2016, Vol. 32
近年来，随着人们生活水平提高，嗜酒人群不断增多，酒精滥用引发的多种组织器官损害日益引起人们关注。乙醇具有脂溶性，过量饮用极易造成胃炎、胃出血、胃溃疡等胃粘膜损伤[1-3]。蜂胶被称为“紫色黄金”，是蜜蜂采集植物幼芽当中的树脂，与其自身分泌物混合而成的一种天然活性物质，其主要有效成分为黄酮类化合物[4]。蜂胶在抗肿瘤、抗氧化、抗炎、提高免疫力等多方面发挥独特的生物学效应[5-8]，国外医学研究证实，蜂胶对酒精、药物及应激反应引起的胃粘膜损伤也具有良好的修复作用[9]。本研究采用蜂胶干预急性酒精性胃粘膜损伤大鼠，通过观察胃黏膜前列腺素E2(prostaglandins E2，PGE2)含量及血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)水平变化，旨在探讨蜂胶对急性酒精性胃粘膜损伤的保护作用及机制，结果报告如下。
1 材料与方法 1.1 主要试剂与仪器56°红星二锅头(北京酿酒总厂)；蜂胶软胶囊(每100 g中含总黄酮≥3.2 g)(北京中国农业科学院蜜蜂研究所)；橄榄油(西班牙墨尔橄榄油公司)；PGE2放射免疫检测试剂盒(北京福瑞生物工程公司)、TNF-α检测试剂盒(上海信裕生物科技有限公司)。AS325轮转式切片机、半自动组织包埋机(英国SHANDON公司)；BX53光学显微镜(日本Olympus公司)；CN202M放射免疫分析仪(北京中西远大技术有限公司)；ELx808酶标仪(美国BioTek公司)。
1.2 分组与处理SPF级雄性Wistar大鼠，180~200 g，购自山东鲁抗医药股份有限公司，许可证号：SCXK(鲁)2013-0001。大鼠随机分为5组，对照组：橄榄油3 ml/kg灌胃；模型组：橄榄油3 ml/kg灌胃14 d后，56°红星二锅头灌胃3次，每次14 ml/kg，间隔12 h；蜂胶低、中、高剂量组：40、80、160 mg/kg蜂胶灌胃14 d后，给予56°红星二锅头灌胃，剂量同模型组。末次灌胃1 h后，乌拉坦麻醉，腹主动脉取血，离心取血清；同时距贲门和幽门1.0 cm处离断取出全胃，行大体标本观察，并置-20 ℃储存备用。
1.3 指标与方法 1.3.1 胃组织溃疡指数检测取出胃体后，沿大弯侧剪开，用直尺及放大镜测量溃疡大小并按Guth标准计算溃疡指数：斑点糜烂记1分；糜烂长度＜l mm记2分；1 mm～记3分；2 mm～记4分；≥3 mm记5分，宽度>1 mm时分值×2。
1.3.2 大鼠胃组织病理学观察切取新鲜胃体相同部位组织(0.9 cm×0.9 cm×0.5 cm)1块，经10% 中性甲醛固定、脱水、透明，常规石蜡包埋，4 μm厚度连续切片，苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining，HE)，中性树胶封片，光学显微镜下观察各组大鼠胃组织形态学改变。
1.3.3 胃粘膜PGE2含量测定采用放射免疫法，取出胃体，沿大弯侧剪开胃，4 ℃生理盐水清洗胃腔，电子秤称取60～80 mg胃组织放置微型匀浆器中，以1∶ 5(w/v)比例加入1.15% KCl 溶液轻轻研磨制成2 mL胃组织匀浆，2 000 r/min 4 ℃离心，分离上清液。严格按照PGE2放免检测试剂盒说明书操作。
1.3.4 血清TNF-α水平测定采用酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)，严格按照试剂盒说明书操作。
1.4 统计分析数据以x±s表示，应用SPSS 17.0软件进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果 2.1 蜂胶对酒精损伤大鼠胃组织溃疡指数影响胃组织大体观察结果显示，对照组大鼠胃粘膜表面光滑，无充血、糜烂病灶，溃疡指数为0；模型组大鼠胃组织肉眼可见多处胃粘膜点状、线状糜烂及出血，溃疡指数(44.0±19.4)明显升高；蜂胶低、中、高剂量组大鼠溃疡指数分别为(44.4±8.55)、(19.8±8.8)、(42.5±19.59)；与模型组比较，中剂量蜂胶组大鼠胃粘膜溃疡指数明显下降，差异具有统计学意义(P<0.05)。
2.2 蜂胶对酒精损伤大鼠胃组织病理学影响(图 1)对照组大鼠胃粘膜组织结构完整，未见炎细胞浸润(图 1A)；模型组大鼠胃粘膜部分上皮细胞脱落，腺体结构完整，固有层可见较多的中性粒细胞浸润，少许淋巴细胞及嗜酸性粒细胞，可见大量红细胞，充血严重(图 1B)；低剂量蜂胶组大鼠胃粘膜组织结构变化基本同模型组(图 1C)；中剂量蜂胶组大鼠胃粘膜可见少量中性粒细胞浸润，红细胞数量明显减少，损伤状况明显改善(图 1D)；高剂量蜂胶组大鼠胃粘膜损伤状况较模型组无明显差异(图 1E)。
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注：A:对照组；B：模型组；C、D、E：40、80、160 mg/kg蜂胶组。 图 1 蜂胶对酒精损伤大鼠胃组织病理学影响(HE，×400) |
2.3 蜂胶对酒精损伤大鼠炎性因子水平影响(表 1)
与对照组比较，模型组大鼠胃粘膜PGE2含量明显降低，血清TNF-α水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，中剂量蜂胶组大鼠胃黏膜PGE2含量明显升高，血清TNF-α含量明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。
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表 1 蜂胶对酒精损伤大鼠炎性因子水平影响(x±s，n=10) |
3 讨论
酒精摄入机体后，首先经胃肠道代谢。酒精中的乙醇分子及其代谢产物乙醛可通过多种途径破坏胃粘膜防御系统。胃粘膜防御系统遭到破坏后，极易遭受胃酸、各类消化酶及胆汁等侵袭，引起胃粘膜组织水肿、糜烂，甚至出血、坏死，危害极大[1-3]。蜂胶具有成膜性，能够在损伤或溃疡粘膜面形成保护膜，从而促进损伤组织再生修复，有利于创伤愈合[4]。研究发现，巴西绿蜂胶具有良好的溃疡修复活性[9]，蜂胶对胃黏膜具有修复保护作用，其作用可能与其抑制脂质过氧化物(lipid peroxide,LPO)生成，改善机体氧化应激状况有关[10]。本研究结果显示，模型组大鼠胃粘膜发生糜烂、出血及炎细胞浸润，溃疡指数明显高于对照组。提示，过量酒精摄入对胃粘膜具有损伤作用。与相关报道一致[3]。本研究结果还显示，中剂量蜂胶组大鼠胃粘膜损伤状况明显减轻，炎细胞浸润减少；而高剂量蜂胶对大鼠 胃粘膜损伤状况无明显改善作用。提示，适宜剂量蜂胶摄入对急性酒精性胃损伤大鼠具有一定保护作用。
前列腺素E2是前列腺素的一种，由花生四烯酸在环氧合酶催化下合成。它作为一种细胞保护剂大量存在于胃粘膜组织中，在保护胃粘膜及胃粘膜损伤修复方面发挥重要作用。前列腺素(prostaglandin，PG)可抑制胃酸分泌，并可防止酒精等外源性刺激对胃粘膜造成的急性损伤[11]。PGE2的细胞保护作用主要表现为保持血管结构完整性和调节胃粘膜血流量，为粘膜上皮再生、修复提供物质基础，促进溃疡愈合。其作用机制可能与PGE2提高肥大细胞中环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)生成，降低细胞膜对Ca2+ 通透性，从而减少组胺等细胞毒性物质的释放有关。PGE2可能通过调节细胞内Na+转移、促进蛋白质合成及细胞更新、刺激胃黏液及HCO3-生成和分泌、增强胃粘膜表面磷脂释放、清除氧自由基等多种途径，实现对胃粘膜屏障的保护作用。PGE2是重要的胃粘膜防御因子，胃粘膜中内源性PGE2降低与胃溃疡、萎缩性胃炎、应激反应等引起的胃粘膜损伤密切相关[12]。TNF-α是一种主要由巨噬细胞和单核细胞产生的促炎因子，在炎症和免疫反应中发挥重要作用。研究表明，TNF-α是参与内源性溃疡形成最关键的炎性细胞因子[13]，其损害作用主要表现为增加血管通透性，减少胃粘膜血流量，促进氧自由基、白三烯等炎性介质及消化酶释放，同时，TNF-α对其他炎性因子的产生和释放亦具有促进和协同作用。TNF-α是与胃粘膜损伤关系最为密切细胞因子，酒精性胃损伤时TNF-α含量明显增加[14]。本研究结果显示，过量酒精摄入可使大鼠胃粘膜PGE2含量明显降低，而血清TNF-α水平则明显升高；中剂量蜂胶组大鼠胃粘膜PGE2含量明显升高，而血清TNF-α水平则明显降低。提示，蜂胶可能通过调节PGE2合成与释放，缓解炎症反应，发挥酒精损伤胃粘膜修复保护作用。
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