中国公共卫生  2014, Vol. 30 Issue (7): 948-951   PDF    
引用本文
任晓峰, 王佳, 颜小銮, 李鹏飞, 沈孝兵. 维生素D受体基因VDR与胃癌易感性关系[J]. 中国公共卫生, 2014, 30(7): 948-951.
REN Xiao-feng, WANG Jia, YAN Xiao-luan, et al. Relationship between VDR genetic polymorphisms,environmental risk factors and gastric cancer susceptibility：a case-control study[J]. Chinese Journal of Public Health, 2014, 30(7): 948-951.
维生素D受体基因VDR与胃癌易感性关系
任晓峰, 王佳, 颜小銮, 李鹏飞, 沈孝兵     
东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室, 江苏 南京 210009
数字出版日期：2014-6-5 9:52.
基金项目：江苏省自然科学基金（BK2009283）
作者简介：任晓峰（1988- ），男，山西吕梁人，硕士在读，研究方向：环境流行病学。
通讯联系人：沈孝兵,E-mail：xb.shen@seu.edu.cn
摘要：目的 探讨江苏省南京市汉族居民维生素D受体（VDR）基因多态性与胃癌易感性关系，并分析其与环境危险因素的交互作用。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术对585例胃癌患者及其对照进行VDR基因第8外显子AapI位点、第9外显子TaqI位点的单核苷酸多态性（SNP）分析，分析VDR基因多态性与胃癌易感性的关系。结果 病例组VDR ApaI A和a等位基因频率为40.60%和59.40%，对照组分别为41.54%和58.46%，差异无统计学意义；病例组VDR TaqI T和t等位基因频率分别为96.90%和3.10%，对照组分别为93.50%和6.50%，差异有统计学意义（χ2=6.676，P<0.05）；病例组VDR ApaI的aa、Aa及AA基因型频率分别为33.16%、52.48%和14.36%，对照组分别为29.92%、57.09%和12.99%，差异无统计学意义；病例组VDR Taq I的TT、Tt及tt基因型频率分别为91.97%、7.86%和0.17%，对照组分别为87.35%、12.31%和0.34%，差异有统计学意义（χ2=6.757，P=0.034）；VDR ApaI和TaqI与消化系统疾病史、肿瘤家族史、暴饮暴食、新鲜水果摄入少、精神压抑有交互作用。结论 VDR TaqI多态性与胃癌易感性相关。
关键词： 维生素D受体(VDR)     基因多态性     胃癌     病例-对照研究    
Relationship between VDR genetic polymorphisms,environmental risk factors and gastric cancer susceptibility：a case-control study
REN Xiao-feng, WANG Jia, YAN Xiao-luan, et al    
Key Laboratory of Environmental Medicine Engineering, Ministry of Education, School of Public Health, Southeast University, Nanjing, Jiangsu Province 210009, China
Abstract: Objective To explore the relationship between vitamin D receptor(VDR)genetic polymorphisms and gastric cancer susceptibility and the interaction between VDR and environmental risk factors.Methods A 1:1 matched case-control study was carried out in Nanjing area.Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms(PCR-RFLP)technology was used to determine the genetic polymorphisms of VDR and epidemiology data on environmental exposure were collected.Results The frequencies of VDR-ApaI A and a allele in the case group were 40.60%and 59.40%,while those in the control group were 41.54%and 58.46%,without significant differences between the two groups.The frequencies of VDR-TaqI T and t allele in the case group were 96.90%and 3.10%,while those in the control group were 93.50%and 6.50%,without significant differences between the two groups(χ2=6.676,P<0.05).The frequencies of VDR-ApaI genotype aa,Aa,and AA in the case group were 33.16%,52.48%,and 14.36%,while those in the control group were 29.92%,57.09%,and 12.99%,respectively,without significant differences between the two groups.The frequencies of VDR-TaqI genotypes TT,Tt,and tt in the case group were 91.97%,7.86%,and 0.17%,while those in the control group were 87.35%,12.31%,and 0.34%,respectively,with significant differences between the two groups(χ2=6.757,P<0.05).There were interactions between genotype of VDR and digestive system disease history,family history of tumor,having less fruit,and depression.Conclusion There are associations between VDR poly-morphisms and gastric cancer.
Key words: vitamin D receptor     genetic polymorphisms     gastric cancer     case-control study    

胃癌是常见的癌症，是世界上癌症相关死亡的主要原因之一[1]。近几十年来，虽然其发病率和死亡率已经开始下降，但据估计，2008年全球共有989 600例新发胃癌患者和738 000人死亡[2]。外科手术、化疗和放疗等多元治疗手段可以控制癌症减少转移，但是对进展期肿瘤仍然无有效控制办法[3]。本研究采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism PCR-RFLP)方法分析维生素D受体(vitamin D receptor，VDR)基因 AapI、TaqI限制性内切酶位点多态性在江苏省南京市人群中的分布及其与环境危险因素的交互作用，初步评价VDR基因多态性与胃癌易感性的关系。 1 对象与方法 1.1 对象

来源于2004—2010年在东南大学附属中大医院、南京鼓楼医院、江苏省肿瘤医院经病理学诊断确认的原发胃癌患者，共计585例。均自愿参加实验且签署知情同意书。对象年龄为30~80岁，平均年龄为(61.77±12.20)岁。其中男性429例，占73.3%；女性156例，占26.7%。按1∶1配比，随机选取与病例同性别、同居住地、年龄差别<5岁的非消化系统疾病、非肿瘤患者为对照组，平均年龄(61.59±12.18)岁。 1.1 对象 1.2 主要仪器与试剂

Master Cycler Gradient PCR 仪(德国Hamburg公司)，Chemi Imager5500图像分析仪(美国UVP公司)；蛋白酶K(南京创瑞生物工程公司)，Taq DNA 聚合酶、VDR基因 AapI、TaqI限制性内切酶及引物(上海生工生物公司)，三磷酸脱氧核苷酸(deoxy ribonucleoside triphosphate dNTPs，南京捷倍思生物公司)。 1.3 调查方法

根据文献结合南京地区人群和环境特点，再结合本课题组以往研究结果设计调查表[4]，由统一培训的调查员统一培训进行面访调查。调查内容包括性别、年龄、消化系统病史、消化系统家族史、肿瘤家族史、有毒有害物质接触史、烟酒嗜好、饮食因素、心理等相关指标。烟酒嗜好、饮食因素、心理等的相关判定标准参照文献[5]。 1.4 VDR基因型检测方法 1.4.1 外周血基因组DNA提取

抽取患者外周血3 mL，乙二胺四乙酸抗凝后，加入双蒸水使红细胞破裂；加磷酸盐缓冲液清洗后，加入抽提液及蛋白酶K裂解白细胞，37 ℃水浴过夜；加入醋酸钠沉淀蛋白质，离心后取上清加入异丙醇抽提DNA；75%乙醇清洗后加Tris-HCL乙二胺四乙酸缓冲液溶解，经DNA定量仪测定后于-20 ℃保存备用。 1.4.2 引物设计和合成

参考文献[5]合成引物，引物由上海生工生物公司合成，扩增引物序列如下：5′-CAG AGC ATG GAC AGG GAG CAA G-3′，5′-GCA ACT CCT CAT GGC TGA GGT CTC A-3′。 1.4.3 PCR扩增体系与基因型分析

经过通用PCR扩增反应，酶切产物于3.0%琼脂糖凝胶电泳分析VDR扩增后产生740 bp的片段，ApaⅠ酶切后分为3种基因型，aa型为529 与211 bp 2条片段，AA只有740 bp 1条片段，Aa为740、529与211 bp 3条片段。TaqⅠ酶切后分为3种基因型，tt型为291、247和202 bp 3条片段，TT型为493和247 bp 2条片段，Tt型为493、291、247和202 bp 4条片段。 1.5 统计分析

采用Epi Data 3.0建立数据库，经逻辑纠错后，应用SPSS 13.0 软件进行分析，主要采用logistic回归分析及多因素交互作用分析，计算OR值及95%CI。 2 结 果 2.1 不同组别对象环境因素比较(表 1)

病例组有消化系统病史、肿瘤家族史、暴饮暴食、三餐不定时、新鲜水果摄入量少和精神压抑率均高于对照组(P<0.05)。

表 1 不同组别对象环境因素比较
2.2 环境危险因素多因素条件logistic回归分析(表 2)

对环境危险因素采用多因素条件logistic回归模型进行拟合，以是否患癌症为因变量(是=1，否=0)，纳入标准为0.05，排除标准为0.10。结果表明，南京地区汉族人群中胃癌的环境危险因素有消化系统疾病史、肿瘤家族史、暴饮暴食、三餐不定时、新鲜水果摄入量少、精神压抑等6项。

表 2 胃癌环境因素多因素条件logistic回归分析
2.3 VDR基因型、等位基因频率分布及与胃癌关系

应用Hardy-Weinberg 定律进行检验，2组均达到遗传平衡，说明资料群体代表性良好。病例组VDR ApaI限制性内切酶位点的A和a等位基因频率分别为40.60%(475/1 170)和59.40%(695/1 170),对照组VDR AapI限制性内切酶位点的A和a等位基因频率分别为41.54%(486/1 170)和58.46%(684/1 170)，经χ2检验，病例组与对照组差异无统计学意义(χ2=6.676，P=0.644)。病例组VDR TaqI限制性内切酶位点的T和t等位基因频率分别为96.90%(1 134/1 170)和3.10%(36/1 170)，对照组VDR TaqI限制性内切酶位点的T和t等位基因频率分别为93.50%(1 122/1 170)和6.50%(48/1 170)，差异有统计学意义(χ2=6.676，P<0.05)。 2.4 VDR基因型与胃癌关系(表 3)

TaqI的3种基因型分布在病例组和对照组间差异有统计学意义(χ2=6.757，P<0.05)。

表 3 VDR基因型与胃癌关系
2.5 VDR基因型与环境危险因素的交互作用(表 4)

VDR ApaI与消化系统疾病史、肿瘤家族史、暴饮暴食、精神压抑有交互作用，且VDR ApaI与消化系统疾病史、暴饮暴食、精神压抑共同作用增加胃癌的发病率；VDR TaqI与消化系统疾病史、肿瘤家族史、新鲜水果摄入少、精神压抑有交互作用，且VDR TaqI与肿瘤家族史、新鲜水果摄入少、精神压抑共同作用增加胃癌的发病率。

表 4 环境危险因素与VDR基因多态性在胃癌发病中的交互作用
3 讨 论

胃癌的发生与遗传关系密切，基因多态性与胃癌易感性的关系是研究关注的热点。单独突变基因型或者单独的短时间、低剂量暴露对肿瘤危险性并不明显，但是携带突变基因者而又暴露于环境危险因素后可能发生肿瘤的危险性极大增高[6]。基因-基因、基因-环境间交互作用的定量关系成为研究的热点。交互作用的分析更真实地反映胃癌的危险因素在胃癌发生中所起的作用。

VDR基因与钙磷代谢有关，有报道表明与骨质疏松[7]有关，与乙型肝炎病毒[8]和某些肿瘤[9, 10, 11]也存在关联，但目前其与胃癌关系报道较少，所以，本研究对VDR基因的遗传多态性进行分析，结合环境危险因素，对其在胃癌发生中的交互作用加以探讨，以期为胃癌防治策略的制定及相关研究积累资料。VDR基因位于常染色体12q12-14，基因组DNA全长45 kb，由9个外显子和8个内含子组成。目前VDR基因多态性位点的研究主要集中第8内含子、第9外显子和转录起始位点，相应的限制性内切酶位点有ApaI、TaqI、BsmI、ForkI。有研究表明，VDR 水平与人类癌细胞株的分化程度有关，Shabahang等[12]和郗永义等[13]研究表明，人类肿瘤组织细胞与其正常细胞相比VDR水平较低。随着研究的深入，环境危险因素的流行病学调查和遗传基因多态性研究资料数据的丰富、完善。越来越多的证据表明，环境危险因素与遗传危险因素在胃癌发生、发展过程中存在着交互作用[14]。

本研究表明，VDR基因Taq I多态性与胃癌的易感性存在一定的相关性。VDR基因ApaI多态性与胃癌的关系仍需扩大样本量进一步研究。

参考文献
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