬埃里克体、吉氏巴贝虫（Bab. gibsoni）和犬恶丝虫（Dirofilaria immitis）；2019年Shi等[14]发现犬可作为人类致病病原体山羊无形体（A. capra）的新宿主；2024年Jian等[15]在天津的猫、犬中发现了包括劳氏立克次体、敬信立克次体（Candidatus Rickettsia jingxinensis）、猫立克次体、西伯利亚立克次体（R. sibirica）、绵羊无形体（A. ovis）、猎户巴贝虫（Bab. venatorum）、汉赛巴尔通体在内的多种人类病原体。
基于以上结果，本研究重点调查了北京市丰台区家养猫、犬等伴侣动物中较为常见的的6大类虫媒和动物源病原体，即立克次体（斑点热、斑疹伤寒等的病原体）、无形体科细菌（包括无形体、埃里克体等，是人粒细胞无形体病和人单核细胞埃里克体病病原体）、柯克斯体（Q热病原体）、巴尔通体（猫抓病、五日热等病原体）、巴贝虫及泰勒虫。根据巢式/半巢式PCR和凝胶电泳结果，本研究在丰台区采集的95份家养猫、犬血液样本中均未检出以上任何一种病原体。本研究中涉及样本除14例为手术后复查宠物外（用药史不详），其余宠物均为首次就诊，并于用药前采样，因此药物对检测结果影响有限，本研究所获得结果可反映宠物中上述病原体的真实携带情况。由于此前北京地区针对伴侣动物中以上病原体携带情况的研究较少，仅2015年黄儒婷等[16]调查了北京市宠物猫和流浪猫中的巴尔通体，其血培养阳性率分别为4.8%和30.4%，遗传分析表明检出的巴尔通体均为汉赛巴尔通体（猫抓病病原体）。推测此次阴性结果可能有以下2种原因：一是本次采集的猫、犬均为家庭饲养的宠物，宠物主人对其卫生及疾病情况较为关注，加之近年来北京市丰台区宠物管理较为严格规范，免疫接种、预防性用药等措施落实到位。如2003年出台的《北京市养犬管理规定》[17]第二十一条要求，销售的犬有动物健康免疫证和检疫证明、不得将养殖的犬带出饲养场地。这些措施使得北京市家养宠物中携带虫媒和动物源病原体阳性率较低；二是本研究采样位置较为单一，样本总量不够大，又未覆盖远郊区县等地区和流浪猫、犬等类型动物，从而导致阳性率偏低。综上所述，本研究结果显示，北京市丰台区家庭喂养的伴侣动物携带和传播立克次体、无形体科、柯克斯体、巴尔通体等虫媒和动物源病原体的风险较低。需要注意的是，此次检测的阴性结果并不能完全排除伴侣动物传播虫媒和动物源病原体的风险。一方面，对于某些病原体，使用PCR方法检测全血样本DNA不一定是最合适的检测手段。以引起Q热的贝纳柯克斯体为例，猫往往在分娩时才会排出大量活菌，而外观正常的宠物猫血液中贝纳柯克斯体载量较低，PCR方法准确性不高，其检测多采用血清学方法；另一方面，随着网络交易的频繁，跨地区间的宠物交易也日渐增多，其他地区分布的动物源病原体也极易随宠物交易而跨地区流动。因此，对伴侣动物传播相关疾病仍需保持高度警惕，进一步扩大采样范围开展日常监测；伴侣动物中布鲁氏菌、莱姆病疏螺旋体（Borrelia burgdorferi）、大别班达病毒等其他病原体，也需进一步研究。
利益冲突 无
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