慢性炎症可能影响多种肿瘤的发展或演进，研究证实炎症性肠病患者其结直肠癌的患病风险明显上升^[1,2]。一般情况下，COX-2在多数正常组织中呈低表达或不表达，而当发生炎症时则表现为表达的上调^[3,4]。目前已证实多种基因多态性可能与人类肿瘤的发生密切相关^[5]，但对于COX-2基因多态性与结直肠癌发生的关系不明确。为揭示COX-2基因启动子-765位点多态性与结直肠癌发病风险的关系，本研究采用病例-对照方法进行回顾性分析。

2008年8月-2013年7月收集郑州市人民医院普外科新发原发性结直肠癌患者197例作为病例组，均通过术后病理检查明确诊断。其中男105例，女92例，平均年龄(60.9±11.4)岁；对照组为选取的同期210名健康体检者，其中男113人，女97人，平均年龄为(59.5±12.7)岁。所选研究对象为无任何肿瘤相关病史，且无遗传性肿瘤家族史。受试者均签署知情同意书并告知其实验目的。

收集病例组患者的临床病理情况，包括病理类型、分化程度、肿瘤部位、TNM分期、淋巴结转移和远处转移。通过问卷调查的方式收集研究对象的患瘤相关风险因素情况，包括吸烟、饮酒和体质指数。

主要试剂：PCR引物(上海生工生物)、2×Taq PCR masterMix(北京天根生化)、全基因组DNA提取试剂盒(北京天根生化)、(COX-2)ELISA试剂盒(R&D公司)等；主要要仪器：有DYY Ⅲ电泳槽(北京六一仪器厂)、电泳仪(北京D Y Y-5型)、凝胶自动成像仪(美国Thermo公司)、PCR仪(德国Eppendorf公司)。

设计引物并采用PCR技术有效扩增含COX-2-765多态性位点的DNA片段。其中上游引物为：5′-GGCTGTATATCTGCTCTATATGC-3′，而下游引物为：5′-CCGCTTCCTTTGTCCATCAG-3′，且扩增后的片段长度为306 bp。PCR的反应体系为：50 ng(2 μL)样本DNA,上下游引物分别为0.25 μL，6.25 μL 2×Taq PCR MasterMix (0.1 U Taq Polymerase,500 μmol dNTP,20 mmol Tris-HCl,100 mmol KCl,3 mmol MgCl₂)以及2.75 μL的双蒸水。反应结束后放于4 ℃冰箱中暂时存放以进行酶切操作。用特异性限制性内切酶Acil对特异性PCR产物进行酶切处理，最后用2%浓度的凝胶电泳和曝光手段对各个产物进行分析。-765多态性位点在经37℃过夜(约12 h)处理后，CC纯合子基因型表现为单一的1条长为306 bp的DNA片段，而GG纯合子基因型的个体显示为2条分别长为188 bp和118 bp的DNA片段，而GC杂合子基因型表现为3条分别为188、118和306 bp的DNA片段。

Hardy-Weinberg平衡检测用在线免费分析软件进行(http://analysis.bio-x.cn/myAnalysis.php)，SPSS 11.5软件进行数据的统计学分析，计量资料用±s表示，计量资料根据数据是否符合正态分布使用成组t检验或秩和检验，计数资料用χ²检验进行分析，logistic多元回归方法用于多因素归因分析，P<0.05为差异有统计学意义。

经在线免费分析软件分析，COX-2-765多态性位点基因型在2组中均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。由于CC纯合子基因型样本量很少，故本研究将其与杂合子基因型合并后进行分析。采用卡方检验分析COX-2-765多态性位点基因型和等位基因频率与结直肠癌发生的关系，GG纯合子基因型与合并后的CC纯合子和GC杂合子基因型比较，发现其可能导致结直肠癌发生的危险增加，但差异无统计学意义(P>0.05)；等位基因G的频率也显示可能与结直肠癌发生相关，但差异无统计学意义(P>0.05)。

表 1

表 1 COX-2-765位点基因型与等位 基因频率与结直肠癌关系 基因位点 病例组 (n=197) 对照组 (n=210) OR值 95%CI χ2值 P值 基因型 CC+GC 57 74 1.000 GG 140 136 1.336 0.880～2.031 1.851 0.174 等位基 C 因型 G 63 83 1.000 331 337 1.294 0.902～1.856 1.956 0.161

表 1 COX-2-765位点基因型与等位 基因频率与结直肠癌关系

经分层分析后发现COX-2-765位点基因型与结直肠癌的临床病理参数间差异无统计学意义(P>0.05)。

表 2

表 2 分层分析结直肠癌临床病理与COX-2-765位点 基因型关系 项目 CC+GC(n=57) GG(n=140) χ2值 P值 病理类型 腺癌 29 77 0.277 0.599 其他 28 63 TNM分期 I-II期 27 60 0.334 0.563 Ⅲ-Ⅳ期 30 80 肿瘤部位 结肠 26 69 0.219 0.640 直肠 31 71 分化程度 高分化 24 72 1.409 0.235 中或低分化 33 68 淋巴结转移 有 32 78 0.003 0.956 无 25 62 远处转移 有 28 76 0.433 0.510 无 29 64

表 2 分层分析结直肠癌临床病理与COX-2-765位点 基因型关系

环氧化酶(COXs)作为体内重要的一种限速酶，它是前列腺素合成的关键酶类^[6]。目前已知的COX家族主要有2个亚型，结构型酶COX-1和诱导型酶COX-2。研究已揭示了COX-2在结直肠癌发生发展中的重要作用^[7]，COX-2基因启动子区的多态性可能与乳腺癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤发生密切相关，但COX-2基因多态性与结直肠癌发生的关系尚不明确。
本研究虽然发现COX-2的-765基因多态性位点可能与结直肠癌的发病风险相关，但并未见有统计学意义，与西班牙人群中的一项研究结果相似^[8]，显示为-765基因多态与结直肠癌的发病无统计学关联。但Tan W等^[9]发现COX-2-765位点基因型与结直肠癌的发病风险存在正相关关系，COX-2的高表达可能与结直肠癌的侵袭和转移密切相关。在本研究中，未发现COX-2基因多态与显示结直肠癌肿瘤侵袭和转移力相关的临床病理参数相关。分析未发现不同的COX-2-765位点基因型在2组个体中表达有统计学差异(P>0.05)。造成以上结果的原因可能与样本量不足有关。