研究表明，乳腺浸润性微乳头状癌(invasive micropapillary carcinoma,IMPC)是乳腺上皮性肿瘤的一种独立的组织学类型，属于高淋巴管侵及率、高淋巴结转移率及预后极差的乳腺癌病理分型，其生物学行为及特殊的临床表现受到国内外研究者高度重视^{[1, 2, 3]}。细胞免疫机制在乳腺癌发生、进展中可能扮演非常重要的角色^{[4, 5, 6]}。为了解IMPC的免疫学特点，本研究收集IMPC女性患者外周血及病灶组织，观察分析辅助性T细胞(CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/CD₈⁺)和调节性T细胞(CD⁴CD25⁺ Treg、CD₊⁴ CD₂₅⁺ Foxp3⁺Treg)的表达水平，并与浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)患者以及乳腺良性疾病女性患者进行比较，了解IMPC女性外周血及病灶组织中调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达的一般规律性，现将结果报告如下。 1 对象与方法 1.1 对象

(1)IMPC患者(IMPC组)：连续选择2012年1—12月辽宁省肿瘤医院乳腺科住院IMPC女性患者21例，年龄47～69岁，平均(55.92±13.40)岁。纳入标准：①经临床及病理确诊；②初次发病，尚未接受任何治疗；③签署知情同意书，自愿参加本研究观察。排除标准：①近期患有急、慢性感染性疾病患者；②肝、肾功能异常者；③近期接受过激素或免疫抑制剂治疗。(2)内对照患者(IDC组)：选择同期住院诊断为乳腺浸润性导管癌(IDC)女性患者24例，年龄42～65岁，平均(54.77±12.49)岁。纳入标准相同于IMPC组的①、③及全部排除标准。(3)外对照组患者(对照组)：选取同期住院确诊为乳腺良性疾病女性患者27例，年龄40～71岁，平均(55.18±12.65)岁。纳入标准相同于IMPC组的③及全部排除标准。3组对象年龄分布接近，平均年龄比较差异无统计学意义，P均>0.05。 1.2 方法 1.2.1 样品采集

(1)外周血血清：同时抽取3组患者者术前空腹静脉血8 mL，高速离心 10 min 后，分离血清，保存于超低温冰箱待检；(2)病灶组织上清液：采集各组患者经手术切除肿瘤病灶组织50 mg，以冷生理盐水冲洗，制备组织匀浆，离心后取上清液，保存于超低温冰箱待检。 1.2.2 T细胞表达水平测定

采用美国FC-500-MPL流式细胞仪进行外周血血清及病灶组织上清液T细胞表达水平测定。其中调节性T细胞CD⁴CD25⁺ Treg、CD⁴₊ CD₂₅⁺ Foxp3⁺Treg使用EBioscience公司的试剂盒检测；辅助性T细胞 CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/CD₈⁺使用海丰翔生物科技有限公司的试剂盒检测。分别按各试剂盒使用说明书规定步骤进行操作。 1.3 统计分析

使用SPSS 12.0 软件进行数据分析，T细胞表达水平采用x±s表示，2组间比采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。 2 结 果 2.1 外周血辅助性T细胞表达水平比较(表 1)

结果表明，IMPC组外周血CD₃⁺、CD₄⁺水平、CD₄⁺/CD₈⁺比值均明显低于IDC组及对照组，CD⁸₊水平则明显高于后2者(均P<0.05或P<0.01)。

表 1

表 1 外周血辅助性T细胞表达水平比较(%，x±s) 组别 例数 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ IMPC组 21 53.82±6.15ad 25.67±3.24bd 32.49±4.64ad 1.35±0.43ac IDC组 24 64.29±7.54 33.70±4.72 29.5±3.63 1.42±0.50 对照组 27 67.48±8.94 38.12±5.02 25.60±3.15 1.59±0.61 注：与对照组比较：a P<0.05，b P<0.01；与IDC组比较：c P<0.05，d P<0.01。

表 1 外周血辅助性T细胞表达水平比较(%，x±s)

结果表明，IMPC组外周血CD⁴CD25⁺ Treg 和CD₄⁺CD₂₅⁺ Foxp3⁺Treg表达水平均明显高于IDC组及对照组(均P<0.05或P<0.01)。

表 2

表 2 外周血调节性T细胞表达水平比较(%，x±s) 组别 例数 CD+ 4CD25+Treg CD4+ CD25+Foxp3+Treg IMPC组 21 5.57±1.31ab 3.42±0.69ab IDC组 24 4.26±1.12 2.57±0.63 对照组 27 3.29±0.40 1.98±0.21 注：与对照组比较：a P<0.05;与IDC组比较：b P<0.01。

表 2 外周血调节性T细胞表达水平比较(%，x±s)

结果表明，IMPC组外周血CD₃⁺、CD₄⁺水平、

CD₄⁺/CD₈⁺比值均明显低于IDC组及对照组，而CD₈⁺水平则明显高于后2者(均P<0.05或P<0.01)。

表 3

表 3 病灶组织辅助性T细胞表达水平比较(%，x±s) 组别 例数 CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ IMPC组 21 49.53±6.04ac 24.19±3.22bc 32.70±4.58ac 1.31±0.46ac IDC组 24 60.24±7.33 31.79±4.26 27.30±3.85 1.46±0.43 对照组 27 66.09±8.25 37.31±5.64 24.59±3.30 1.57±0.57 注：与对照组比较：a P<0.05，b P<0.01；与IDC组比较：c P<0.01。

表 3 病灶组织辅助性T细胞表达水平比较(%，x±s)

结果表明，IMPC组病灶微环境CD⁴CD25⁺Treg 和CD₄⁺ CD₂₅⁺ Foxp3⁺Treg表达水平均明显高于IDC组及对照组(均P<0.05或P<0.01)。

表 4

表 4 病灶组织调节性T细胞表达水平比较(%，x±s) 组别 例数 CD4+ CD25+Treg CD4+ CD25+Foxp3+Treg IMPC组 21 6.53±1.71bc 3.11±0.85ad IDC组 24 5.31±1.37 2.55±0.68 对照组 27 4.49±1.02 2.06±0.45 注：与对照组比较：a P<0.05，b P<0.01；与IDC组比较：c P<0.05，d P<0.01。

表 4 病灶组织调节性T细胞表达水平比较(%，x±s)

一般认为，乳腺癌发生、发展与人体细胞免疫水平有关，其中T细胞、NK细胞和巨噬细胞都是较重要的效应细胞。CD₈⁺属于杀伤性T 细胞，其被激活依赖于CD₄⁺分泌Th 2种细胞因子(Th1和Th2)，Th1主司分泌IL-2、TNF-α、IFN-γ，统帅免疫及迟发型超敏反应；Th2分泌IL-4及IL-10，介导体液免疫反应。CD⁴CD25⁺ Treg属于CD⁴₊中另一种独特亚型，在维持免疫环境平衡、调节肿瘤免疫及诱导移植物耐受中发挥作用，CD₄⁺ CD₂₅⁺Foxp3⁺Treg属于X染色体编码中Foxp3转录因子，为CD⁴CD25⁺ Treg发育、成长和执行功能所必需，为CD⁴CD25⁺ Treg特异性标识。人内的各种实体肿瘤中(包括乳腺癌)Treg绝对数目均呈显著增加，且与病情进展及预后指标有密切联系^{[7, 8]}。

本研究结果表明，IMPC患者外周血及病灶组织CD₃⁺、CD₄⁺表达水平及CD₄⁺/CD₈⁺比值不但明显低于乳腺良性疾病患者，而且也明显低于IDC患者。IMPC患者外周血及病灶组织的CD⁴CD25⁺ Treg、CD₄⁺ CD₂₅⁺Foxp3⁺Treg表达水平也是既高于对照组，也明显高于IDC组。近年来的研究显示,乳腺浸润性微乳头状癌(IMPC)在病理形态学上表现为癌细胞排列呈微小乳头状或小腺管状,并不含纤维脉管束^{[1, 2]}；生物学行为具有低患病率、成长迅速、近期死亡率及复发率均较高；肿瘤转移规律为高淋巴管侵袭性及高淋巴结转移率^[3]。特殊型IDC是一种较常见乳腺癌病理组织学类型，约占40%~ 70%，其具有高患病率、近期疗效好及存活期长等特点。本研究结果提示，IMPC患者体内细胞免疫失衡，存在明确的调节性和辅助性T细胞异常表达，与国内外相关同类报道^{[9, 10, 11, 12, 13]}一致。表明IMPC外周血及病灶微环境处调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达可能与IMPC 的低发病率、高淋巴结转移率及具有特殊病理形态学特征有一定联系，可以作为IMPC免疫学诊断、评估治疗疗效标识，并可为制定主动免疫治疗方案指明方向。