艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)引起的一种传染病，病死率极高。目前中国艾滋病的感染呈蔓延和增加的趋势，如何准确快速的检测出艾滋病及其携带者已成为研究重点。HIV抗体检测是发现HIV感染的主要手段，包括筛检(分为初筛和复检)和确证试验。初筛是采用敏感性高的试剂尽可能的发现HIV抗体阳性患者，常用的是酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和快速检测试剂^[1]；确证试验则采用特异性高的方法纠正所有假阳性标本，常用免疫印迹试验(Western blot,WB)^[2]。为了调查分析筛检阳性标本与WB试验结果的关系，于2010年6月—2013年12月对普陀地区185份HIV抗体阳性标本与确证试验结果进行对比性分析。现将结果报道如下。 1 对象与方法 1.1 对象

选择2010年6月—2013年12月，浙江省舟山市普陀区送检的HIV初筛阳性血清标本，标本来自高危人群、住院病人、孕产妇、自愿咨询检测者及哨点监测人员等，共计185份。 1.2 方法 1.2.1 试剂

HIV抗体初筛(ELISA法)试剂盒(上海荣盛公司)；胶体硒法试剂(日本培公司)；确认试验使用HIV BLOT 2.2人类免疫缺陷病毒(HIV1+2型)抗体免疫印迹试剂(新加坡MP生物医学亚太私人有限公司)。上述试剂均在国家食品药品监督管理局注册、批检合格，试剂均在有效期内，并严格按照试剂说明书操作。 1.2.2 仪器

550型酶标仪(美国Bio-Rad公司)，ZMX-988(北京天石医疗用品公司生产)自动酶标板机，Autoblot System 20全自动蛋白印迹仪(新加坡MP生物医学亚太私人有限公司)。实验前均对各种规格微量加样器校准，所用振荡器和恒温箱等性能稳定。 1.2.3 检测方法

HIV抗体初筛采用由英科新创生物技术有限公司(上海)生产的HIV1+2双抗原夹心ELISA法或胶体硒法。ELISA法中酶标仪选用450 nm波长测定各孔A值，样本吸光度/阳性判断值(S/c.o)≥1为阳性，＜1为阴性。胶体硒法在加入被检标本15~30 min内进行结果判读，观察样本条带去显现不同深浅颜色为阳性，并参照质控线条带颜色深浅、显现时间及条带的宽度来判断反应的强弱。初筛阳性的标本用原试剂及另外一种不同原理试剂复检，将两法检测均为阳性或一阳一阴标本用WB法做HIV确认检测。WB结果参照中国疾病预防控制中心《全国艾滋病检测技术规范》^[3]的标准判定。(1)HIV-1抗体阳性：至少出现2条env条带(gp⁴¹和gp¹⁶⁰/gp¹²⁰)，或出现至少1条env条带和p²⁴条带。HIV-2抗体阳性：出现至少2条env条带(gp³⁶和gp¹⁴⁰/gp¹⁰⁵)，符合试剂盒提供的阳性标准；(2)HIV抗体阴性：未出现HIV抗体特异性条带，或只检出p¹⁷抗体无其他条带；(3)HIV抗体不确定：有HIV抗体特异条带出现，但不足以判定为阳性。 1.3 统计分析

采用Excel 2003进行数据录入，使用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，定性资料采用百分数表示，分类变量采用的χ²检验，P<0.05为差异有统计学意义。 2 结 果 2.1 初筛试验与确证试验结果比较

初筛阳性样本185份，其中ELISA和胶体硒法均为阳性为173份，ELISA阳性胶体硒阴性7份，ELISA阴性胶体硒阳性5份。经WB确认，其中HIV-1抗体阳性160份，占86.49%；HIV-1型抗体阴性13份，占7.03%；不确定性12份，占6.49%。ELISA、胶体硒法与WB的阳性符合率分别为88.89%(160/180)和89.89%(160/178)，差异无统计学意义(P>0.05)。初筛试验与WB确认阳性符合率为86.49%(160/185)，2种方法同时为阳性与WB的阳性符合率为92.49%(160/173)。 2.2 ELISA法(S/c.o值)与确证试验结果比较

160份确证为HIV-1型抗体阳性标本的平均S/c.o值为(15.76±7.42)，13份HIV-1型抗体阴性标本的平均S/c.o值为(5.48±2.17)，12份HIV-1型抗体不确定标本的平均S/c.o值为(6.83±3.06)，经方差分析，3组之间差异有统计意义(P<0.05)。有6例初筛阳性标本的S/c.o值<1，确证试验均为阴性或不确定结果；11例标本的S/c.o值为1~6，与确证试验阳性符合率为18.18%(2/11)；17份标本的S/c.o值为7~10，与确证试验阳性符合率为70.59%(12/17)；151份标本的S/c.o值>10，与确证试验阳性符合率为96.69%(146/151)。 2.3 WB确认试验带型结果(表 1)

160份确证试验为HIV-1阳性的样本中，出现9条带(全带)的121份(75.63%)，5~8条带33份(20.63%)，3~4条带6份(3.75%)，gp¹⁶⁰、gp¹²⁰、gp⁴¹、p⁶⁶、p⁵¹、P⁵⁵、P²⁴条带出现的百分率均≥95%，gp¹²⁰最高为100%，P¹⁷最低为75.63%。12份WB确证为不确定标本中，P⁵⁵出现概率最高为58.33%，其次是gp¹⁶⁰为50.00%。

表 1

表 1 WB确认试验带型结果 带型 阳性 不确定 份数 % 份数 % enva gp160 159 99.38 6 50.00 gp120 160 100.00 2 16.67 gp41 153 95.63 0 0.00 polb p66 156 97.50 2 16.67 p51 152 95.00 4 33.33 p34 145 90.63 3 25.00 gag p55 158 98.75 7 58.33 p24 139 86.88 4 33.33 p17 121 75.63 0 0.00

表 1 WB确认试验带型结果

在经WB确认试验带型与S/c.o值的比较中发现，gp¹⁶⁰、gp¹²⁰、p⁶⁶的S/c.o值>10的比例均>95%，而gp⁴¹、p⁵¹、P³⁴、P⁵⁵和P¹⁷的S/c.o值>10的比例为80%~90%，而P²⁴的S/c.o值>10的比例<80%。

表 2

表 2 WB确认试验带型与S/c.o值的关联 带型 S/c.o值 <1 1~ 6~ >10 份数 % 份数 % 份数 % 份数 % enva gp160 2 1.21 5 3.03 9 5.45 149 90.30 gp120 0 0.00 5 3.09 7 4.32 150 92.59 gp41 3 1.96 6 3.92 10 6.54 134 87.58 polb p66 3 1.90 3 1.90 8 5.06 144 91.14 p51 2 1.28 8 5.13 11 7.05 135 86.54 P34 4 2.70 7 4.73 12 8.11 125 84.46 gag P55 6 3.64 10 6.06 13 7.88 136 82.42 P24 5 3.50 9 6.29 15 10.49 114 79.72 P17 3 2.48 6 4.96 10 8.26 102 84.30

表 2 WB确认试验带型与S/c.o值的关联

本次研究结果显示，185例初筛HIV抗体阳性标本经确证试验证实有160份为HIV-1型抗体阳性，其中ELISA和胶体硒法与确证试验的阳性符合率分别为88.89%和89.89%，这说明即使ELISA、胶体硒法反应呈阳性标本也存在假阳性的可能性，因而初筛阳性的标本必须经过确证试验，并以WB试验结果为准。进一步分析ELISA与WB试验结果发现，随着S/c.o值的增加，WB试验阳性符合率也随之升高，但高S/c.o值并不表示HIV感染，S/c.o值≥6的标本经WB试验确证结果也可能出现阴性或不确定，这与国内其他文献报道相一致^[4,5]，这可能与ELISA试验对实验室人员操作技术、试剂及样品质量要求极高，任何不规范的操作均可能引起试验结果的误差。在WB确证试验中，HIV-1抗体阳性的160例标本中有9条带(全带)的共计121例(75.63%)，说明大多数HIV感染者体内病毒含量高，病毒繁殖活跃，极具传染性^[6]，因此要加强检测过程中个体防护。

2009版的《全国艾滋病检测技术规范》规定了同时符合试剂盒提供的阳性判定标准和我国使用确证试验HIV感染判定标准可判为HIV-1阳性，这使HIV抗体阳性的判定标准更为严格。然而即便这样，确证试验仍存在出现假阳性的可能性，国内外研究通过对低危人群研究发现^[7,8]，个别蛋白印迹假阳性率高达8%。由于对阳性判定结果标准的严格控制，不确定结果随之增加，本次研究对象中有12份不确定标本，造成不确定的原因有：HIV新近感染不久处于“窗口期”、自身免疫性疾病、肝肾功能衰竭、注射某种药物、免疫接种、肿瘤、妊娠、病毒感染等^[9]。对于不确定性标本的处理需要1~2个月长时间随访，依据再次复查的结果判定阳性还是阴性，因而给检验人员检测工作带来较大的难度，这也是确证试验的局限所在，因此，在进行HIV感染的诊断中，既要根据实验室确证结果，也要结合流行病学资料、RNA检测等技术加以判断，防止出现假阳性。