2018, Vol. 48
鮸鱼(nibe croaker)，一作米鱼，敏子、敏鱼，属于鲈形目石首鱼科[1]，中国有着悠久的鱼鳔食用历史，北魏时期的贾思勰所著《齐民要术》中就有加工食用石首鱼鳔的记载。到了唐朝，鱼鳔成为了贡品。在《新唐书·地理志》中记载：吴郡每年贡“压胞(鱼鳔)七斤”。而后到了清朝，鱼鳔列为补品。富有胶质的鱼鳔，与鱼翅、燕窝齐名，是“海洋八珍”之一，有“海洋人参”之誉。鱼鳔不仅是筵席名菜，更是有很高的滋补作用和药用价值，如滋阴养血、止血补血、补肾益精等[2]。现代研究表明鱼鳔的主要营养成分为高级胶原蛋白、粘多糖、多种维生素及钙、锌、铁、硒等多种微量元，蛋白质含量在80%以上，含有较低的而脂肪，是目前最理想的高蛋白低脂肪的食品[3]。多糖是鱼鳔中的有效活性物质之一，虽在鱼鳔中含量低但具有极高的研究价值。目前国内研究鮸鱼鱼鳔多为胶原蛋白及其活性[4-5]，而对于鱼鳔多糖研究的甚少，故本实验研究探索了鱼鳔多糖(polysaccharide of swim bladder in nibe croaker，PSB)的提取方法、单糖组成等理化性质及对小鼠急性肝损伤的保护作用，为进一步开发和研究鮸鱼鱼鳔中的营养成分提供了一定的理论依据。
1 材料与方法 1.1 材料与试剂鮸鱼(购于舟山鱼市场)；联苯双酯(浙江医药股份有限公司新昌制药厂)；橄榄油；丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(SOD)、总一氧化氮合成酶(NOS)测试盒，均购于南京建成生物科技有限公司；四氯化碳(CCl4)、多聚甲醛、单糖标准品(甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、木糖)(中国药品生物制品检定所)，胰蛋白酶(酶活≥50 000，上海源聚生物科技有限公司)、胃蛋白酶(酶活1:3 000，国药集团化学试剂有限公司)其余试剂均为国产分析纯。
1.2 动物、仪器与设备SPF级♂ICR小鼠，体重(22±2)g，购于浙江省医学科学院。许可证号：SCXK(浙)2014-0001。恒温水浴锅HH-1国华电器有限公司；酶标仪iMark；高速离心机TGL-16M (上海卢湘仪仪器有限公司)；冷冻干燥机(美国LABCONCO FreeZone)；1260型高效液相色谱仪(美国Agilent公司); 小鼠普通饲料等。
1.3 鱼鳔多糖提取方法将市场购买的大小相仿的鮸鱼经解剖取出鱼鳔，用剪刀剪至数段后，用2倍体积丙酮浸泡，期间反复的搅拌进行脱脂。将脱脂完全后的鱼鳔置于干燥箱中45 ℃烘干。取干燥后的鱼鳔30 g经粉碎机粉碎过100目筛后置于烧杯中，并加入30倍体积的蒸馏水。然后首先用冰醋酸调节pH至4.5后加入4%胃蛋白酶，37 ℃下提取2 h后再用0.1 mol·L-1 NaOH调节pH至8后加入4%胰蛋白酶[6]，37 ℃下提取2 h，最后用冰醋酸调回至中性，再升温至80 ℃提取1 h将酶灭活。将得到的水提物于8 000 r/min高速离心机离心20 min后留上清液。残渣按上述提取方法再重复提取一次。合并两次所得上清液，经50℃旋转蒸发仪浓缩至原体积的1/10，加入4倍体积无水乙醇醇沉过夜, 然后醇沉物再经过Sevege法反复脱除蛋白，经透析袋(截留分子量3 500 Da)流水透析72 h后，冷冻干燥即得1.5 g淡黄色粉末状鱼鳔多糖。
1.4 单糖组成分析多糖的完全酸水解[7] 准确吸取1.0 mL 2 mol/L的三氟乙酸(Trifluoroacetic acid, TFA)滴入装有5.0 mg的多糖样品的安瓿管中，然后经酒精喷灯封管后置于105 ℃烘箱内水解反应8 h。水解反应完全后将样品用甲醇溶解并转移到鸡心瓶内，用甲醇反复旋蒸以除去样品中TFA，最后转移至离心管中40 ℃烘箱烘干备用。
标准品溶液的配制 干燥至恒重的等摩尔的10种单糖标准品，加入纯水充分溶解，配制成1.0 mg/mL的溶液。采用PMP柱前衍生高效液相色谱法[8]对等摩尔配制的单糖标准品溶液和多糖完全水解后产物进行衍生，最后进行高效液相色谱分析。
色谱条件 色谱柱：KP-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相：PBS(pH=6.7)：乙腈=82:18(V/V)；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：20 μL；检测器：紫外检测器(254 nm)。
1.5 总糖含量测定以甘露糖为标准品，采用硫酸-苯酚法测定总糖含量[9]。
1.6 硫酸基含量测定采用氯化钡-明胶比浊法测定[10]。
1.7 分子量测定采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定。色谱条件：色谱柱：Shodex Ohpak SB-804HQ凝胶色谱柱(300 mm×7.8 mm)；柱温：35 ℃；流动相：0.1 mol/L的Na2SO4；流速：0.5 mL/min；检测器：示差检测器(RID)[11]。以标准葡聚糖分子量的对数(logMw)对色谱保留时间(tR)作图，得标准曲线，计算样品分子量。
1.8 动物分组给药共计60只雄性小鼠，随机分为组，分别标记为药物组(高剂量组、中剂量组、低剂量组)模型组、阳性对照组和正常组共6组。置于校动物房内饲养(室温22~25 ℃，湿度45%~60%)。正常饲养3日后，于每日固定时间11点进行灌胃，其中正常组和模型组分别灌以生理盐水0.4 mL；高、中、低分别灌以200、100和50 mg/(kg·d)的PSB0.4 mL；阳性对照组则灌以0.4 mL的联苯双酯溶液。正常给予饲料、水和光照。连续喂养15 d，在末次给药1 h后，除正常组灌以纯橄榄油外，其余五组小鼠分别灌以0.8% CCl4-橄榄油混合液0.4 mL。造模后禁食不禁水，于12 h后进行摘眼球取血，并制备血清。测定血清中AST、ALT和GSH-PX的活力；取出肝脏，其中每组选取一部分肝脏溶于4%多聚甲醛溶液[12]用来制作肝脏病理组织切片，其余保存于-80℃超低温冰箱内，为制备10%肝脏组织匀浆液[13]用来测定SOD、MDA和NOS含量做准备。
1.9 光学显微镜检查4%多聚甲醛固定的肝脏组织经脱水、石蜡包埋，苏木-伊红染色后，在光学显微镜下观察肝脏组织的形态变化，并拍照记录。
1.10 指标检测方法和数据处理血清中ALT、AST和GSH-PX，肝脏匀浆液的MDA、SOD和NOS得测定方法，均参照南京建成测试盒提供的方法。使用SPSS11.5对所得数据进行统计学处理和分析。
肝脏指数=肝脏质量(mg)/小鼠体重(g)。
2 结果与分析研究表明联苯双酯具有很强的抗氧化作用，能够抑制肝脏的脂质过氧化反应，稳定肝细胞膜表面结构，保护肝组织的结构免受如CCl4等各种致病因子的损伤，明显的抑制肝细胞中AST和ALT的释放[14]。故本实验的阳性对照组选取了联苯双酯作为参照，用来评价PSB对肝脏的保护能力。
2.1 单糖组成分析根据单糖标准品对比可知，鱼鳔多糖由6种单糖组成，分别为甘露糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖和半乳糖组成，其比为1.4:1.2:0.5:2.0:0.1:0.1。通过单糖组成对比可知，鮸鱼鱼鳔多糖应该也属于海洋类糖胺聚糖，氨基半乳糖的比例相对要更高，但是缺乏海洋低等动物中常见的岩藻糖。
|
(1. 甘露糖 mannose；2. 氨基葡萄糖 glucosamine；3. 鼠李糖 rhamnose；4. 葡萄糖醛酸 glucuronic acid；5. 半乳糖醛酸 galactolic acid；6. 氨基半乳糖 galactose；7. 葡萄糖 glucose；8. 半乳糖 galactose；9. 木糖 xylose；10. 岩藻糖 fucose.) 图 1 单糖标准品的PMP柱前衍生液相色谱图 Fig. 1 HPLC chromatogram of the PMP pre-column derivative standard monosaccharides |
|
图 2 PSB的PMP柱前衍生液相色谱图 Fig. 2 HPLC chromatogram of the PMP pre-column derivative PSB |
根据标准曲线计算可知PSB总糖含量为52.4%，硫酸基含量为14.5%。
2.3 分子量测定利用高效凝胶色谱法，测定纯度的同时根据已知分子量的标准品(6.1，9.6，21，47.1，107和194 kD，)的出峰时间即可推算出多糖的分子量。由PSB的高效凝胶色谱图 3可看出，PSB的出峰且呈现单一对称狭窄的峰，表明PSB分子量均一，根据标准曲线y=-0.331 7x+9.840 4计算可知PSB的分子量为89.7 kDa。
|
图 3 PSB的高效凝胶色谱图 Fig. 3 HPGCP chromatogram of PSB |
肉眼观察模型组小鼠肝脏组织与正常肝脏组织对比肝脏表面出现不同程度的紫色瘀斑和肿大；药物组中随着鱼鳔多糖质量浓度的增加肝脏肿胀程度出现明显减轻。且综合表 1可以看出，与正常组小鼠肝脏指数相比，模型组肝脏指数显著增大(P＜0.01)，说明造模成功。除低剂量组外，药物组与模型组对比，肝脏指数均显著下降(P＜0.05或P＜0.01)。阳性药物组与模型组相对比肝脏指数也明显的降低。由此说明鱼鳔多糖能够有效的抑制小鼠出现肝脏肿大，其效果接近于阳性药物组。
|
表 1 PSB对CCl4致小鼠急性肝损伤肝脏指数的影响(x±s，n=10) Table 1 Effect of PSB on liver index of mice suffering from CCl4-induced acute liver injury |
由表 2可知，模型组ALT、AST和GSH-PX的活力与正常组相比显著升高(P＜0.01)。且高剂量组效果与联苯双酯组对比效果接近；与模型组对比高剂量与中剂量药物组显著降低AST活力(P＜0.01)；与模型组对比高、中、低剂量组的GSH-PX含量显著升高(P＜0.01)，且高剂量与中剂量均接近联苯双酯组，说明随着鱼鳔多糖质量浓度的增加保护肝脏的程度也随着增强。
|
|
表 2 PSB对CCl4诱导致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST和GSH-PX的影响(x±s，n=10) Table 2 Effect of PSB on ALT、AST and GSH-PX of serum from CCl4-induced acute liver injury |
由表 3可知，模型组小鼠肝脏MDA含量相比于正常组显著升高(P＜0.01)，而SOD和NOS含量显著降低(P＜0.01)。药物组肝脏中MDA含量相对于模型组皆显著降低(P＜0.01)，肝脏中SOD和NOS含量相比于模型组含量显著升高(P＜0.01)。说明PSB对于肝脏有一定的保护作用，效果接近阳性药物组。
|
|
表 3 PSB对CCl4诱导致急性肝损伤小鼠肝脏MDA、SOD和NOS的影响(x±s，n=10) Table 3 Effect of PSB on MDA、SOD and NOS of liver from CCl4-induced acute liver injury |
由图 4可知，在光学显微镜下A组正常小鼠细胞中央静脉周围肝索排列整齐，如图箭头所指：细胞核大小正常、居中，可见少量双核细胞存在，未见细胞变性、坏死及炎性细胞浸润；B组模型组肝小叶模糊中央静脉附近出现大片的细胞坏死，且细胞核消失，发生气球样变性等；C、D和E药物组肝小叶界限模糊不清，但坏死区域明显减少，有炎性细胞侵润，且随着鱼鳔多糖PSB质量浓度的增加，呈现一定的量效关系；F组阳性药物组细胞未见坏死区域，且细胞核大小正常居中, 可见双核细胞如箭头所示，细胞形态接近于正常组。
|
(A. 正常组 normal group； B. 模型组 model group； C. 低剂量组 low dose group； D. 中剂量组 middle dose group； E. 高剂量组 high dose group； F. 联苯双酯组bifendate tables group.) 图 4 PSB对CCl4诱导小鼠肝脏组织形态改变(HE，x100) Fig. 4 Effect of PSB on hepatic histopathological changes in mice suffering from CCl4-induced acute liver injury(HE, x100) |
由于肝脏是机体重要的代谢器官，具有分泌、排泄和生物转化等功能，在糖类、脂类及蛋白质三大代谢过程中起着重要作用[15]。一旦肝脏出现损伤，机体的整个物质代谢将发生紊乱，继而能够影响到其它器官的功能，甚至出现生命危险。
CCl4作为是一种常用的化学性肝损伤诱导剂，其诱导所致的小鼠出现的肝损伤表现的症状及病理改变特征等与真实的病毒性肝炎类似[16-18]。当肝细胞受到损害时，肝细胞内ALT和AST就会渗入到血液中，使得血清中AST和ALT活性升高[19]。联苯双酯作为我国独立开发的一种肝脏保护药物, 在临床上显示其具有显著的降低肝脏转氨酶作用, 具有良好的保肝效果。综上可知在肝脏的急性损伤方面，联苯双酯确实表现出了明显的保护作用，在ALT和AST活性方面其效果接近于正常组。而鱼鳔多糖组与模型组相比随着浓度的增加，血中AST和ALT活性显著降低，说明鱼鳔多糖具有一定的保护肝脏的作用；谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)能催化GSH变为GSSG是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶，使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物，同时促进H2O2的分解，并消耗体内GSH保护细胞膜的结构及功能免受过氧化物的干扰及损害[20-21]，在实验中可见鱼鳔多糖组可以显著地提高小鼠血液中的GSH-PX的含量，且受鱼鳔多糖的浓度影响。
自由基和脂质过氧化是引发肝损伤重要因素[22-23]，而MDA是脂质过氧化产物，其含量的变化可反映肝细胞的损伤程度[24]。在实验结果中可知模型组相比于正常组MDA的含量显著地提高，说明肝脏受到了一定的损害，造模成功，而鱼鳔多糖组随着浓度的增加可以显著地降低肝脏组织中的MDA含量，从而有效的保护了肝脏免受损害；SOD能够有效清除生物氧化产生的氧自由基是机体内重要的抗氧化酶，从而防止自由基对细胞结构的损伤，其活力的大小可以反映了机体抗氧化和清除自由基的能力[25]。由本实验结果可知联苯双酯组和鱼鳔多糖除低剂量药物组外能都够显著的升高体内SOD的含量，且呈现一定的量效关系；NOS可以参与调节NO生成，是一种一氧化氮合成的限速酶，现已认识到NO不仅是一个有细胞毒性效应器作用的分子，也是组织损伤的诱发因子和各种病变的增强因子，从而能够维持正常的生理功能[26-27]，由本实验结果可知，除低浓度PSB组外，其余各组都能显著提高小鼠体内NOS的含量。各指标结合肝脏组织切片，可以看出随着PSB浓度的增加，呈现一定的量效关系。
3 结语综合以上研究结果，鮸鱼鱼鳔多糖PSB总糖含量为52.4%，硫酸基含量为14.52%。由甘露糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖和半乳糖组成，分子量为89.7 kDa是一种富含氨基糖和糖醛酸的硫酸化杂多糖。目前海洋鱼类鱼鳔多糖还没有研究过，但是海洋动物多糖如扇贝多糖，海参多糖等研究较多。海洋动物多糖主要含有葡聚糖和杂多糖或类糖胺聚糖[28]，通过单糖组成可知，鮸鱼鱼鳔多糖应该也属于海洋类糖胺聚糖，氨基半乳糖的比例相对要更高，但是缺乏海洋低等动物中常见的岩藻糖。且PSB中含有一定量的硫酸基团表明其为部分硫酸化的多糖，而硫酸化修饰也符合了海洋动物多糖的特征[29-30]。
在抗肝损伤的实验中，不论从小鼠血清和肝脏组织的生化指标检测，还是从肝脏组织切片病理学观察来看，都可以看出鮸鱼鱼鳔多糖PSB对CCl4诱导所致的小鼠肝急性损伤具有一定的保护作用，随着鱼鳔多糖质量浓度的增加，肝损伤程度随之降低，说明鱼鳔多糖对小鼠肝脏的保护程度与其剂量有一定相关性。而对于PSB对小鼠肝脏的保护机理，则需要进行更深一步的去研究，同时本文也为以后进一步的研究鮸鱼鱼鳔多糖提供了一定的理论基础。
| [1] |
朱元鼎, 张春霖, 成庆泰, 等. 东海鱼类志[M]. 北京: 科学出版社, 1963, 308. Zhu Y D, Zhang C L, Cheng Q Q, et al. East Sea Fishes[M]. Beijing: Science Press, 1963, 308. (  0) |
| [2] |
段振华, 殷安齐, 贾巧利, 等. 海鱼鱼鳔资源利用研究[J]. 食品研究与开发, 2006(1): 136-137. Duan Z H, Yin A Q, Jia Q L, et al. Utilizationtechnology of marine fish swim bladder[J]. Food Research and Development, 2006, 136-137. ( 0) |
| [3] |
段振华. 鱼鳔加工应用的研究进展[J]. 中国食物与营养, 2009(6): 34-36. Duan Z H. Research progress of swim bladder processing applications[J]. Food and Nutrition in China, 2009(6): 34-36. ( 0) |
| [4] |
陈梅珍. 鮸鱼鳔胶原蛋白的提取及其对小鼠学习记忆的影响[D]. 宁波: 宁波大学, 2011. Chen M Z. The Extraction of Swim Bladder of Miiuy Croaker Collagen And It's Effect on Learning and Memory In Mice[D]. Ningbo: Ningbo University, 2011. ( 0) |
| [5] |
丁冬各, 贺磊, 于晶露, 等. 舟山鮸鱼资源的发展现状及其可持续发展对策[J]. 农村经济与科技, 2016(7): 71-73. Ding D G, He L, Gan J L, et al. Development status of the catfish resources in zhoushan and measures for its sustainable development[J]. Rural Economy and Science-Technology, 2016(7): 71-73. ( 0) |
| [6] |
韩慧敏, 谢安, 罗杰英. 海参多糖提取工艺研究[J]. 湖南中医杂志, 2000, 16(1): 56-57. Han H M, Xie A, Luo J Y. Study on the polysaccharide extraction technology from sea cucumber[J]. Hunan Journal of Traditional Chinese Medicine, 2000, 16(1): 56-57. ( 0) |
| [7] |
董兰芳, 张琴, 许明珠. 方格星虫多糖的分离纯化及单糖组成[J]. 食品科学, 2015(1): 109-112. Dong L F, Zhang Q, Xu M Z. Isolation, Purification and monosaccharide analysis of polysaccharide from sipunculus nudus[J]. Food Science, 2015(1): 109-112. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201501021 ( 0) |
| [8] |
戴军, 朱松, 汤坚, 等. PMP柱前衍生高效液相色谱法分析杜氏盐藻多糖的单糖组成[J]. 分析测试学报, 2007, 26(2): 206-210. Dai J, Zhu S, Tang J, et al. Analysis of monosaccharide compositions in polysaccharides from d. salina by pre-co lumn derivatization high performance liquid chromatography[J]. Journal of Instrumental Analysis, 2007, 26(2): 206-210. ( 0) |
| [9] |
陈娜, 尚宇, 邱杨, 等. 肉制品中总糖含量测定方法的探讨[J]. 现代食品科技, 2012(6): 720-721. Chen N, Shang Y, Qiu Y, et al. Comparative study of the methods for determination of total sugar in meat products[J]. Modern Food Science & Technology, 2012(6): 720-721. ( 0) |
| [10] |
陈乾, 马天翔, 郭宏举, 等. 硫酸钡-比浊法测定褐藻糖胶中硫酸根的含量[J]. 药学实践杂志, 2012(2): 118-120. Chen Q, Ma T X, Guo H J, et al. Determination of the sulfate content in sulfated fucans by barium sulfate turbidity[J]. Journal of Pharmaceutical Practice, 2012(2): 118-120. ( 0) |
| [11] |
殷秀红, 赵峡, 张紫恒, 等. 紫贻贝多糖的提取、分离和基本理化性质分析[J]. 中国海洋药物, 2011(2): 12-18. Yin X H, Zhao X, Zhang Z H, et al. Extraction, purification and physicochemical properties analyses of Myt ilus edulis Linnaeus polysaccharides[J]. Chinese Journal of Marine Drugs, 2011(2): 12-18. ( 0) |
| [12] |
贺莉萍, 郭毅, 蒙艳斌, 等. 固定剂和固定时间对石蜡包埋组织RT-PCR检测病毒RNA的影响[J]. 国外医学: 流行病学传染病学分册, 2005(1): 11-15. He L P, Guo Y, Meng Y B, et al. Effect of fixative and fixed_time on the detectability of viral RNA in paraffin_embedded tissue using RT-PCR[J]. Foreign Medical Sciences Epidemiology Lemology, 2005(1): 11-15. ( 0) |
| [13] |
Song Y H, Liu Q, Lv Z P, et al. Protection of a polysaccharide from Salvia miltiorrhiza, a Chinese medicinal herb, against immunological liver injury in mice[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2008, 43(2): 170-170. DOI:10.1016/j.ijbiomac.2008.04.012
( 0) |
| [14] |
唐利波, 龙尧, 何松美. 联苯双酯临床应用的再评价[J]. 实用肝脏病杂志, 2006(3): 185-188. Tang L B, Long Y, Heng S M, et al. Reevaluation of bifendate in clinical application[J]. Journal of Practical Hepatology, 2006(3): 185-188. ( 0) |
| [15] |
Yang J, Li Y, Wang F, et al. Hepatoprotective effects of apple polyphenols on CCl4-induced acute liver damage in mice[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2010, 58(10): 6525-6531. DOI:10.1021/jf903070a
( 0) |
| [16] |
Weber L W D, Boam M, Stampfl. Hepatotoxic"y and mechanism of action of halOalkanes: carbon tetrachloride as a toxicological mode[J]. lCRC Critical Reviews in Toxicology, 2003, 33(2): 105-136. DOI:10.1080/713611034
( 0) |
| [17] |
Luckey S W, Petersen D R. Activation of Kupffer cells during the course of carbon tetrachloride-induced liver iniury and fibrosis in rats[J]. Experimental and Molecular Pathology, 2001, 71(3): 226-240. DOI:10.1006/exmp.2001.2399
( 0) |
| [18] |
Kuriakose G C, Kurup M G. Antioxidant and antihepatotoxic effect of Spirulina laxissima against carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in rats[J]. Food & Function, 2011, 2(3-4): 190-196.
( 0) |
| [19] |
Jayakimar T, Ramesh E, Geraldine P. Antioxidant activity of the Oyster mushroom, Pleurotus ostreatus, on CCl4 induced liver injury in rats[J]. Food and Chemical Toxicology, 2006, 44(12): 1989-1996. DOI:10.1016/j.fct.2006.06.025
( 0) |
| [20] |
Saeed N, Khan M R, Shabbir M. Antioxidant activity, total-phenolic and total flavonoid contents of whole plant extracts Torilis leptophellal[J]. BMC Complement Altern Med, 2012, 16(12): 221-228.
( 0) |
| [21] |
Mishra A, Paul S, Swarnakar S. Down regulation of matrix metal loproteinase-9 by melatonin during prevention of alcohol-induced liver injury in mice[J]. Biochimie, 2011, 93(5): 854-856. DOI:10.1016/j.biochi.2011.02.007
( 0) |
| [22] |
王会, 郭立, 谢文磊. 抗氧化剂抗氧化活性的测定方法(一)[J]. 食品与发酵工业, 2006(3): 92-98. Wang H, Guo L, Xie W L. Methods for determining antioxitive activity of antioxidants(Ⅰ)[J]. Food ang Fermentation Industries, 2006(0): 92-98. ( 0) |
| [23] |
Naik S R. Antioxidants and their role in biological functions: an overview[J]. Indian Drugs, 2003, 40(9): 501-516.
( 0) |
| [24] |
Song F, Xie M L, Zhu L J, et al. Experimental study of osthole on treatment of hyperlipidemic and alcoholic fatty liver in animals[J]. World Journal of Gastroenterology, 2006(27): 4359-4363.
( 0) |
| [25] |
贺菊萍, 潘迎捷, 赵勇. 牛蒡提取物对四氯化碳诱导肝损伤小鼠的保护作用[J]. 现代食品科技, 2014(11): 6-11. He J P, Pan Y J, Zhao Y. Hepatoprotective Effect of burdock extracts against carbon tetrachloride-induced liver damage in mice[J]. Modern Food Science and Technology, 2014(11): 6-11. ( 0) |
| [26] |
Minin E A, Buchwalow I B, Wellner M, et al. L-Arginine-NO-cGMP signaling following acute liver injury in the rat[J]. Experimental and Toxicology Pathology, 2005, 57(2): 161-171. DOI:10.1016/j.etp.2005.08.003
( 0) |
| [27] |
Hassen B A, Donia T, Laboratory of Human Physiology, et al. How to protect liver graft with nitric oxide[J]. World Journal of Gastroenterology, 2011(24): 2879-2889.
( 0) |
| [28] |
曾洋洋, 韩章润, 杨玫婷, 等. 海洋糖类药物研究进展[J]. 中国海洋药物, 2013(2): 67-75. Zeng Y Y, Han Z R, Yang G T, et al. An overview of marine polysaccharide-derived drugs in China[J]. Chinese Journal of Marine Drugs, 2013(2): 67-75. ( 0) |
| [29] |
牛庆凤, 王斌, 李涛, 等. 一种新型乌贼墨糖胺聚糖的分离纯化、理化性质及其抗氧化活性研究[J]. 中国海洋药物, 2015, 34(3): 59-64. Niu Q F, Wang B, Li T, et al. Separation, purification and analyses on physicochemical properties, antioxideative activity of a novel glycosaminoglycans from Sepiaesculenta ink[J]. Chinese Journal of Marine Drugs, 2015, 34(3): 59-64. ( 0) |
| [30] |
陈丽萍, 王弘. 硫酸多糖的结构与生物活性关系研究现状[J]. 广州化工, 2005, 33(5): 21-23. Chen L P, Wang H. Research on relationship of chemical structure and bioactivity about sullfate polysaccharides[J]. Guangzhou Chemical Industry, 2005, 33(5): 21-23. ( 0) |