麻疹属副粘病毒科麻疹病毒属，共包括24个基因型，其中B1、C1、D1、E、F和G1基因型已经消失，但仍有18个基因型在世界各地的人群中流行；自麻疹病毒被分离以来，中国大陆地区监测到的基因型主要为H1a型，近年来还监测到输入的基因型包括D8、D9、B3、D4和D11等不同基因型^[1-5]。浙江省宁波市自2004年开展对麻疹的分子流行病学研究以来，麻疹疫情波动较大，近几年无麻疹相关突发公共卫生事件报告，但麻疹暴发疫情时有发生。为了解宁波市2004—2015年麻疹流行病学特征及野毒株的基因型特征，为制定防控对策提供参考依据，本研究收集宁波市2004年1月—2015年12月麻疹监测数据及各县(市、区)报告的麻疹野毒株样本进行了麻疹流行病学及基因型分析。结果报告如下。

在中国疾病预防控制中心信息系统收集2004年1月1日—2015年12月31日宁波市麻疹发病监测数据；人口学数据来源于2004—2015年《宁波市统计年鉴》。

QIASYMPHONY核酸提取仪及试剂盒(德国QIAGEN公司)；ABI 7500荧光PCR仪(美国ABI公司)；T100 PCR扩增仪(美国BIO-RAD公司)；Gel Doc XR+凝胶成像仪(美国BIO-RAD公司)；细胞培养基、胎牛血清、双抗(美国Gibco公司)；荧光PCR试剂盒(上海之江公司)；One-step RNA PCR kit(AMV)(日本TaKaRa公司)。所有实验均在宁波市疾病预防控制中心病毒所完成。

采集宁波市2004—2015年各医院就诊麻疹患者出疹3 d内的疑似麻疹患者含漱液标本600份，荧光PCR检测麻疹核酸阳性的标本离心取上清，加入终浓度含1 000 U/mL青霉素和链霉素、50 U/mL两性霉素，4 ℃作用2 h后接种在75%淋巴信号激活因子转染的非洲绿猴肾细胞(Vero/SLAM)上，37℃吸附1 h后弃上清，换含2%胎牛血清细胞维持液，37℃、5%CO₂培养，每天观察致细胞病变(cytopathic effect，CPE)，当CPE≥75%时收获冻存，如果无病变，反复冻融3次，再盲传2代，收集细胞。

N基因扩增引物为：MN5 1113-1134：5′-GCCATGGGAGTAGGAGTGG AAC-3′；MN6 1773-1754：5′-CTGGCGGCTGTGTGGACCTG-3′，目的片段660 bp。扩增产物由上海Sunny公司进行纯化和序列测定。系列分析比对采用MEGA 6软件，所有参考株序列均来自GeneBank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank)。

采用Excel 2007建立数据库，应用SPSS 18.0软件进行一般描述性分析和趋势性χ²检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

宁波市2004—2015年麻疹发病数依次为737、1331、156、820、2182、271、161、71、447、161、176、175例，麻疹发病率依次为9.93/10万、21.09/10万、2.46/10万、12.73/10万、33.38/10万、4.10/10万、2.41/10万、0.93/10万、6.60/10万、2.11/10万、2.30/10万、2.74/10万，麻疹发病率总体呈下降趋势(χ_趋势²=2743.496，P < 0.01)。

宁波市2004—2015年麻疹发病共6 688例，全年均有发病，1~12月麻疹监测发病数依次为347、709、1 437、1 443、876、436、472、346、237、115、106、164例，分别占总发病数的5.19%、10.60%、21.48%、21.57%、13.09%、6.52%、7.05%、5.17%、3.54%、1.72%、1.58%、2.45%；其中，2~5月为发病高峰，病例数占总发病数的66.74%。

宁波市11个市(区、县)均有发病，发病率居于前3位的地区分别为海曙区520例(13.81/10万)、江北区485例(13.33/10万)及江东区450例(12.19/10万)。

麻疹病例发病年龄最小15 d，最大81岁，其中≥20岁成人构成比最高，为45.56%(3 047/6 688)，8月龄婴幼儿和8月龄~7岁儿童，其构成比分别为23.13%(1 547/6 688) 和20.89%(1 397/6 688)；8~14岁和15~20岁构成比较低，分别为4.02%(269/6 688) 和6.40%(428/6 688)。

图 1

图 1 宁波市2004—2015年麻疹分离株种系发生树

测序的标本包括分离的80株麻疹野毒株以及10份2014年荧光PCR阳性含漱液标本。N基因羧基末端450个核苷酸序列与基因库中24个基因型参考株比对分析结果显示，11株为B3基因型，79株为H1基因型(73株均为H1a基因型，6株为H1b基因型)。其中，H1a亚型为该地区麻疹优势基因型，H1b基因型包括2005年5株和2004年1株，而B3基因型仅在2014年宁波市象山县麻疹暴发中监测到。73株H1a基因型核苷酸之间为96.8%~100%，与参考株China94-7之间同源性为96.8%~98.4%；6株H1b基因型核苷酸之间同源性为99.8%~100%，与H1b参考株China 94-7核苷酸之间同源性为98.5%~98.9%。

本研究结果显示，宁波市2004—2015年麻疹发病时有波动，2011年麻疹发病率最低为0.93/10万，较2008年的33.38/10万明显下降，总体上麻疹发病率呈下降趋势(χ_趋势²=2743.496，P < 0.01)，提示宁波市控制麻疹工作成绩显著。麻疹全年均有发病，以2—5月为发病高峰，病例数占总发病数的66.74%，建议该时期应在幼托机、卫生条件差及人口比较密集地方发布麻疹预警。

与相关研究中麻疹年龄分布呈“双向移位”研究结果相似^[6-8]，宁波市麻疹病例年龄组特征较为明显，呈“双峰分布”，其中≥20岁成人构成比最高为45.56%，其次为﹤8月龄婴幼儿和8月龄~7岁儿童，其构成比分别为23.13%和20.89%。尽管成人的麻疹发病构成比较高，但由于人群基数大，发病率相对较低，建议对此部分人群加强疫苗的宣传，提高其疫苗接种率来减少麻疹的发病。本研究前期对宁波市0~8月龄婴儿麻疹IgG抗体水平分年龄段检测结果显示，3、6、8月龄婴儿麻疹IgG抗体阳性率分别为22.1%、4.1%、0.8%，提示6月龄婴儿母传抗体水平已达不到保护抗体水平^[9]。因此世界卫生组织(World Health Organization，WHO)建议麻疹病毒持续传播国家的首剂含麻疹成分疫苗(measles containing vaccine, MCV)接种时间为9月龄，麻疹发病率低的国家可考虑延后到12月龄^[10]。中国实施8月龄接种首剂次MCV的免疫程序，是全球首剂MCV接种月龄最小的国家，接种年龄越小，免疫系统发育越不完善，免疫效果较差^[11]，因此对于 < 8月龄年龄组麻疹易感患者不建议降低首剂次接种时间等措施提高免疫力，主要是通过降低人群的发病水平来减少传染源以及减少婴幼儿接触机会来减少感染率。而对于8月龄~7岁年龄组儿童，通过其免疫史了解到此部分儿童大多为外地务工人员子女，未接受正规的免疫接种，因此建议加强免疫接种，提高该年龄组人群的抗体水平以控制麻疹发病率。

2004—2015年宁波市共分离到90株麻疹毒株，其中11株为B3基因型，79株为H1基因型(6株为H1b基因型，73株均为H1a基因型)，与中国大陆近年监测数据一致。6株H1b基因型中，1株为2004年分离，5株为2005年分离，2005年后在宁波市未监测到该基因型，2006年后全国范围内也未监测到该基因型。B3基因型仅在2014年宁波市象山县麻疹暴发中监测到，该基因型是主要流行于非洲，为刚果、喀麦隆、加纳、尼日利亚等国家的优势基因型，近年来输入到很多已经基本消除本土麻疹病毒流行的国家，成为了国际上流行和传播较为活跃的基因型^[12-13]。

综上所述，宁波市2004—2015年麻疹发病率总体呈下降趋势；H1a亚型为该地区麻疹优势基因型。因此，应以建立完善免疫屏障、提高人群免疫保护水平、阻断麻疹病毒的持续传播、减少易感人群和加强麻疹疫情监测为主要策略来减少麻疹的发病率。