抑郁症是由各种原因引起的以抑郁为主要症状的一组心境障碍或情感性障碍^[1]。单相抑郁症是指无躁狂发作的单纯抑郁发作的病例。抑郁症具有高发病率、高自杀率、高致残率、低治愈率等特点，当前已成为世界第四大疾病^[2]。世界卫生组织预计到2020年，抑郁症将在“全球疾病负担”排名第2位^[3]。抑郁症在女性中高发，Mohammadi等^[4]报道成年女性抑郁症患病率为14.34%，是男性患病率的2倍。迄今为止，抑郁症的发病机制尚不清楚^[5]。有研究表明，遗传因素是抑郁发生的独立危险因素之一^[6]。近年来，许多抑郁症的遗传学研究将5-HT系统异常认为是抑郁症及自杀行为主要的神经生物学基础^[7]。而5-HTR作为5-HT系统的重要组成部分，已成为抑郁症遗传学的研究热点。其中关于5-HTR2A与抑郁症的关联研究报告有很多，但在女性单相抑郁症患者中的相关研究并未发现。因此，本研究于2011—2013年在黑龙江省哈尔滨医科大学附属第一医院精神科对就诊的198例女性单相抑郁症患者(病例组)和200名健康女性(对照组)5-HTR2A rs6313位点作为候选基因，进一步了解分析该基因位点多态性与女性单相抑郁症患者及与其自杀行为的关系。 1 对象与方法 1.1 对象

病例组为2011—2013年在哈尔滨医科大学附属第一医院精神科就诊的198例女性抑郁症患者。入组标准：(1)汉族，年龄18～60岁；(2)汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Rating Scale for Depression，HAMD)^[8]24项测评抑郁程度在中度以上(＞20分)，并由2名有经验的中级以上职称的精神科医生按照美国精神障碍诊断与统计手册第4版^[9]抑郁症的诊断标准共同诊断确定；(3)2周内未接受过抗抑郁治疗；(4)对研究知情同意。排除标准：(1)有脑器质性精神障碍及其他精神疾病、遗传疾病家族史及精神发育迟滞和痴呆患者；(2)资料不全及近期接受过输血治疗者。对照组为在哈尔滨医科大学附属第一医院体检的200名健康女性，与病例组年龄(相差≤3岁)匹配。其家系无物质依赖者，无遗传疾病，两系三代中无异族通婚史。排除重大躯体疾患、遗传性疾病和精神疾病，且无血缘关系。本研究需知情同意。 1.2 方法 1.2.1 问卷调卷

采用问卷调查法由哈尔滨医科大学附属第一医院精神科医生对所有研究对象进行一般人口学情况调查、自杀行为史以及汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Rating Scale for Depression，HAMD)24项评估。(1)一般人口学情况调查包括性别、年龄、文化程度等。(2)汉密尔顿抑郁量表由Hamilton编制，为他评量表，分为7类因子，包括体重、焦虑/躯体化、日夜变化、睡眠障碍、认知障碍、迟缓、绝望感。量表的总分能较好地反映病情的严重程度。 1.2.2 标本采集和基因组DNA提取

抽取研究对象外周静脉血10 mL，置于EDTA抗凝管中，于-20 ℃保存，4周内采用人类基因组DNA提取试剂盒(AxyPrep血基因组DNA小量试剂盒)提取DNA。 1.2.3 引物序列

登陆NCBI找到5-HT2AR上的基因rs6313 SNP位点和序列，用Primer 3.0软件设计引物序列。SNP位点的引物序列如下，rs6313 SNP位点的引物序列，上游引物：5′-GCTACAAGTTCTGGCTTAGAC-3′，下游引物：5′-TGAAGTAAGGAGAGACACGAC-3′。 1.2.4 Snapshot技术检测

采用单碱基延伸SNP分型技术(Snapshot)方法对rs6313进行基因分型。(1)多重PCR扩增：PCR反应体系为15 μL，含基因组DNA 1 μL，0.3的dNTP，1 μL 10*buffer，1.5 μL MgCl₂溶液，0.15 μL引物混合，0.3 μL的Taq酶。(2)扩增产物的纯化：PCR扩增后取3 μL PCR产物用0.2 μL ExoI和0.8 μL FastAP纯化，反应总体系为7 μL，混匀后37 ℃反应15 min，80 ℃终止反应15 min，4 ℃保存。(3)延伸反应：PCR反应体系为6 μL，含纯化产物2 μL，1μL Snapshot Mix试剂，2 μL延伸引物混合。PCR反应在9700热循环仪(ABI公司)中进行。(4)反应体系中取1 μL延伸产物，加8 μL上样loading缓冲液，95 ℃变性3 min，立即冰水浴，在ABI 3730XL全自动DNA测序仪上进行。 1.3 统计分析

应用平衡法则进行遗传平衡吻合度检验。通过SPSS18.0软件，采用χ²检验分析位点基因型、等位基因频率在病例组和对照组之间的分布差异。 2 结 果 2.1 Hardy-Weinberg 平衡定律检验

病例组、对照组和总体研究样本(病例组+对照组)的基因型分布频率比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，符合Hardy-Weinberg 平衡法则。 2.2 病例组与对照组5-HTR2A rs6313基因型及等位基因频率比较(表 1)

病例组与对照组5-HTR2A rs6313的基因型C/C、C/T、T/T频率分布比较，差异有统计学意义(χ²=6.263，P=0.044)。病例组与对照组5-HTR2A rs6313的等位基因C、T频率分布比较，差异无统计学意义(χ²=0.240，P=0.624)。

表 1

表 1 病例组与对照组5-HTR2A rs6313 基因多态性基因型与等位基因频率比较 组别 总数 CC CT TT C T n % n % n % n % n % 病例组 198 49 24.7 94 47.5 55 27.8 192 48.5 204 51.5 对照组 200 34 17.0 119 59.5 47 23.5 187 46.8 213 53.2 χ2值 6.263 0.240 P值 0.044 0.624

表 1 病例组与对照组5-HTR2A rs6313 基因多态性基因型与等位基因频率比较

根据病史将198例女性单相抑郁症患者分为有自杀行为组(n=105)，无自杀行为组(n=93)。2组5-HTR2A rs6313的基因型C/C、C/T、T/T频率分布比较，差异无统计学意义(χ²=0.811，P=0.667)；2组5-HTR2A rs6313的等位基因C、T频率分布比较，差异无统计学意义(χ²=0.592，P=0.442)。

表 2

表 2 有、无自杀行为者5-HTR2A rs6313基因型和等位基因频率比较 组别 总数 CC CT TT C T n % n % n % n % n % 有自杀行为 105 25 23.8 48 45.7 32 30.5 98 46.7 112 53.3 无自杀行为 93 24 25.8 46 49.5 23 24.7 94 50.5 92 49.5 χ2值 0.811 0.592 P值 0.667 0.442

表 2 有、无自杀行为者5-HTR2A rs6313基因型和等位基因频率比较

女性抑郁症患者伴有一系列诸如意志消沉、自我评价低、睡眠障碍、食欲改变等方面的症状。女性抑郁症具有较高的患病率，严重威胁着女性的心身健康。有研究表明，抑郁症中女性患病率明显高于男性，提出性别差异可能与遗传基因尚有关联^{[10, 11]}。本研究所选取的5-HTR2A rs6313位点单核苷酸多态性与女性抑郁症的关联研究，国内外尚未发现相关报道。本调查结果显示，女性单相抑郁症组与健康对照组中5-HTR2A rs6313的基因型C/C、C/T、T/T频率分布有显著差异，由此推断5-HTR2A rs6313位点单核苷酸多态性与女性单相抑郁症可能有明显的遗传关联。吴鹏强等^[12]对41例抑郁症患者和66名健康正常人的基因进行比较研究，发现5-HTR2A rs6313位点多态性与抑郁症可能存在关联，这与本研究结果相符。而Illi等^[13]在对86例芬兰抑郁症患者的纵向研究中，指出5-HTR1A、5-HTR2A和5-HTR6基因均与抑郁无关，与本研究结果相悖，原因可能是由于研究方法的不同、种族的差异造成的。有研究报道，在抑郁症患者脑内5-HTR2数量明显增多，这可能是5-HT能神经递质活动的功能性缺乏导致的^[14]，而rs6313作为5-HTR2A基因静息区域的位点，这更进一步证实了其位点单核苷酸多态性与女性单相抑郁症可能有明显的关联。

本研究结果还显示，有、无自杀行为2组中rs6313基因型C/C、C/T、T/T频率比较差异无显著差异，等位基因C、T频率亦无显著差异。Wang等^[15]在研究中国汉族人群抑郁症与基因的关系中发现，HTTLP、5-HTR1A和5-HTR2A均与抑郁伴自杀无显著关联，与本研究结果相一致。加拿大学者Du等^[16]对因抑郁自杀死亡者尸检脑组织进行了5-HTR2A受体静息区rs6313检测，其结果显示基因rs6313多态性与重度抑郁症患者伴自杀有显著相关，这与本研究结果不一致。Du等人仅选取24例抑郁自杀死亡的患者，而本研究对105例均为女性抑郁自杀未遂的患者进行调查。样本性别差异、样本大小，还有自杀行为高度的遗传异质性等因素可能都会导致研究结果的差异。此外，在遗传影响抑郁伴自杀行为发生的环境因素如应激性生活事件等也作用着人类的情绪、行为，甚至更可能是遗传基因与环境等诸多因素共同作用的结果。因此，对5-HTR2A rs6313位点单核苷酸多态性与女性抑郁症自杀行为的关系有待于更深一步的探讨。