胜利油田地处山东北部黄河入海口两侧，年降雨量500～800 mm，平均气温为12.1 ℃，相对湿度为65%～85%，地势平坦、海拔较低，属于温带大陆季风气候，适合蝇类生长，家蝇为此地的优势种群^[1]。在以环境治理为主的综合防制中，化学防制仍是控制和杀灭家蝇的不可缺少的手段^[2]。随着化学杀虫剂的频繁使用，家蝇种群也进化出了针对不同药物(如有机磷类、氨基甲酸酯类和拟除虫菊酯类)的抗药性^[3]。为了解油田社区家蝇抗药性情况，完善抗性监测本底资料，有效指导家蝇防制工作，本研究于2010—2014年对油田社区家蝇抗药性进行了调查和监测，现将结果报告如下。

笼诱法^[4]捕蝇笼为锥形芯圆形诱蝇笼，每个捕蝇笼诱饵盘内放置红糖食醋饵(50 g红糖＋50 g食醋＋50 mL水)，采集居民区及附近农贸市场的家蝇，将采集的家蝇成蝇带回昆虫实验室饲养1～2代，采用羽化后3～7 d龄的雌性健康成蝇进行抗药性测定。

99.6%溴氰菊酯、97.0%高效氯氰菊酯、94.4%氯菊酯、95.0%敌敌畏杀虫剂原药(山东省疾病预防控制中心病媒生物防制所)；丙酮为市售分析纯(南京化学试剂有限公司)；考马斯亮蓝试剂盒、谷胱甘肽S-转移酶试剂盒、乙酰胆碱酯酶试剂盒、过氧化氢酶试剂盒(上海拜力生物科技有限公司)。

生物测试采用点滴法^[5]：用丙酮将原药配成5～7 个系列浓度，取3～7 d龄的雌性家蝇成虫，用点滴器将药液按浓度由低到高的顺序，点滴于中胸背板上，在温度(25±1)℃、相对湿度60%～70%的条件下饲养24 h。记录死亡虫数。试验重复3次。以丙酮处理作对照，对照组死亡率超过20％时实验视为无效。

取羽化后第3 d的家蝇5～10只，称取组织重量，加生理盐水制成10%匀浆，离心后，取上清作为酶源待测。采用考马斯亮蓝试剂盒进行蛋白质含量测定。用标准蛋白(0.563 g/L)作标准。采用谷胱甘肽S 转移酶试剂盒、乙酰胆碱酯酶试剂盒、过氧化氢酶试剂盒进行酶活力测定，实验重复3次。

直接喷雾法^[7]将羽化后24 h的家蝇40～80头放入密闭圆筒装置，每次将0.01%的高效氯氰菊酯1 mL直接喷入圆筒装置，记录被击倒的试虫数。当击倒的试虫数达到总数的20%～60%时，将全部供试昆虫转移至清洁的养虫笼，进行正常饲养，连续处理10代。

将选育后家蝇抗性品系在无选择压力的实验室中常规饲养，每隔2代采用点滴法测定其抗药性，直至抗性基本消失。

采用Excel2003对数据进行统计分析。用DPS软件进行数据统计，计算致死剂量、95％可信限和回归方程。

结果表明，胜利油田家蝇对溴氰菊酯、高效氯氰菊酯、氯菊酯和敌敌畏等常用杀虫剂具有较高的抗药性。近5年，其抗性水平在持续发展。

表 1 (Table 1)

表 1 不同年代家蝇对常用化学杀虫剂的抗药性监测结果 杀虫剂 2010年 2014年 敏感 LD50(μg/♀) 抗性LD50(μg/♀) 抗性系数(R/s) 抗性LD50 ＜(μg/♀) 抗性系数(R/S) 溴氰菊酯 0.006 0.078 12.98 0.137 22.86 高效氯氰菊酯 0.064 0.714 11.15 1.544 24.12 氯菊酯 0.059 1.074 18.21 1.143 19.37 敌敌畏 0.195 2.919 14.97 1.659 8.51

表 1 不同年代家蝇对常用化学杀虫剂的抗药性监测结果

家蝇经高效氯氰菊酯抗性选育后乙酰胆碱酯酶(acetyl cholinesterase，AchE)、过氧化氢酶(catalase，CAT)和谷胱甘肽-S转移酶(glutathione S transferase，GST)活性变化结果见表 2。在0.1 mg/mL的剂量下，家蝇的AChE活性由敏感品系的0.056 U/mgprot增至3.249 U/mgprot，随后增速逐渐增大，最后一次达到9.012 U/mgprot。在0.1 mg/mL的剂量下，家蝇的CAT活性逐渐升高，刚开始接触杀虫剂时，CAT活性增加显著，由1.056 U/mgprot增至6.249 U/mgprot，在其后的两代中，CAT活性增加趋势不明显，后来升高的速率有所增加。在杀虫剂0.1 mg/mL的剂量作用下，家蝇的GST活性变化呈逐渐增加趋势，前几代的增加趋势变化不明显，此后GST活性变化明显增大。

表 2 (Table 2)

表 2 高效氯氰菊酯选育后不同世代家蝇3种酶的比活力变化 家蝇世代数 AchE比活力 CAT比活力 GST比活力 2 0.056 1.056 166.57 4 3.429 6.349 256.24 6 6.117 6.775 276.75 8 8.501 7.211 397.21 10 9.012 10.012 421.35

表 2 高效氯氰菊酯选育后不同世代家蝇3种酶的比活力变化

结果表明，在无选择压力下，家蝇高效氯氰菊酯抗性种群出现抗性自然衰退趋势，在第18代之前，抗性衰减较快；到中低度抗性水平时，抗性衰减趋势减缓；到第36代时，基本恢复为敏感水平。

图 1

Fig. 1

图 1 无选择压力下家蝇抗药性衰减趋势

拟除虫菊酯类杀虫剂近年来发展迅速，种类繁多，现在防制卫生害虫常用的是溴氰菊酯、高效氯氰菊酯和氯菊酯。参照WHO对家蝇抗药性分级标准^[9]，R/S值3～4倍为低抗，10～20为中抗，大于20倍为高抗。3种药剂比较发现，高效氯氰菊酯的抗性普遍高于溴氰菊酯和氯菊酯，这是由于此类杀虫剂具有高效、低毒、广谱的特点，近几年被大量用于卫生害虫的化学防制所致。胜利油田主要使用溴氰菊酯和氯氰菊酯，氯菊酯用量很少，但从5年的抗性发展看，溴氰菊酯与氯菊酯的抗性系数比较接近，表明油田家蝇对菊酯类杀虫剂各品种之间容易产生强烈的交互抗性，也有可能是长期单一使用其中一种后产生了交互抗性，故对另一种也产生了高抗性的结果。敌敌畏的抗药性有所下降，主要是由于近年来严格限制敌敌畏的使用环境和场所，因此，其抗药性出现了下降趋势。

对AchE、CAT和GST三种酶活性的测定可以看出，随着杀虫剂选择压力的增加，家蝇的抗性逐渐增强，3种相关酶的活性也随之增强^[10]。家蝇正是通过这些机制来减小甚至排除杀虫剂对其机体的伤害，从而使家蝇种群适应外界环境^[10]。研究发现，在用高效氯氰菊酯培育抗药性过程中，AchE的活性升高，可能是其基因突变的结果，与曹辉^[11]等报道一致。另外，抗性品系存在适合度劣势，即发育历期延长、平均寿命缩短、繁殖力减退，说明选择压越大，抗性发展越快；害虫在一段时间内不接触杀虫剂，即无选择压力下其抗性水平会逐渐下降,敏感性得到恢复。

针对胜利油田家蝇抗药性现状，应结合实际研究和制定抗性防制策略。一是推广以整治蝇类孳生地、加强生活垃圾管理的环境综合防制措施，并辅以有效的物理、生物防制等方法；二是建立科学、有效的抗性监测机制，有效阻止和延缓家蝇抗药性的进一步发展；三是根据交替轮换、合理复配及局部用药的原则，有效杀灭防制对象；四是消除滥用、乱用杀虫剂现象，做好油田卫生杀虫剂的宏观调控和统一管理。