乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，仅次于子宫癌，已成为威胁妇女健康的主要病因^{[1, 2]}。癌胚抗原相关粘附因子19(carcino-embryonic antigen related cellular adhesion molecule 19，CEACAM19)是癌胚抗原家族的一个成员，属于免疫球蛋白家族粘附分子^[3]。研究表明，CEACAM19与乳腺癌的进展相关^[3]。雌激素受体与孕激素受体是判定乳腺癌预后的生物学指标之一^{[4, 5]}。Her-2 是一种原癌基因，Her-2阳性的乳腺癌对激素及化疗不敏感^[6]。癌基因CA15-3(carbohydrate atigen 15-3,CA15-3)是乳腺癌的最主要的特异性标志物。本研究采用实时定量聚会酶链式反应方法，检测乳腺原发癌和配对淋巴结转移癌CEACAM19 mRNA的表达水平，对CEACAM19在mRNA表达水平与乳腺癌患者雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progestrone receptor,PR) 及 Her-2(human epidermal growth factor receptor type 2,Her-2)表达水平相关性进行探讨。结果报告如下。

选取2008年10月—2014年10月在沈阳市妇婴医院首次确诊为乳腺癌的患者(均经组织病理学诊断确认)130例，患者年龄32~70岁，中位年龄为48.1岁。依据国际抗癌联盟临床分期标准^[7]，临床Ⅰ期、Ⅱ期患者共计64例，临床Ⅲ期以上66例，其中52例患者采集到了适宜实验室检测的淋巴结转移癌组织。所有患者原发部位癌组织和淋巴结转移癌组织手术标本冻存于-80 ℃冰箱中备用。

TRIzol试剂盒(美国Invitrogen公司)，Oligo(dT)Primers(美国Promerga公司)，DEPC(美国Sigma公司)，RNase inhibitor、M-MLVRTase、Taq酶、dNTP、DNA Marker购自大连宝生物生物工程有限公司，琼脂糖、溴化乙锭购自上海生工生物工程技术服务有限公司。

采集临床Ⅲ期以上患者中的52例淋巴结转移癌组织与临床Ⅰ期、Ⅱ期患者中的52份原发部位肿瘤组织。原发部位癌和淋巴结转移癌组织经过病理组织学评价，选取癌细胞在75%以上的结组织用于mRNA检测。

CEACAM19上游引物：5′-GAGGTCCAGGTAGCTGAAAAGA-3′下游引物：5′-GGATACAGCCGAGCACAAGA-3′；β-actin上游引物：5′-GACCTGACAGACTACCTCAT-3′下游引物：5′-AGACAGCACTGTGTTGGCTA-3′。

采用TRIzol试剂盒一步法提取组织总RNA，紫外分光光度计检测RNA浓度。荧光定量RT-PCR实验反应条件按照试剂盒说明书进行。实时荧光定量RT-PCR结果计算：根据荧光定量 PCR 的反应曲线判断标本达到循环阈值时的循环数(cycle of threshold,Ct)，原发癌与配对淋巴结转移癌比较以CEACAM19荧光定量结果的CT值减去β-actin的CT值得到ΔCT值，以转移癌ΔCT的平均值作为矫正数。分组比较以最小CT值作为矫正数，得到ΔΔCT值，计算2^-ΔΔCT值，以2^-ΔΔCT值为RNA表达水平。本实验中，2^-ΔΔCT值低于平均值则定义为CEACAM19低表达；2^-ΔΔCT值高于平均值则定义为CEACAM19高表达。

采用IBM公司SPSS 18.0软件进行统计分析，2组间比较采用t检验，2组以上比较采用方差分析。

mRNA表达水平对比 通过52例乳腺原发癌与相应配对淋巴结转移癌中CEACAM19 mRNA表达水平的对比分析，结果分别为(0.431±0.381)、(0.788±0.87)，差异有统计学意义(t=-3.289，P<0.05)。

mRNA表达水平与ER、PR、Her-2及CA15-3表达关系(表 1) 130例患者中，有ER检测结果的患者115例，有PR检测结果的患者114例，有Her-2检测结果的患者116例，有CA15-3结果的患者101例。统计分析这些患者癌组织中CEACAM19 mRNA表达水平与相应指标关系，仅雌激素受体ER阳性组CEACAM19 mRNA 表达水平明显低于雌激素受体阴性组，组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表 1 (Table 1)

表 1 CEACAM19表达水平与雌激素受体、孕激素受体、HER-2及CA15-3表达的关系 项目 例数 CEACAM19mRNA表达水平 χ2值 P值 低表达 高表达 n % n % ER 6.62 <0.05 - 35 11 31.4 24 68.6 + 80 46 57.5 34 42.5 PR 0.035 >0.05 - 55 27 49.1 28 50.9 + 59 30 50.8 29 49.2 HER-2 0.18 >0.05 - 86 42 48.8 44 51.2 + 30 16 53.3 14 46.7 CA15-3 0.03 >0.05 - 76 38 50.0 38 50.0 + 25 12 48.0 13 52.0

表 1 CEACAM19表达水平与雌激素受体、孕激素受体、HER-2及CA15-3表达的关系

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，容易发生转移，当肿瘤局限在乳腺中时，其治愈率超过 90%；而癌细胞发生远处转移后，其5年生存率低于20% ^[8]。因此，判断有无转移对临床治疗、判断预后有重要意义，尤其腋淋巴结转移是判断预后的重要指标。Fitzal等^[8]研究表明淋巴结阳性的乳腺癌其癌细胞的浸润能力明显高于淋巴结阴性的乳腺癌，预后差。本研究探讨了CEACAM19 mRNA 表达水平与乳腺癌转移及临床病理因素的相关性，检测52例淋巴结转移癌患者和130例乳腺原发癌患者CEACAM19 mRNA 表达水平。结果表明，CEACAM19 mRNA 在52对淋巴结转移癌的表达水平高于其原发癌的表达水平。雌激素受体与孕激素受体是判定乳腺癌预后的生物学指标之一。ER、PR阳性者较阴性者的治愈率高，复发率低^{[9, 10]}。试验结果表明，CEACAM19 mRNA 表达水平与 ER的表达水平呈负相关、与PR的表达水平无关。Her-2 是一种原癌基因，Her-2阳性的乳腺癌对激素及化疗敏感性差，是其负相关因子。本研究结果表明，CEACAM19 mRNA 表达水平与Her-2的表达水平不相关。癌基因CA15-3是乳腺癌的最主要的特异性标志物，其含量的变化与治疗效果密切相关，是乳腺癌患者诊断和监测术后复发、观察疗效的常用指标^[11]。分析CA15-3阳性组与CA15-3阴性组的CEACAM19mRNA表达水平，结果表明CEACAM19 mRNA表达水平与CA15-3的表达水平不相关。

综上所述，相对于乳腺癌原位癌，相应的乳腺癌淋巴结转移癌中的CEACAM19 mRNA表达水平明显升高。同时，CEACAM19mRNA表达水平与雌激素受体呈负相关。因此，实验结果证实了CEACAM19mRNA表达水平与乳腺癌的转移相关，CEACAM19 mRNA表达水平可以作为乳腺癌转移治疗及预后评估的新的靶点。