中国公共卫生  2014, Vol. 30 Issue (8): 1050-1051   PDF    
引用本文
贺雅莉, 黄旭, 花文玲, 黄凤凤. CXCR2和CXCR4对人宫颈癌HeLa细胞作用[J]. 中国公共卫生, 2014, 30(8): 1050-1051.
HE Ya-li, HUANG Xu, HUA Wen-ling, et al. Effects of CXCR2 and CXCR4 on human cervical carcinoma HeLa cells[J]. Chinese Journal of Public Health, 2014, 30(8): 1050-1051.
CXCR2和CXCR4对人宫颈癌HeLa细胞作用
贺雅莉1, 黄旭2, 花文玲1, 黄凤凤1    
1. 福建医科大学附属二院妇产科, 福建 泉州 362000;
2. 福建医科大学附属协和医院病理科
数字出版日期：2014-6-24 9:16
基金项目：福建省泉州市科技局项目（2010Z29）
作者简介：贺雅莉（1973-），女，福建泉州人，副主任医师，本科，主要从事妇产科方面的研究与工作。
摘要：目的 了解 CXCR2 和 CXCR4 对 HeLa 细胞迁移、增殖和分泌 VEGF 的影响。方法 Transwell 检测 HeLa 细胞迁移情况；MTT 法检测 CXCR2 和 CXCR4 对HeLa细胞增殖的影响；ELISA法检测HeLa细胞VEGF表达情况。结果 敲除 CXCR2 或 CXCR4 后，宫颈癌 HeLa 细胞迁移率分别为（2.1±0.8）和（2.6±0.9），未敲除组迁移率为（3.6±1.1），差异有统计学意义（P<0.05）；激活 CXCR2 或 CXCR4 后，HeLa 细胞增殖率分别为（86.1±15.3）% 和（83.9±15.9）%，未激活组HeLa细胞增殖率为（66.7±8.7）%（P<0.05），激活 CXCR2 或 CXCR4 后，VEGF 表达水平分别为（6.84±0.19）和（6.59±0.14） pg/L ，未激活组为（0.74±0.03） pg/L（P<0.05）。结论 HeLa细胞表面高表达的 CXCR2 和 CXCR4 在诱导 HeLa 细胞迁移、增殖和分泌 VEGF 方面具有重要的作用。
关键词： CXCR2     CXCR4     宫颈癌     HeLa细胞    
Effects of CXCR2 and CXCR4 on human cervical carcinoma HeLa cells
HE Ya-li1, HUANG Xu2, HUA Wen-ling1, et al    
Obstetrics and Gynecology Department, the Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Quanzhou, Fujian Province 362000, China
Abstract: Objective To investigate the effects of CXC chemokine receptor-2(CXCR2) and CXC chemokine receptor-4(CXCR4) on migration,proliferation and secretion of vascular endothelial growth factor(VEGF) of HeLa cells.Methods HeLa cell migration was detected with Transwell method.Effects of CXCR2 and CXCR4 on the proliferation of the HeLa cells was detected with 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide(MTT) assay.The expression of VEGF of the HeLa cells was detected with enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results After the knockout of CXCR2 and CXCR4,the mobility of the HeLa cells were 2.1±0.8 and 2.6±0.9,and the rate was 3.6±1.1 for the cells without the knockout,with statistically significant differences(P<0.05 for all).After the activation of CXCR2 and CXCR4,the proliferation rates of the HeLa cells were 86.1±15.3% and 83.9±15.9%,significantly higher than that of the cells without the activation(66.7±8.7%)(P<0.05 for all).In addition,the VEGF expressions of the HeLa cells with the activation of CXCR2 and CXCR4 were 6.84±0.19 pg/L and 6.59±0.14 pg/L and were significantly higher than that of the cells without the activation(0.74±0.03 pg/L)(P<0.05 for all).Conclusion High expressions of CXCR2 and CXCR4 in HeLa cells play an important role in the induction of migration,proliferation and secretion of VEGF of HeLa cells.
Key words: CXCR2     CXCR4     cervical carcinoma     HeLa cell    

宫颈癌是全球妇女健康的主要问题之一，是发展中国家妇女死亡的第二大原因[1, 2]。宫颈癌远处转移是影响患者生存率的重要预后因素[3]。研究表明，CXCR2 和 CXCR4 趋化因子与肿瘤的转移密切相关[4, 5]，关于 CXCR2 和 CXCR4 在宫颈癌中的作用目前研究较少。本研究于2013年采用人宫颈癌HeLa细胞为研究模型，对 CXCR2 和 CXCR4 在宫颈癌中的作用进行初步探讨。现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 主要仪器与试剂

人宫颈癌 HeLa 细胞(中国医学科学院基础医学研究所细胞中心提供)，CXCR2 和 CXCR4 流式细胞术染色抗体(美国 Biolegend 公司)，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)检测试剂盒(北京四正柏生物科技有限公司)，CXCR2 siRNAs 和 CXCR4 siRNAs(美国 Santa Cruz 公司)，电转试剂盒(瑞士 Lonza 公司)，转染荧光对照 BLOCK-iTTM Fluorescent Red Oligo(美国 Invitrogen 公司)，迁移实验用 Transwell 小室(美国 Corning 公司)。 1.3 方法

宫颈癌细胞株 HeLa 用含10%胎牛血清的 RPMI1640 培养基，于 37 ℃、5%CO2 条件下培养。细胞长至80%融合进行传代。流式细胞染色具体方法同文献报道[6]。血清样品获取方法为新鲜采集的外周血 3 000 r/min 离心 10 min。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) 准备血清样品和标准品各 100 μL，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书操作。Transwell 细胞迁移实验及3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H- tetrazolium bromide，MTT]增殖检测具体操作步骤同文献报道[7]。人宫颈癌 Hela 细胞增殖及 VEGF 表达检测中细胞分为4组：未做任何处理组的对照组、激活 CXCR2 组、激活 CXCR4 组和联合激活 CXCR2 和 CXCR4 组。通过 Lonza 电转试剂盒转染人宫颈癌 Hel细胞，从而敲除人宫颈癌Hela细胞中CXCR2和CXCR4的表达，具体转染步骤及转染效率检测方法参见试剂盒说明书。 1.4 统计分析

采用 SPSS 16.0 软件进行统计分析，2组比较采用t检验，率的比较采用χ2检验。P<0.05为差异具有统计学意义。 2 结 果 2.1 CXCR2 和 CXCR4 对宫颈癌 HeLa

细胞迁移的影响 敲除 CXCR2 或 CXCR4 后，宫颈癌 HeLa 细胞迁移率分别为(2.1±0.8)和(2.6±0.9)，与未敲除组(3.6±1.1)的迁移率比差异有统计学意义(t=3.13、2.94，P<0.05)；而联合敲除 CXCR2 和 CXCR4 后，宫颈癌 HeLa 细胞迁移率进一步下降为(1.4±0.9)，与未敲除组(3.6±1.1)的迁移率比差异有统计学意义(t=4.39，P<0.05)。 2.2 CXCR2 和 CXCR4 对宫颈癌HeLa细胞增殖及 VEGF 表达的影响(表 1)

与对照组比较，激活 CXCR2 或 CXCR4 后，HeLa 细胞增殖率(χ2=9.24、6.68，P<0.05)及 VEGF 表达(t=23.76、21.85，P<0.05)均明显升高；同单独激活 CXCR2 组或 CXCR4 比较，联合激活 CXCR2 和 CXCR4 后，HeLa 细胞增殖率(χ2=11.45、9.98，P<0.05)及VEGF 表达(t=9.89、11.23，P<0.05)均升高。

表 1 不同组别宫颈癌Hela细胞增值率及 VEGF 表达情况
3 讨 论

趋化因子的主要作用是趋化细胞的迁移。细胞沿着趋化因子浓度增加的信号向趋化因子源处迁徙。趋化因子及其受体在肿瘤的发生、发展、浸润和转移中具有重要的作用。CXCR2 和 CXCR4 是趋化因子受体家族中重要的成员，研究表明，CXCR2 和 CXCR4 与乳腺癌、胃癌、结直肠癌、胰腺导管细胞癌和肝癌等的生长、浸润和转移密切相关[4]。本研究中通过趋化实验证实，当敲除宫颈癌 HeLa 细胞表面 CXCR2 和 CXCR4 的表达后，宫颈癌患者血清对 Hela 细胞的迁移作用明显降低，提示宫颈癌患者血清对宫颈癌 HeLa 细胞的迁移作用主要通过 Hela 细胞表面高标的 CXCR2 和 CXCR4 发挥，也提示 CXCR2 和 CXCR4 可能在宫颈癌血行转移中发挥重要的作用。CXCR2 和 CXCR4 除在宫颈癌的迁移中具有重要作用外，还发现，激活 CXCR2 和 CXCR4 可促进宫颈癌 HeLa 细胞增殖和 VEGF 的分泌，VEGF 是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子，可在体内诱导血管新生。研究证实，VEGF 与宫颈癌细胞浸润子宫肌层、内膜、盆腔淋巴结转移充分相关[8, 9]。提示，CXCR2 和 CXCR4 还可通过促进宫颈癌新生血管的形成而在宫颈癌的淋巴结转移中发挥重要的作用

参考文献
[1] 陈昂,王莹,张晓敏,等.宫颈癌筛查阳性人群召回率及其影响因素分析[J].中国公共卫生,2014,DOI:1011847/zgggws 2013-29-00-00.
[2] 张勇请,苗劲蔚.宫颈癌筛查及演进肿瘤标记物研究进展[J].中国公共卫生,2013,28(3):374-376.
[3] 孙炜,蔡绍皙,晏小清,等.CXCR7 对 HeLa 细胞增殖、粘附和侵袭能力的影响[J].中国科学技术大学学报,2012,42(4):311-317.
[4] 龚伟强,杜福田,林洪峰,等.CXCR2 在胰腺导管细胞癌中的表达及意义[J].中国现代普通外科进展,2014,17(2):123-125.
[5] 刘辉,周伟平,潘泽亚,等.趋化因子受体 CXCR4 与配体 CXCL12 在肝癌细胞迁移中的作用[J].中华实验外科杂志,2008,25(11):1363-1365.
[6] Mo C,Dai YM,Kang N,et al.Ectopic expression of human MutS homologue 2 on renal carcinoma cells is induced by oxidative stress with interleukin-18 promotion via p38 mitogen-activated protein kinase(MAPK)and c-Jun N-terminal kinase(JNK)signaling pathways[J].J Biol Chem,2012,287(23):19242-19254.
[7] 张建平,吕卫国,谢幸.CXCR4/SDF-1a 对宫颈癌 HeLa 细胞定向迁移及增殖的影响[J].肿瘤防治研究,2008,35(7):495-498.
[8] 刘业六,钱海鑫,张逖,等.趋化因子受体-6小干扰RNA对人肝癌 HCCLM6 细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用[J].中华实验外科杂志,2013,30(12):2577-2579.
[9] 顾勇.血清 VEGF、CA15-3、CA125 和 EGFR 测定在乳腺癌诊断中的价值[J].放射免疫学杂志,2011,24(3):267-268.