自2013年3月底，上海、安徽报告人感染H7N9禽流感病例^[1]以来，国内每年都有H7N9疫情报告，而2016年12月以来的第5轮疫情具有出现高峰早、报告病例数多、波及范围广的特点。针对此轮疫情，安徽省安庆市开展外环境中H7N9禽流感病毒应急监测工作，以了解本地外环境中病毒污染情况，为开展人感染H7N9禽流感专题风险评估提供依据，本研究于2017年1月5日 — 2月22日，采用完全随机抽样方法，采集38个农贸市场、4例人感染H7N9禽流感病例居家禽类相关标本324份，检测H7N9禽流感病毒，现将结果报告如下。

2017年1月5日 — 2月22日，采用完全随机抽样方法，每周在各县（市、区）抽取2家农贸市场，每个市场采样至少10份，共采集11个县（市、区）38家农贸市场和4例确诊人感染H7N9禽流感病例居家禽类相关标本324份，具体分为10类：咽拭子、肛拭子、粪便、笼具、台面/砧板、脱毛机、饮水、污水、饲料、其他。标本的采集、保存和运输按照国家卫计委发布的《人感染H7N9禽流感疫情防控方案》（第3版）^[2]进行。

采用实时荧光定量RT-PCR方法，从标本中提取病毒RNA，进行甲型流感病毒通用核酸检测，核酸阳性的标本进一步进行H7N9检测。RNA提取试剂试剂盒（美国罗氏公司）；禽流感病毒核酸检测试剂（江苏硕世公司，试剂盒批号：20161001、20161101；实时荧光定量PCR仪（美国ABI公司，ViiA7）。具体聚合酶链反应体系、反应参数及实验室操作参照试剂盒说明书。

Excel 2010录入数据，使用SPSS 20.0分析数据，率的比较使用Person χ²检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2017年1月5日 — 2月22日，进行H7N9禽流感病毒外环境监测工作，在1月14日安庆市报告人感染H7N9禽流感病例后，外环境监测的标本采集工作延伸到各县（市、区）农贸市场和发生病例居家。此次禽流感病毒外环境监测工作覆盖安庆市11个县（市、区），其中10个检出H7N9病毒阳性，阳性率90.90 %（10/11）；此次外环境监测工作涉及38个农贸市场和4例人感染H7N9禽流感病例居家；此次外环境监测工作共采集标本324份，H7N9病毒阳性92份，阳性率28.40 %。

按照飞禽、水禽和陆禽分类，将324份标本分为鸽子、鸭、鸡3类，结果3类标本均检出H7N9病毒。其中鸡标本阳性率最高（31.75 %），鸭最低（14.58 %）。不同禽种间阳性率的差异有统计学意义（χ² = 6.57，P < 0.05）。

表 1

表 1 安庆市不同禽种禽流感病毒外环境标本核酸检测情况 标本来源 采样数 检测数 阳性数 阳性率（%） χ2 值 P 值 鸽子（飞禽） 24 24 5 20.83 6.57 0.04 鸭（水禽） 48 48 7 14.58 鸡（陆禽） 252 252 80 31.75 合计 324 324 92 28.40

表 1 安庆市不同禽种禽流感病毒外环境标本核酸检测情况

324份标本中，来源于农贸市场的标本309份，H7N9病毒阳性92份，阳性率29.77 %；来源于人感染H7N9禽流感病例家庭散养活禽的标本15份，未检出H7N9病毒阳性。不同采集地标本阳性率差异有统计学意义（χ ² = 6.24，P < 0.05）。

表 2

表 2 安庆市不同采集地禽流感病毒外环境标本核酸检测情况 标本采集地 采样数 检测数 阳性数 阳性率（%） χ2 值 P 值 农贸市场 309 309 92 29.77 6.24 0.01 病例家庭 15 15 0 0.00 合计 324 324 92 28.40

表 2 安庆市不同采集地禽流感病毒外环境标本核酸检测情况

将324份标本按县（市、区）分类，11个县（市、区）中，有10个检出H7N9病毒阳性，仅宜秀区未检出。太湖县阳性率最高（70.00 %），其次是迎江区（52.78 %），开发区和桐城市较低，分别为5.88 %和5.00 %。安庆市常住人口524万，作为主城区的迎江区、大观区和开发区居住密度较大，将324份标本按主城区和非主城区分为2类，结果为：来源于主城区的标本69份，H7N9病毒阳性26份，阳性率37.68 %；来源于非主城区的标本255份，H7N9病毒阳性66份，阳性率25.88 %，主城区和非主城区阳性率的差异有统计学意义（χ² = 9.23，P < 0.05）。

表 3

表 3 安庆市不同地区禽流感病毒外环境标本核酸检测情况 县（市、区） 采样数 检测数 阳性数 阳性率（%） 太湖县 20 20 14 70.00 迎江区 36 36 19 52.78 大观区 16 16 6 37.50 岳西县 36 36 12 33.33 怀宁县 80 80 26 32.50 潜山县 20 20 6 30.00 望江县 39 39 5 12.82 宿松县 20 20 2 10.00 开发区 17 17 1 5.88 桐城市 20 20 1 5.00 宜秀区 20 20 0 0.00 合 计 324 324 92 28.40

表 3 安庆市不同地区禽流感病毒外环境标本核酸检测情况

将324份标本按咽拭子、饮水、粪便等分为10类，各类型标本均检测出H7N9病毒阳性，其中咽拭子阳性率最高（42.86 %）；肛拭子为40.00 %；饮水和污水中阳性率也较高，分别为39.53 %和37.84 %；而粪便和脱毛机阳性率较低。

表 4

表 4 安庆市不同类型禽流感病毒外环境标本核酸检测情况 标本类型 采样数 检测数 阳性数 阳性率（%） 咽拭子 21 21 9 42.86 肛拭子 5 5 2 40.00 饮水 43 43 17 39.53 污水 37 37 14 37.84 饲料 18 18 5 27.78 笼具 69 69 18 26.09 台面/砧板 31 31 7 22.58 脱毛机 23 23 5 21.74 粪便 68 68 14 20.59 其他 9 9 1 11.11 合计 324 324 92 28.40

表 4 安庆市不同类型禽流感病毒外环境标本核酸检测情况

1月14日，安庆市报告1例人感染H7N9禽流感病例，随后又报告了3例。病例发生后，安庆市开展了强化监测，加强了对农贸市场的清洗、消毒工作，增加了采样批次（采样在消毒2 h后进行）。正在开展的禽流感病毒外环境标本采集工作延伸到各县（市、区）农贸市场和病例家养活禽。将324份外环境标本按病例发生前和发生后分为2类，结果为：发生前采集标本31份，H7N9病毒阳性12份，阳性率38.71 %；发生后采集标本293份，H7N9病毒阳性80份，阳性率27.30 %。发生前、后阳性率的差异无统计学意义（χ² = 1.79，P > 0.05）。

目前H7N9禽流感病毒主要分为2支：1支来源于美洲，主要包括美国和危地马拉；1支来源于欧亚，主要包括中国、日本、韩国、瑞典和西班牙^[3]。H7N9禽流感病毒是一种新型、重配的禽源性甲型流感病毒，病毒基因来自野鸟和鸡群的基因重配^[4]，所以开展H7N9禽流感病毒外环境监测，了解外环境中该病毒的分布、发病的危险因素等，对开展人感染H7N9禽流感疫情的防控有重要意义。

安庆市农贸市场H7N9禽流感病毒阳性率28.40 %，高于广州市番禺区^[5]。陆禽鸡标本的阳性率高于水禽鸭和飞禽鸽子，说明安庆市人感染H7N9禽流感病毒主要存在于鸡群中，鸡比鸭和鸽子更易于传播病毒，这与陈茂余^[6]研究一致，浙江省有关研究也提示人感染H7N9禽流感病例发病前暴露于鸡的比例高于鸭等非鸡禽种^[7]。安庆市鸡群带毒率高的原因可能与流通有关，本地销售的鸡主要由外地调入，在贩运过程中因为空间小、密度大，而容易被病毒感染；飞禽和水禽带毒率低可能与安庆本地无候鸟迁徙路线，减少了迁徙候鸟与本地飞禽和水禽接触并传播病毒的机会。

安庆市仅在农贸市场采集的标本中检出人感染H7N9禽流感病毒阳性，这项研究开展期间，安庆市共报告4例人感染H7N9禽流感病例，4例发病前10天均有当地活禽农贸市场暴露史，其中3例还有家养活禽暴露史，对这3例病例家养活禽采样15份，但均未检出病毒阳性，这与刘静雯^[8]文献一致，提示安庆市人感染H7N9禽流感病例的感染来源为农贸市场活禽，而非农户自家散养活禽，目前许多研究也指出活禽市场是人感染H7N9禽流感的独立危险因素^{[9 – 10]}。因为目前还未研制出H7N9禽流感疫苗^[11]，所以活禽市场从业人员和前往活禽市场的人员应做好个人防护，戴口罩、避免直接接触活禽及其污染的环境。家庭散养活禽不带毒或带毒率低可能与养殖方式有关，农户家养活禽数量一般不多，其次散养也保证了禽类有足够的活动空间，另外农户家养活禽的卫生条件较农贸市场好，禽类饮水经常更换，饲料、笼舍、粪便经常清理。

安庆市除宜秀区外，城区和各县（市、区）均检出人感染H7N9禽流感病毒，其中太湖县阳性率最高，城区的迎江区和大观区阳性率也较高。这提示我们：安庆市外环境中普遍存在人感染H7N9禽流感病毒，应联防联控，做好人感染H7N9禽流感的防控工作^[12]，针对农贸市场，应加强清洗与消毒，有条件的地区可以关闭活禽交易市场，以降低人感染的风险^[13]；其次，本研究开展期间，安庆市共报告4例人感染H7N9禽流感病例，这4例病例均发生在外环境病毒阳性地区，并且发生在外环境检测阳性之后，而病毒阴性的宜秀区未报告病例。安庆市主城区阳性率高于非主城区，原因可能是主城区的活禽流通、宰杀等交易更加频繁，从而导致病毒传播的环节和因素相对更多更复杂。这提示更应关注人口密度大的主城区农贸市场禽类的管理工作。但是这项研究开展期间，安庆市报告的4例人感染病例中，仅1例发生在主城区（迎江区），其他3例都发生在非主城区（望江县2例、怀宁县1例）。这说明病毒的传播不仅与外环境中病毒阳性率高低有关，还可能受到其他未知因素的影响，需开展进一步地研究。

安庆市不同类型标本中都检出了人感染H7N9禽流感病毒，这说明该病毒不仅仅存在于禽体内（咽拭子和肛拭子阳性率最高），喂养（饮水、饲料）和宰杀（清洗禽类的污水、台面/砧板、脱毛机）等环节也存在病毒，提示本地农贸市场禽类在喂养、加工、售卖的各个环节均有传播病毒的风险^[14]。饮水和污水的阳性率高于台面/砧板、脱毛机、粪便等，与张烨^[15]研究不一致，原因可能与监测时间有关，本研究2017年1 — 2月份在安庆市开展，当地气温在0 ～10 ℃，而禽流感病毒对低温抵抗力较强，在4 ℃水中可保持活力1年以上^[16]。

发生人感染病例前外环境标本阳性率高于发生后，但差异无统计学意义，这提示：在发生人感染病例后，安庆市的“1日1清洗、1周1消毒、1月1休市、0存栏”等防控措施并没有落实到位。因此应加大对农贸市场活禽交易的管理，认真落实“1110”措施。有研究指出，禁止活禽过夜的“0存栏”措施尤为重要，因为活禽过夜可能增加了其排毒、染毒时间，致使病毒在不同禽种间传播并可能发生病毒基因的重组^[17]。目前人感染H7N9禽流感防控工作任重道远，在认真开展“1110”的防控措施基础上，更应在改变人们的消费观念上开展健康教育，推广欧美地区销售冰鲜禽类的方式，从而集中宰杀、冷链配送、冰鲜上市，这才是防控人感染H7N9禽流感的根本措施。