朱砂(cinnabar)是一种矿物类中药，其主要成分是硫化汞(HgS)，含量不低于96%。朱砂具有清心镇惊、安神、明目、解毒之功效，主治心悸易惊、失眠多梦、癫痫发狂、小儿惊风、视物昏花、口疮、喉痹、疮疡肿毒^[1]。朱砂在临床上广泛应用，2010年版《中国药典》收录的中成药制剂中，含朱砂的制剂多达59种，占总数的5.6%。近年来，由于不科学合理使用朱砂而引起的不良反应或中毒事件时有发生^[2]，主要与汞蓄积有关。汞是一种有毒重金属，可对多种脏器功能造成影响^{[3, 4]}。朱砂属无机汞，而肝脏不仅是药物代谢的主要场所，也是药物毒性损害的重要靶器官之一。本实验通过大鼠亚慢性染毒模型探讨朱砂对肝脏的毒性效应，为临床上应合理使用朱砂提供参考依据。 1 材料与方法 1.1 试剂与仪器

朱砂(产地贵州铜仁，水飞炮制品，HgS>98%)。汞标准液(1 000 μg/mL，国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院)。CEM密闭微波消解系统(美国培安科技公司)；AFS-230E双道原子荧光光度计(北京科创海光仪器有限公司)；石蜡切片机(LEICA-RM2135，德国莱卡)；全自动生化分析仪(7180型，日本HITACHI公司)。高速冷冻离心机(TGL20M，湖南凯达科学仪器有限公司)，超低温冰箱(DW-86L386，青岛海尔特种电器有限公司)。 1.2 实验动物与分组

健康SD大鼠，清洁级，雌雄各半，体重(160±20)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK(京)2007-0001。将24只大鼠随机分为对照组和朱砂组，每组12只，雌雄各半。朱砂组以每天1.0 g/kg朱砂(以0.5%羧甲基纤维素钠配成混悬液)灌胃给药，连续12 w；对照组以等体积的溶剂灌胃。2组动物分别给药8、12 w结束后次日处死半数(雌雄各半)，取血液、肝脏测定相关指标。 1.3 检测指标及方法

(1)一般状况观察：染毒期间观察大鼠的行为活动及外观体征，每周称量体重。(2)汞含量测定：取肝组织0.3～0.5 g(或血液0.5 mL)，放入消解管中，加6 mL浓HNO₃，2 mL H₂O₂过夜，用微波消解仪消解后，定容至10 mL。用氢化物发生-原子荧光光度法测其汞含量，并计算血液和肝脏组织中实际汞含量。仪器条件：灯电流10 mA，负高压250 V，原子化器高度10 mm，载气流量500 mL/min，屏蔽器流量1.0 L/min，测定方式为标准曲线法，读数方式为峰面积，读数时间10 s，延迟时间1s，空白判别值为2，重复次数为3次。(3)血清生化指标测定:动物麻醉后腹主动脉取血，分离血清。用全自动生化分析仪测定丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)，天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)，总蛋白(total protein,TP)，白蛋白(albumin,ALB)，总胆汁酸(total bile acid,TBA)含量。(4)脏器系数测定：肝脏游离后，用冷生理盐水冲洗肝脏表面的血污，滤纸吸干表面水分，称量肝脏湿重，计算肝/体百分比。(5)组织病理学观察：取部分肝组织，用10%中性缓冲福尔马林固定，常规包埋、切片，进行苏木精染色，光镜下观察病理变化。 1.4 统计分析

数据以x±s表示，采用SPSS 17.0软件进行统计，用独立样本t检验进行组间比较，检验水准α=0.05。 2 结 果 2.1 一般状况

实验期间所有动物一般状况良好，体重均正常增长。每天灌胃后，朱砂组大鼠粪便呈红色。未见其他明显异常。 2.2 血液、肝组织中的汞含量(表 1)

连续给予朱砂8、12 w后，大鼠血液、肝脏组织的汞含量均明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表 1

表 1 连续给予朱砂对大鼠血液、肝脏中汞含量的影响(x±s，n=6) 组别 血汞(μg/L) 肝汞(μg/g) 8 w 12 w 8 w 12 w 对照组 7.523±3.850 6.289±3.258 0.055±0.020 0.045±0.028 朱砂组 13.843±3.928 14.038±4.446 0.107±0.051 0.147±0.065 t 值 2.814 3.443 2.361 3.544 P值 0.018 0.006 0.040 0.005

表 1 连续给予朱砂对大鼠血液、肝脏中汞含量的影响(x±s，n=6)

给药8 w后，朱砂组大鼠肝组织中的AST含量为(130.17±32.36)U/L，明显高于对照组(95.83±17.86)U/L，差异有统计学意义(t=2.276，P=0.046)。给药12 w后，朱砂组大鼠TP含量为(56.70±3.11)g/L，高于对照组(49.95±5.20)，差异有统计学意义(t=2.729，P=0.021)；ALB含量为(26.72±1.98)g/L，高于对照组(23.22±2.94)g/L，差异有统计学意义(t=2.420，P=0.036)。其余指标组间差异无统计学意义(P＜0.05)。 2.4 朱砂对大鼠肝脏系数的影响

连续给药8、12 w后，朱砂组动物肝脏系数分别为(3.09±0.21)%、(2.76±0.28)%，对照组分别为(3.11±0.22)%、(2.57±0.24)%，差异均无统计学意义(8 w：t=0.162，P=0.874；12 w：t=1.236，P=0.245)。 2.5 组织病理学改变

所有大鼠肝脏外观均未见明显异常。光镜下，对照组肝组织染色均匀，细胞排列整齐；朱砂组于给药8 w后，可见轻度肝细胞肿胀、少量空泡变性、水样变性、少量炎性细胞浸润；给药12 w后，空泡变性较8 w相比程度加重，其他病变程度与8 w相似。 3 讨 论

朱砂又称丹砂、赤丹，大红色，其主要成分HgS难溶于水，其在胃肠道内的吸收率不足0.2%^[5]，口服朱砂多数随粪便排出。朱砂中除HgS外，还含有少量游离汞和可溶性汞盐，肠道中的弱碱环境和富S^2-环境对朱砂具有较大的促溶作用，在肠道菌群作用下，朱砂可转变为可溶性的多硫化汞配合物，可被吸收入血,故连续服用朱砂可使血汞含量升高^{[6, 7]}。血液中的汞可与红细胞、含巯基蛋白等结合并转运至机体各组织。机体内的汞排泄很慢，可与含巯基蛋白络合，形成稳定的络合物而在各组织中蓄积。本研究发现，大鼠在重复给药后肝汞含量明显升高，表明有汞在肝脏内蓄积。汞是朱砂毒性的真正来源^[6]。

本研究发现，重复给予朱砂可使肝组织发生一定的病理改变。尽管朱砂肝毒性远小于等汞含量的氯化汞和甲基汞^[8]，但随着用药剂量和时间的增加，则可引起肝脏损害。有文献 ^{[9, 10, 11, 12]}显示，以0.3 g/kg朱砂对小鼠单次给药肝脏未见明显病理改变，同等剂量连续44 d重复给药仅可见轻度肝细胞肿胀，以16 g/kg朱砂对小鼠单次给药和以1.8 g/kg朱砂对大鼠连续7天重复给药可见肝细胞肿胀。故朱砂是否引起肝脏损害以及损害程度与用药剂量和时间有关。本研究条件下，朱砂尚未引起大鼠肝功能的明显损害。与对照组相比，朱砂组ALB水平升高，可能是继发于血汞升高的反应性合成增加所致。ALB是一种多功能的转运蛋白，研究显示人血清白蛋白与多硫化汞有很强的结合能力，可能与血汞的储存和转运有关^[6]。

综上，长期过量服用朱砂可引起肝脏汞蓄积，造成肝脏损伤。临床上应科学合理使用朱砂以减少肝损害的发生。